反相高效液相色谱法测定头孢西酮钠原料药的含量及有关物质

[检验医学] 反相高效液相色谱法测定头孢西酮钠原料药的含量及有关物质� 王康俊 摘要:目的 � 建立头孢西酮钠含量测定及有关物质测定的 HPLC 法。 � 方法 � 反相高效液相色谱法, 流动相: 0�2mol/ L 的磷酸二氢钾:乙腈= 85: 15; 检测波长为 280; 流速为1ml/ min; 进样量: 20�l。 � 结果 � 头孢西酮钠在 0�0804 ~ 0�294mg/ ml浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好, r= 0�99999,最低检限为 0�02ng,本方法的重复性与精密性良好 ( RSD% = 0� 23% , n= 6) 经专属性试验, 可知杂质峰与主峰分离良好, 理论塔板数均大于 4000, 分离度均大于 3。该方 法的平均回收率为 100�62% ( n= 9)。 � 结论 � 该方法简便, 灵敏度高,结果准确, 可用于头孢西酮钠原料药含量及有 关物质的检测。 关键词: 头孢西酮钠;HPLC 法;含量; 有关物质 中图分类号: O657. 72� � 文献标识码: B � � 文章编号: 1009- 9727( 2007) 10- 1881- 02 Determinatin of content of Cefazedone Sodium relevant substances by RP- LPLC. WANG Kang- jun. (Hainan Provini� cal Instiute for Drug Inspection,Haikou 571101, Hainan, P. R. China) Abstract: Objective � To determine the contents of Cefazedone Sodium by reversed - phase high- performance liquid cheo� matography ( RP- HPLC) . � Methods� Column was VP- ODS ( 200mm� 4. 6mm� 5mm) , the mobile phase was 0. 2mol/ L Potas� sium dihydrogen phosphate and Acetonitrile in the ratio of 85: 15.The detection wavelength was 280nm and the flow rate was 1. 0ml/ min. Injection sample was 20�l. � Results � Excellent linear relation in the range of 0. 0804~ 0. 294mg/ ml ( r= 0. 99999) was ob� served in refosporin.The limit of detection was 2ng , both repetition and precision were good ( RSD< 1. 4% , n= 6) . � Conclusion � RP- HPLC is a simple , sensitive , and accurate method and it can be used fro determination of the content and the relevant sub� stances of the Cefazedone Sodium. Key words:Cefazedone Sodium Sterile; High- performance liquid phase chromatography; Content � � 头孢西酮钠属于第一代的头孢类抗生素。目前国家没有 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ,本品收载于韩国的医药标准, 采用反相高效液相色谱测 定头孢西酮钠原料药的含量及有关物质的方法; 鉴于此, 有必 要对国产该品种建立有效的检验方法,以便更好的控制该品种 的质量。故对反相高效液相色谱测定头孢西酮钠原料药的含 量及有关物质的方法进行了研究,并建立了有效的检验方法。 1 � 材料与方法 1�1 � 仪器与试药 � 岛津 LC- 2010型高效液相色谱仪泵、LC- 2010 紫外- 可见光多波长检测器、Class vp6�12 工作站; 岛津紫 外UV- 2100型; BP221S 电子 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 天平; 磷酸二氢钠 (分析纯) , 乙腈(色谱纯) ,纯化水; 头孢西酮钠原料药 (批号: 20040701) , 对照品(批号: 20040701 含量 99�8% ) , 均由海南某制药股份有 限公司提供。 1�2 � 色谱条件 � VP- ODS 依利特 ( 4�6mm � 200mm, 5�m) ; 流 动相: 0�2mol/ L 的磷酸二氢钾: 乙腈 = 85: 15; 检测波长为 280nm;流速为1ml/ min; 进样量为 10�l。 1�2� 1� 检测波长的选择 � 精密称取头孢西酮钠原料药 20mg 两份到 100ml容量瓶中,分别用水和 10%的乙腈溶解并加至刻 度,用刻度吸管分别吸取 2�5ml到 100ml容量瓶中, 再用刻度吸 管分别吸取 2�5ml到 100ml容量瓶中,在 200nm~ 400nm 波长进 行扫描, 结果表明, 用水溶和 10% 乙腈溶解的药物均在 280nm 附近处有最大吸收峰,因此, 检测波长选在 280nm。 1�2� 2� 溶剂的选择 � 对水和 10%乙腈分别在 200~ 400nm 处 进行扫描,均无吸收, 考虑到成本及试验的安全性,故选用水做 为溶剂。 1�2� 3� 流动相的选择 � 精密称取本品适量,加水制成每 ml约 含头孢西酮钠0� 2mg的溶液,作为被测样品。以0�2mol/ L的磷 酸二氢钾: 乙腈= 85: 15 为流动相, 检测波长 280nm, 进样 10ul, 记录色谱图,主峰与杂质峰分离良好, 分离度为 4�84;理论塔板 数为 6 079。 综上所述,本品的测定方法可定为:以 0�2mol/ L 的磷酸二 氢钾: 乙腈= 85: 15 为流动相, 检测波长 280nm, 进样体积为 10�l。 1�2� 4� 专属性试验 � 取本品约 250mg, 精密称定, 置 25ml容量 瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 作为供试品原溶液。 1�2� 4�1� 酸破坏样品的制备 � 精密量取上述原液 1ml置 10ml 量瓶中,加 1mol/ L 盐酸溶液 1ml反应,反应 30min 后,加 1mol/ L 氢氧化钠溶液 1ml进行中和, 加水稀释至刻度, 按照 1�2 色谱 条件进行测定,结果主峰与杂质峰分离良好, 分离度为: 4�54; 理论塔板数为: 5 987。 1�2� 4�2� 碱破坏样品的制备 � 精密量取上述原液 1ml置 10ml 量瓶中,加 1mol/ L 氢氧化钠溶液 1ml反应, 反应 30min 后, 加 1mol/ L盐酸溶液 1ml进行中和, 加水稀释至刻度, 按照 1�2 色 谱条件进行测定, 结果主峰与杂质峰分离良好, 分离度为: 4�65;理论塔板数为: 5 938。 1�2� 4�3� 热破坏样品的制备 � 精密量取上述原液 1ml置 10ml 1881中国热带医学 2007年第 7卷第 10期 � CHINA TROPICAL MEDICINE Vol�7 No�10 October 2007 � � � � � � � � � � � � � � � � 作者单位: 海南省药品检验所,海南海口 � 570216. 量瓶中,置水浴上加热反应 30min 后,取出放冷至室温,并加水 稀释至刻度 ,按照 1�2 色谱条件进行测定, 结果主峰与杂质峰 分离良好,分离度为: 4� 43;理论塔板数为: 5 567。 1�2� 4�4� 氧化破坏样品的制备 � 精密量取上述原液 1ml 置 10ml量瓶中, 加 30% 的双氧水 0�5ml 反应 10min 后, 加水稀释 至刻度,按照 1�2 色谱条件进行测定, 结果主峰与杂质峰分离 良好,分离度为: 3� 11;理论塔板数为: 5 623。 由酸、碱、高温、氧化破坏试验的结果可知, 头孢西酮主峰 与杂质的分离度均大于 3; 理论塔板数均大于 5 500。均符合规 定中国药典 2005 年版二部附录 (附录 VD 高效液相色谱法)的 要求,结果表明, 所确定的检测方法可用于本品的含量及有关 物质的测定。 1�2� 5� 最低检出限的测定 � 精密称定头孢西酮钠原料药适 量, 加水溶解并定量稀释成浓度分别为 2�g/ ml、0�02�g/ ml、 0�002�g/ ml,精密量取上述溶液 10�l, 注入高效液相色谱仪, 记 录色谱图。经试验,本品的最低检测浓度为 2ng/ ml, 最低检测 限为 0�02ng( s/ n= 3)。 1�2� 6� 含量线性试验 � 取头孢西酮钠 20mg 到 100ml 容量瓶 中,用水稀释至刻度。精密量取溶液 4�l、6�l、8�l、10�l、12�l、 24�l共 6份注入高效液相色谱仪, 记录色谱图。以浓度 ( C)为 横坐标,峰面积( A)为纵坐标进行线性回归,得回归方程为 A= 259 912x+ 127 421, R= 0�9999( n= 6)� 结果表明,头孢西酮钠在 0�0804~ 0�294mg/ ml内峰面积与浓度线性关系良好。 1�2� 7� 重现性试验 � 取头孢西酮钠原料药 20mg, 平行称取 6 份,分别用水溶液配制成 0�2mg/ ml供试品溶液, 按上述色谱条 件测定,以头孢西酮钠原料药计算, RSD为 0�23% ( n= 6)。 1�2� 8� 回收率试验 � 取本品内容物约 16�5mg、20�9mg、24�2mg 各称取 3份, 置 100ml量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀 , 作为对照溶液,分别取供试品溶液及对照溶液各 10�l, 注入高 效液相色谱仪中, 并记录色谱图。经计算, 平均回收率为 100� 62% , RSD% = 0� 3% ( n= 9)。 2 � 方法的确定 2�1 � 含量测定方法的确定 � 色谱条件同 1� 2 项下的方法。头 孢西酮钠原料药理论塔板数应大于 2 000, 头孢西酮钠原料药 与相邻杂质峰的分离度应大于 2。 取本品适量 (约相当于头孢西酮 20mg ) , 精密称定, 置 100ml量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀,作为供试品溶液 , 取10�l注入液相色谱仪, 记录色谱图; 另取头孢西酮对照品适 量,精密称定, 置 100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度, 摇匀 , 作为对照品溶液,同法测定。按外标法以峰面积计算, 即得。 2�2 � 有关物质测定方法的确定 � 精密称取本品适量, 用水溶 解并制成每 1ml中约含 1mg 的溶液, 作为供试品溶液; 精密量 取 1ml, 置 100ml量瓶中,用水稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶 液。方法同 1� 2项下的色谱条件, 记录色谱图。 2�3 � 含量测定及有关物质的测定 � 按照上述方法对本品的含 量及有关物质进行测定,分别为 97� 81%和 0�1% 。 3 � 讨论 3�1 � 流动相的选择 � 以乙腈:水= 90: 10 为流动相[ 1] , 主峰有 点拖尾,分离为 0�95, 理论塔板数为967;且基线飘移不定; 而以 0�2mol/ L的磷酸二氢钾: 乙腈= 85: 15 为流动相,主峰与杂质峰 分离良好, 分离度为 4� 84; 理论塔板数为 6079。故流动相确定 为: 0�2mol/ L的磷酸二氢钾: 乙腈= 85: 15 为流动相, 检测波长 为 280nm。 3�2 � 溶剂的选择 � 对水和 10%乙腈[ 2]分别在 200~ 400nm 处 进行扫描,均无吸收, 考虑到成本及试验的安全性,故本试验选 用水做为溶剂。 3�3 � 含量测定进样量的选择 � 取本品适量, 加水溶解并稀释 成每ml含头孢西酮钠 0� 2mg 的溶液, 分别以 10�l、20�l、50�l、 100�l进样,记录色谱图。结果理论塔板数和分离度均较好, 峰 面积均在 8位数以上, 考虑到仪器设备检测的超载情况, 故选 进样量为 10�l。 3�4 � 有关物质测定浓度的选择 � 精密称定本品适量, 分别用 水稀释成 0�2mg/ ml、0�5mg/ ml、1�0mg/ ml、2�0mg/ ml 的溶液, 分 别注入色谱仪中,并记录色谱图。结果可知, 除了头孢西酮主 峰外, 0� 2mg/ ml、0�5mg/ ml、1�0mg/ ml、2�0mg/ ml浓度的样品出 现的杂质峰个数分别为 18 个、19 个、19 个、19 个。因此可知, 有关物质的个数随着浓度的增大而增加,当浓度增大至一定程 度时,杂质个数不随着样品浓度的增大而增加, 故头孢西酮钠 有关物质测定的浓度确定为 1�0mg/ ml。 参考文献: [ 1] 药典委员会 � 中国药典(二部) [M]� 北京:化工出版社, 2005,附录: 172. [ 2] 韩国药品标准局.药品标准解说[ S] . 2002, 305. 收稿日期: 2007- 03- 10 (上接第 1862页) 咳病例,而无白喉病例 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 。对破伤风的预防效果最好, 使用 百白破疫苗基础免疫后, 90%以上被接种的血清中抗毒素可达 到保护水平以上,由于该抗体可以通过胎盘传递给胎儿, 对保 护新生儿免患破伤风也有积极有效的作用。 但通过不同年龄段抗体水平的监测我们也不难发现, 随着 年龄的增长,人群中 3 种疾病的抗体保护率呈现明显的下降趋 势。特别是百日咳抗体, 6~ 8 岁组与 13~ 15 岁组之间抗体保 护率存在明显的差异( � 2= 7� 22, P < 0�01) , 而近几年传染病 报告资料也显明,百日咳患者以成人为主。白喉、破伤风抗体 保护率在 25~ 29岁组时下降较快, 与 13~ 15 岁组存在明显差 异,其原因是由于在 6 周岁时调查儿童均接种过白破疫苗。经 济的快速发展,生活压力的增大, 妇女生育年龄也在推迟, 就目 前来说 25~ 29岁正是妇女生育高峰段, 因此提高成年育龄妇 女百日咳、破伤风抗体保护水平对防控百日咳、新生儿破伤风 疫情有积极有效的影响。 参考文献: [ 1] 朱福源� 嘉善县人群病毒性肝炎、白喉、百日咳、破伤风免疫状况调 查[ J]� 浙江预防医学, 2005, 10( 17) : 17� 收稿日期: 2007- 05- 08 1882 � � � � � � � � � � � � � � � CHINA TROPICAL MEDICINE Vol�7 No�10 October 2007 � 中国热带医学 2007年第 7卷第 10期