了解黄芪注射液对内皮细胞损伤的保护作用及其机制 360论文网

了解黄芪注射液对内皮细胞损伤的保护作用及其机制 本文摘自：实用肝脏病杂志 网址：http://www.bestlunwen.net/a/sf/0502120J2012.html 　　近年来研究证明，血管内皮细胞损伤是多种心血管疾病的共同病理生理学基础，是动脉粥样硬化的始动环节。有效保护血管内皮细胞是预防和治疗心血管疾病的关键。黄芪注射液是由豆科植物黄芪提取制成的灭菌水溶液，主要含有黄酮、皂甙、多糖等多种活性成分，有补气升阳、利水消肿、益气固表之功效，因此在心血管疾病防治方面应用广泛。近来研究发现，黄芪对动脉粥样硬化性疾病有一定 的疗效。但因证据多来自临床试验或活体动物研究，且缺乏黄芪在细胞水平上对血管内皮作用的研究报道，故其治疗动脉粥样硬化性疾病的具体机制尚未完全明了。本研究采用血管内皮细胞低氧复氧模型，观察黄芪注射液对血管内皮细胞损伤的作用及机制，以期为临床用药提供依据。现 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料及其来源DMEM 培养基， GIBCO 公司生产。 超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）检测试剂盒，南京建成生物工程研究所生产。黄芪注射液，成都地奥九泓制药厂生产，批号:0106125。MCO-17AIC型二氧化碳培养箱，日本Sanyo公司生产。CK2型倒置相差显微镜，日本Olympus公司生产。 　　1.2 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）原代培养 在无菌条件下取健康产妇正常分娩胎儿脐带25～30 cm，用Hank液冲洗干净，灌入1 g/L的Ⅰ型胶原酶，在37 ℃温箱中培养18～20 min，收集消化液，1 000 r/min离心10 min，弃上清，加入含体积分数0.20小牛血清和生长因子的DMEM培养液制成细胞悬液，置37 ℃、含体积分数0.05 CO2 培养箱中培养，24 h换液，待细胞长成融合状态后行细胞鉴定。血管内皮细胞特征:相差显微镜下呈单层铺路石样排列，用免疫法测定第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。确定为内皮细胞后再传代培养，取第3代生长良好的血管内皮细胞用于实验。 　　1.3 低氧复氧模型的制备 将培养有内皮细胞的24孔培养板放入一可密闭容器中，向该容器内持续通入低氧混合气体（含体积分数0.05 CO2 、体积分数0.95 N2 ）5 L/min，置换容器中的氧气。待该容器内氧气体积分数低于 0.01后 ，停止通入低氧混合气体。密闭该容器，置于37 ℃细胞培养箱中培养1 h，再打开容器，将24孔培养板置于37 ℃、含体积分数0.05 CO2 培养箱进行复氧处理1 h。 　　 　　1.4 实验分组 实验共分3组，每组6例。①对照组:置于 37 ℃ 含体积分数0.05 CO 2 培养箱中进行常规培养;②低氧复氧组:制备低氧复氧模型;③药物干预组:又分5个浓度组，每组6例，在培养液中分别加入终浓度为5、10、20、40、60 mg/L的黄芪注射液，预处理12 h，然后同低氧复氧组处理。 　　1.5 检测指标及方法 　　1.5.1乳酸脱氢酶（LDH）、SOD活性和MDA含量的测定 收集各组培养细胞上清液，按每份1 mL分装，置-70 ℃冻存备用。LDH、SOD和MDA测定分别用全自动生化分析仪、黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法，具体测定步骤按仪器和试剂盒说明书进行。 　　1.5.2台盼蓝摄取率测定 提取完上清液后，将各组多孔板中的液体弃去，用25 g/L胰蛋白酶消化内皮细胞后，再加入含体积分数0.20小牛血清的 DMEM培养液，制成细胞悬液，细胞悬液和40 g/L台盼蓝混合（9∶1），4 min后计数蓝染细胞和未蓝染细胞。计算台盼蓝摄取率。台盼蓝摄取率=蓝染细胞数÷（蓝染细胞数+未蓝染细胞数）×100%。 　2 结果 　　低氧复氧组与对照组比较，细胞培养液中LDH活性、MDA含量及内皮细胞台盼蓝摄取率升高，SOD活性减低，差异均有显著意义（ F=34.97～ 129.98 ，q=14.43～27.11，P <0.01）。药物干预组与低氧复氧组相比较，细胞培养液中LDH活性、MDA含量及内皮细胞台盼蓝摄取率降低，SOD活性升高，差异均有显著意义（ q=2.91～26.61，P < 0.05、0.01 ）。黄芪注射液预处理浓度40 mg/L时LDH活性、SOD活性、MDA含量与对照组差异无显著性（ q= 0.49～0.94，P >0.05）;预处理浓度 60 mg/ L与40 mg/L相比，LDH活性、SOD活性、MDA含量变化均不明显。 　　3 讨论 血管内皮位于血液与血管壁的界面，直接受到血液中各种理化因子的刺激，同时，内皮细胞本身是高代谢、多功能细胞，对刺激的敏感性高，因而最易被损伤。氧化应激，即活性氧蓄积引起的脂质过氧化是内皮细胞损伤的一个重要机制。活性氧的氧化能力极强，易与细胞膜及亚细胞膜中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，造成细胞损伤，引起细胞结构和功能的异常。正常情况下，内皮细胞所具有的抗氧化机制能清除活性氧，维持细胞氧化还原自稳态，因而不会发生有害作用。本文采用体外培养内皮细胞，通过低氧复氧造成内皮细胞损伤，观察黄芪注射液对内皮细胞低氧 复氧损伤的保护作用及其机制。结果显示，黄芪注射液能有效降低低氧复氧所致的HUVECs培养液中LDH活性升高、SOD活性降低、MDA含量升高和细胞台盼蓝摄取率升高。REN等研究显示，低氧复氧条件下培养的人大隐静脉内皮细胞SOD活性明显低于常氧条件下的内皮细胞，本文结果与之相符。低氧复氧时由于SOD活性降低，活性氧生成增加，大量的活性氧氧化细胞膜双层磷脂结构中的重要脂类，生成多种脂质过氧化物，导致细胞膜结构受损，引起细胞膜通透性增高甚至细胞死亡。MDA为脂质过氧化反应的中间产物，常被作为观察活性氧生成和膜损害的指标;LDH是存在于内皮细胞质中的一种酶，在细胞损伤时，由于细胞膜通透性增高，LDH进入细胞培养液;台盼蓝不能穿过活细胞膜，死亡细胞的膜通透性增加，台盼蓝能够进入细胞内，使细胞蓝染，台盼蓝摄取率可反映细胞的死亡率，故本文低氧复氧组细胞培养液中LDH活性升高，MDA含量增高，血管内皮细胞台盼蓝摄取率升高。已有研究表明，黄芪中的活性成分如黄芪总黄酮、皂甙均具有清除活性氧，发挥抗脂质过氧化作用。黄芪注射液是由豆科植物黄芪提取制成的灭菌水溶液，主要含有黄酮、皂甙、黄芪苷Ⅳ、多糖、生物碱、氨基酸及微量元素等多种活性成分，可能通过抑制低氧复氧后SOD减少，加强HUVECs清除氧自由基能力，使HUVECs脂质过氧化程度减轻，故培养液中MDA含量下降，LDH活性降低，内皮细胞台盼蓝摄取率减少。此外，本文结果还显示，当黄芪注射液浓度为60 mg/L时，其抗氧化能力并不能明显升高。已有报道指出，黄芪不同活性成分的作用效果不一样，黄芪总黄酮、总皂甙对脂质过氧化物生成的抑制作用 与其浓度呈正比;而黄芪多糖的作用与前两者则有较大差异，作用强度随其浓度升高而降低，其机制未完全明确。黄芪多糖可增强机体免疫力，免疫活性细胞在杀灭、排斥入侵机体的异物时，主要依靠受激活后产生的大量自由基发挥作用。提示黄芪注射液抗低氧复氧导致的内皮细胞脂质过氧化作用与药物的成分和浓度有一定的关系，这是一个值得进一步深入研究的问题。综上所述，黄芪注射液可以通过提高血管内皮细胞抗氧化损伤能力，而对抗低氧复氧对内皮细胞的损伤作用。为临床上应用黄芪注射液预防动脉粥样硬化性疾病提供了理论依据。 360论文网 国家级医学核心期刊论文发表 联系方式：QQ 4006587789 电话 4006-587-789