长春碱纳米粒的细胞毒性和急性毒性研究

© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 第 37 卷 　第 10 期 2009 年 10 月 西北农林科技大学学报 (自然科学版) Journal of Northwest A &F University (Nat . Sci. Ed. ) Vol. 37 No. 10 Oct . 2009 长春碱纳米粒的细胞毒性和急性毒性研究 3 刘玉梅1 ,2 , 欧阳五庆1 ,张自强2 ,杨雪峰3 ,马淑燕1 (1 西北农林科技大学 动物医学院 ,陕西 杨凌 712100 ;2 河南科技大学 动物科技学院 ,河南 洛阳 471003 ; 3 河南科技学院 动物科技学院 ,河南 新乡 453003) [摘 　要 ] 　【目的】探讨长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒 (VLB2PBCA2N P)对正常细胞的毒性及其急性毒性。 【方法】采用 M TT 法并结合形态学观察 ,比较了 VLB2PBCA2N P 和 VLB 原料药对原代大鼠星形胶质细胞和小鼠成 纤维细胞 L929 的毒性 ;用相同剂量的 VLB2PBCA2N P 和 VLB 原料药溶液对小鼠进行尾静脉注射 ,每日观察小鼠死 亡情况 ,并计算半数致死量 (LD50 ) 。【结果】在质量浓度为 0. 5～50 ng/ mL 时 ,VLB2PBCA2N P 和 VLB 原料药对星形 胶质细胞增殖抑制率的影响无显著性差异 ,当质量浓度达到 500 和 5 000 ng/ mL 时 ,VLB2PBCA2N P 对大鼠星形胶质 细胞的毒性显著低于 VLB 原料药 ( P < 0. 05) 。5 000 ng/ mL 的 VLB2PBCA2N P 对小鼠成纤维细胞 L929 的毒性为 3 级 ,极显著降低了 VLB 原料药的毒性 ( P < 0. 01) 。VLB2PBCA2N P 和 VLB 原料药的 LD50 分别为 26. 38 和 22. 7 mg/ kg ,前者较后者提高了 16. 21 %。【结论】VLB2PBCA2N P 对小鼠的急性毒性和对非肿瘤细胞的毒性均显著低于 VLB 原料药。 [关键词 ] 　长春碱 ;纳米粒 ;L929 细胞 ;星形胶质细胞 ;半数致死量 [中图分类号 ] 　R944. 9 ;R965. 3 [文献标识码 ] 　A [文章编号 ] 　167129387 (2009) 1020031206 Cytotoxicity and acute toxicity study on vinblastine (VLB) nanoparticle s L IU Yu2mei1 ,2 ,OU YAN G Wu2qing1 ,ZHAN G Zi2qiang2 , YAN G Xue2feng3 ,MA Shu2yan1 (1 Col lege of V eterinary Medicine , N orthwest A gricult ure and Forest ry Universi t y , Yangling , S haanxi 712100 , China; 2 College of A nimal Science and Technology , Henan Universit y of Science and Technology , L uoy ang , Henan 471003 , China; 3 Col lege of A nimal Science , Henan instit ute of science and technology , X inx iang , Henan 453003 , China) Abstract :【Objective】The aim of t his st udy was to investigate toxicity of VLB poly (buty1 cyanoacry2 late) nanoparticles ( PBCA2N P) .【Method】Difference between VLB2PBCA2N P and crude VLB on t he growt h of L929 and rat ast rocyte was measured by M T T assay and morp hology met hod. In addition ,af ter t he same dose of VLB2PBCA2N P and crude VLB solution were injected into mice tail vein ,50 % let hal dose of (LD50 ) was counted.【Result s】The result s indicated t hat t here was no significant difference on t he effect of rat ast rocyte growt h between 0. 5 - 50 ng/ mL VLB2PBCA2N P and crude VLB solution , but 500 and 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2N P significantly degraded cytotoxicity ( P < 0. 05) . 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2N P belonged to toxicity grade 3 on L929 fibroblast s growth ,and very significantly degraded crude VLB toxici2 ty. The LD50 of VLB2PBCA2N P and crude VLB solution was respectively 26. 38 and 22. 7 mg/ kg. The LD50 of VLB2PBCA2N P increased by 16. 21 % compared wit h crude VLB solution.【Conclusion】VLB2PBCA2N P degraded acute toxicity and nont umorous cells toxicity of crude VLB. Key words :vinblastine (VLB) ;nanoparticle ;L929 cell ;ast rocyte ;LD503 [收稿日期 ] 　2009201213 [基金项目 ] 　国家科技支撑 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 项目 (2006BAD04A11) [作者简介 ] 　刘玉梅 (1979 - ) ,女 ,内蒙古通辽人 ,讲师 ,在读博士 ,主要从事药物研发及细胞生理研究。E2mail :lymzq @126. com [通信作者 ] 　欧阳五庆 (1960 - ) ,男 ,陕西凤翔人 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事纳米药物与纳米生物学研究。 E2mail :oywq506 @sina. com © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 　　长春碱 (Vinblastine ,VLB) 是从夹竹桃科植物 长春花中提取的一种双氢吲哚类生物碱 ,能与β2微 管蛋白结合 ,阻断纺锤体的形成 ,使有丝分裂停止 , 从而将细胞阻滞于分裂间期[1 ] 。VLB 对何杰金病 及非小细胞性肺癌、恶性淋巴肿瘤等有显著疗效 ,其 硫酸盐已广泛用于临床 ,是主要的抗肿瘤药物之 一[2 ] 。然而 ,像其他细胞毒药物一样 ,VLB 缺乏对 肿瘤组织的选择性 ,半衰期短且易使抗肿瘤细胞产 生多药耐药性 ,这严重限制了其长期反复应用于肿 瘤的治疗[324 ] 。研究表明 ,抗肿瘤药物的纳米粒 (Nanoparticles ,N PS)制剂可延长药物的半衰期 ,提 高对肿瘤组织的靶向性 ,降低毒副作用 ,逆转肿瘤细 胞的多药耐药性[ 5 ] 。西北农林科技大学动物生理学 实验室研制了 VLB 聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒 ( PBCA2N P) ,其粒径分布较窄 ,包封率和载药量较 高 ,并能够提高对胶质瘤细胞 B T325 的毒性[6 ] ,然 而尚未见有关其对非肿瘤细胞体外毒性及对动物体 内毒性的研究报道。为此 ,本研究考察了 VLB2PB2 CA2N P 对原代培养大鼠星形胶质细胞和小鼠成纤 维细胞 L929 的体外细胞毒性以及对小鼠的体内急 性毒性 ,以期为 VLB2PBCA2N P 的临床应用提供理 论依据。 1 　材料与方法 1. 1 　材 　料 1. 1. 1 　试验动物和细胞株　小鼠成纤维细胞 L929 及 1 日龄大鼠和 100 只昆明种小白鼠 (体质量 (20 ±2) g , 雌雄各半) ,均购自第四军医大学实验动物中心。 1. 1. 2 　主要试剂及仪器 　DM EM (高糖) 培养基和 DM EM/ F12 培养基 ,购自 GIBCO 公司 ;胎牛血清 , 购自杭州四季青生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 材料有限公司 ;胰蛋白酶 试剂盒 ,购自碧云天生物技术研究所 ; M T T ,购自 Sigma 公司。 主要仪器及设备 : C KX41 倒置显微镜 ,日本 O2 lymp us 公司生产 ; MCO215AC CO2 培养箱 ,日本 Sanyo 公司生产 ; Model 550 酶标仪 ,B IO2RAD 公 司生产。 1. 2 　大鼠星形胶质细胞的原代培养 参考文献[ 7 ]的方法并略加改动。在无菌条件 下剪下 1 日龄大鼠脑组织 ,用眼科弯镊轻轻撕掉脑 膜和血管后 ,从大脑纵裂处分离大脑皮质。剪碎 ,吹 打分散细胞 ,在 37 ℃水浴箱中用质量浓度 2. 5 g/ L 的胰蛋白酶消化 30 min。然后加入含体积分数 10 %胎牛血清的 DM EM/ F12 培养基 ,轻轻吹打至 胰酶与培养基混合均匀 ,1 000 r/ min 离心 5 min ,弃 上清 ; 重新加入含体积分数 10 % 胎牛血清的 DM EM/ F12 培养基 ,轻轻吹打至细胞团块消散 ,制 成细胞悬液 ,然后接种于 75 cm2 的细胞培养瓶中 , 置 37 ℃、体积分数 5 % CO2 的细胞培养箱内培养。 每 3 d 更换培养液 1 次 ,至第 9 天时 ,将培养瓶置于 恒温摇床内以 260 r/ min 振摇过夜 ,以除去小胶质 细胞和少突胶质细胞。 1. 3 　VL2PBCA2NP 对大鼠星形胶质细胞生长的影响 将纯化后的星形胶质细胞消化、离心后 ,用完全 培养液调整细胞浓度为 1 ×105 mL - 1 ,然后接种于 96 孔培养板 (每孔 200μL) ,当各组细胞生长至接近 于亚融合状态时 ,进行相应药物处理。试验设共 3 组处理 , Ⅰ组细胞用含不同质量浓度 (0. 5 , 5 ,50 , 500 ,5 000 ng/ mL) VLB 原料药溶液的培养基进行 培养 ; Ⅱ组细胞用含与 Ⅰ组相同质量浓度的 VLB2 PBCA2N P 培养基进行培养 ; Ⅲ组为空白对照组 ,细 胞用质量浓度为 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2N P 稀释 相同倍数的空白 N PS 培养基进行培养 ,每组设 3 个 复孔。各组细胞培养 48 h 后用倒置显微镜观察细 胞的生长状态并拍照 ,然后更换为无血清培养基 ,每 孔加新配制的 5 mg/ mL M T T 液 20μL ,继续培养 4 h 后 ,弃去孔中上清液 ,每孔加入 DMSO 150μL 溶 解甲臜沉淀 ,用微型超声振荡器震荡摇匀 10 min , 使紫色结晶充分溶解 ,在酶标仪上测定 490 nm 波长 下的吸光值。根据测定的吸光值 ( A ) 按下式计算细 胞生长抑制率 : 细胞生长抑制率/ % = ( A正常组 - A试验组 ) / A正常组 ×100 %。 1. 4 　VLB2PBCA2N P 对小鼠成纤维细胞 L929 生 长的影响 参 照 医 疗 器 械 生 物 学 评 价 国 家 标 准 GB/ T16886. 5 - 1997《医疗器械生物学评价》第 5 部 分 ,“细胞毒性实验 :体外法”及 M T T 试验方法[8 ] , 将处于对数生长期的小鼠成纤维细胞 L929 用质量 浓度为 2. 5 g/ L 的胰蛋白酶进行消化 ,制成终浓度 为5 ×107 L - 1 的细胞悬液 ,接种于 96 孔培养板中 , 每孔 100μL 。待细胞生长至亚融合状态时进行试 验。试验分为 5 组 ,即正常对照组 (加 100μL 完全 培养液) 、VLB 原料药组 (加 100μL 5 000 ng/ mL 的 VLB 培养液) 、VLB2PBCA2N P 组 (加 100μL 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2N P 培养液) 、空白 N PS 组 (加 100μL 与 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2N P 稀释相同 倍数的空白 N PS 培养液) 和阳性对照组 (加 100μL 23 西北农林科技大学学报 (自然科学版) 第 37 卷 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 二甲基亚砜) ,每组设 3 个复孔。于 37 ℃、体积分数 5 % CO2 环境下培养 48 h 后终止培养 ,在倒置显微 镜下观察细胞生长状态并拍照 ,然后每孔加新配制 的 5 mg/ mL M T T 液 20μL ,继续培养 4 h 后 ,弃去 孔中上清液 ,每孔加入二甲基亚砜 150μL 溶解甲瓒 沉淀 ,用微型超声振荡器震荡摇匀 10 min ,使紫色 结晶充分溶解 ,在酶标仪上于 490 nm 波长下测定吸 光值 ,根据测定的吸光值按下式计算相对增殖度 (R GR) ,并按表 1 的毒性分级 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 对试验结果进行 评估。 R GR/ % = A试验组 / A正常组 ×100 %。 表 1 　毒性分级标准 Table 1 　Fractionation of toxicity 相对增殖度/ % R GR 毒性分级 Toxicity classification 相对增殖度/ % R GR 毒性分级 Toxicity classification ≥100 0 25～49 3 75～99 1 1～24 4 50～74 2 0 5 1. 5 　小鼠急性毒性试验 取健康昆明种小白鼠 50 只 ,随机均分为 5 组 , 每组 10 只 ,雌雄各半 ,分别以 9. 8 ,14 ,20 ,28 和 40 mg/ kg 的剂量尾静脉注射 VLB 原料药溶液。另取 健康小白鼠 50 只 ,同样按上述方法分组 ,以 9. 8 , 14 ,20 ,28 和 40 mg/ kg 的剂量尾静脉注射 VLB2PB2 CA2N P 溶液。给药结束后连续观察 14 d ,每天 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 小鼠的死亡情况。 1. 6 　数据处理 试验数据使用医学统计软件 SPSS13. 0 进行方 差 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ,试验结果以“平均值 ±标准差 (珡X ±S D)”表 示。 2 　结果与分析 2. 1 　VLB2PBCA2N P 对原代大鼠星形胶质细胞生 长的影响 2. 1. 1 　增殖抑制率 　空白 N PS 组原代大鼠星形胶 质细胞的增殖抑制率 (1. 59 %)与正常对照组相比无 显著差异。由表 2 可知 ,在质量浓度为 0. 5～50 ng/ mL时 ,VLB2PBCA2N P 与 VLB 原料药对原代培 养大鼠星形胶质细胞增殖抑制率的影响无显著差 异 ;当质量浓度为 500 和 5 000 ng/ mL 时 ,VLB 原 料药对大鼠星形胶质细胞的增殖抑制率均显著高于 VLB2PBCA2N P。 表 2 　VLB2PBCA2NP 和 VLB 原料药对大鼠星形胶质细胞增殖抑制率的影响 Table 2 　Inhibition effect of VLB2PBCA2NP and crude VLB on the rat ast rocyte rate 组别 Group 细胞增殖抑制率/ % Cell growt h inhibition rate 0. 5 ng/ mL 5 ng/ mL 50 ng/ mL 500 ng/ mL 5 000 ng/ mL Ⅰ 14. 27 ±1. 12 27. 32 ±1. 29 30. 65 ±1. 51 47. 36 ±5. 07 a 51. 83 ±4. 36 a Ⅱ 12. 24 ±0. 90 22. 64 ±2. 57 27. 58 ±1. 98 35. 74 ±1. 72 b 42. 27 ±3. 75 b 　　注 :同列数据后标有不同小写字母表示差异显著 ( P < 0. 05) 。 Note :Date in t he same row wit h different small letters indicate significant difference ( P < 0. 05) . 2. 1. 2 　细胞形态 　VLB2PBCA2N P 及 VLB 原料药 对原代大鼠星形胶质细胞生长的影响如图 1 所示。 图 1 　VLB2PBCA2N P 及 VLB 原料药对原代大鼠星形胶质细胞形态的影响 ( ×200) A. 正常对照组 ;B. 5 000 ng/ mL VLB 原料药组 ;C. 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2NP 组 Fig. 1 　Effect of VLB2PBCA2N P and curde VLB on morphological changes of primary rat ast rocyte ( ×200) A. Normal cont rol group ; B. 5 000 ng/ mL crude VLB group ; C. 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2NP group 33第 10 期 刘玉梅 ,等 :长春碱纳米粒的细胞毒性和急性毒性研究 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 　　由图 1 可见 ,正常对照组大鼠的星形胶质细胞 呈扁平多边形 ,核形态饱满 ,折光率高 ,活力旺盛 ,周 围具有放射状的细长突起 ,呈明显的星形 (图 12A) ; 5 000 ng/ mL 的 VLB 原料药组细胞大量突起消失 , 皱缩 ,细胞结构不完整 ,多数细胞变圆呈典型的凋亡 形态 (图 12B) ;5 000 ng/ mL VLB2PBCA2N P 组的大 部分细胞突起消失 ,细胞之间的突触联系减少 ,但胞 体形态变化不明显 ,个别细胞周围仍有短小的突起 存在 (图 12C) 。 2. 2 　VLB2PBCA2N P 对小鼠成纤维细胞 L929 生 长的影响 2. 2. 1 　各试验组细胞的毒性分级 　由表 3 可知 , VLB 原料药组与 VLB2PBCA2N P 组小鼠成纤维细 胞 L929 的相对增殖度 ( R GR) 分别为 20. 45 %和 30. 07 % ,较正常对照组极显著降低 ( P < 0. 01) ,但 显著高于阳性对照组 ( P < 0. 05) 。 表 3 　VLB2PBCA2N P 对小鼠成纤维细胞 L929 相对增殖度的影响 Table 3 　Effect of VLB2PBCA2N P on relative growth rate of L929 cells 组别 Group 相对增殖度/ % R GR 毒性级别 Toxicity classification 组别 Group 相对增殖度/ % R GR 毒性级别 Toxicity classification 正常对照组 Normal control group 　100 ±1. 43 Aa 0 VLB2PBCA2NP组 VLB2PBCA2NP group 30. 07 ±1. 44 Bb 3 空白 NPS 组 Blank NPS group 97. 74 ±0. 43 Aa 1 阳性对照组 Positive control group 17. 50 ±1. 02 Cd 4 VLB 原料药组 Crude VLB group 20. 45 ±0. 72 Cc 4 　　注 :同列数据后标不同大写字母表示差异极显著 ( P < 0. 01) ,标不同小写字母表示差异显著 ( P < 0. 05) 。 Note :Values followed by different capital letters are polari2significantly different ( P < 0. 01) and values followed by different small let ters are significantly different ( P < 0. 05) . 　　结合表 1 的毒性分级可知 ,空白 N PS 组与正常 对照组无显著差异 ,属于 1 级毒性 ,对细胞生长无明 显影响 ;VLB 原料药和阳性对照组的细胞增殖度较 正常对照组显著降低 ,属于 4 级毒性 ; VLB2PBCA2 N P 组的细胞毒性属于 3 级 ,对细胞的生长有一定 影响。 2. 2. 2 　VLB2PBCA2N P 对小鼠成纤维细胞 L929 形态的影响 　VLB2PBCA2N P 及 VLB 原料药对小 鼠成纤维细胞 L929 形态的影响如图 2 所示。 图 2 　VLB2PBCA2N P 及 VLB 原料药对小鼠成纤维细胞 L929 形态的影响 ( ×200) A. 正常对照组 ;B. 5 000 ng/ mL VLB 原料药组 ;C. 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2NP 组 ;D. 阳性对照组 Fig. 2 　Effect of VLB2PBCA2N P and crude VLB on morphological changes of L929 cells ( ×200) A. Normal cont rol group ;B. 5 000 ng/ mL crude VLB group ;C. 5 000 ng/ mL VLB2PBCA2NP group ;D. Positive cont rol group 43 西北农林科技大学学报 (自然科学版) 第 37 卷 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 　　由图 2 可以看出 ,正常组的小鼠成纤维细胞 L929 形态饱满 ,呈典型的梭型 ,折光性强 ,形态完 整 ,增殖力旺盛 (图 22A) ;VLB 原料药组 (图 22B) 和 VLB2PBCA2N P 组 (图 22C) 部分细胞漂浮于培养液 中 ,细胞数量减少 ,折光性较差 ,形态不够饱满 ,皱缩 变圆 ,但仍有部分细胞保持原有形态。与 VLB 原料 药组相比 ,VLB2PBCA2N P 组皱缩变圆的细胞相对 较少。阳性对照组细胞数量减少 ,部分细胞漂浮于 培养液中 ,绝大部分细胞皱缩变圆 ,凋亡细胞增多 , 几乎未见保持原有形态的细胞 (图 22D) 。 2. 3 　VLB2PBCA2N P 对小鼠的急性毒性采用 Bliss 法 ,通过软件对表 4 的小鼠死亡数进行统计 ,可知 VLB 原料药组的LD50为 22. 7 mg/ kg ,95 %的可信限为 18. 82～27. 76 mg/ kg ; VLB2PB2CA2N P 组的 LD50为 26. 38 mg/ kg ,95 %的可信限为21. 87～ 33. 25 mg/ kg。与 VLB 原料药组相比 ,VLB2PBCA2N P 组 LD50提高了 16. 21 %。由此可推断 ,采用 N PS 对 VLB 进行包裹后 ,可降低其对小鼠的全身毒性。 表 4 　VLB2PBCA2NP 及 VLB 原料药的急性毒性试验结果 Tab 4 　Result s of acute toxicity test on the VLB2PBCA2N P and crude VLB 药物 Drug 组别 Group 剂量/ (mg ·kg - 1) Dose 动物数 Amount of mice 死亡数 Number deat h VLB 1 9. 8 10 0 2 14 10 2 3 20 10 3 4 28 10 6 5 40 10 10 VLB2PBCA2NP 1 9. 8 10 02 14 10 13 20 10 2 4 28 10 5 5 40 10 9 3 　讨　论 目前 ,在开发新的抗癌药物的同时 ,对原有药物 进行剂型改变 ,以提高其疗效并降低毒副作用 ,已成 为当今药物研发的一个趋势。纳米微粒因具有良好 的缓释性、靶向性 ,以及可降低药物的毒副作用、增 加治疗靶器官的疗效而倍受关注。VLB2PBCA2N P 选用 PBCA 为载体 ,其降解产物为水溶性的聚氰基 丙烯酸 ,可随尿液直接排出 ,对人体组织基本无毒 性[9 ] 。此外 ,有研究证实 ,在一定质量浓度范围 ( ≤ 28. 56 μg/ mL ) 内 , PBCA2N P 对人正常肝细胞株 L202 呈现出较高的相对增殖率 ,其细胞毒性为 1 级 ,即无细胞毒性[10 ] 。VLB 具有严重的毒副作用 , 故在临床上的应用受到一定限制 ,因此本研究将其 包裹于 PBCA2N P 载体中 ,以期能提高其抑瘤效果 并降低其毒副作用。 体外细胞培养检测生物材料的毒性 ,是一类在 离体状态下模拟生物体生长环境 ,检测载体材料接 触机体组织后生物学反应的体外试验方法 ,具有快 速、敏捷、经济、试验周期短等优点 ,是生物安全性检 测的首选项目。小鼠成纤维细胞 L929 具有传代稳 定、繁殖迅速的优点 ,常被用作毒性检测的标准细 胞[11 ] ,因此本研究也选择小鼠成纤维细胞 L929 作 为体外细胞毒性试验的靶细胞之一。此外 ,以往研 究证实 ,VLB 具有明显的神经毒性 ,这与神经突触 内微管不能维持正常功能有关[12 ] 。星形胶质细胞 是脑组织中数量最多的细胞类型 , 其功能正常与否 直接关系到脑组织的机能状态 ,因此本研究将体外 培养的大鼠脑组织星形胶质细胞作为考察 VLB2 PBCA2N P 细胞毒性的另一个靶细胞。由 M T T 试 验结果并结合细胞形态分析可知 ,5 000 ng/ mL 的 VLB2PBCA2N P 降低了 VLB 原料药对小鼠成纤维 细胞 L929 和大鼠脑组织星形胶质细胞的毒性。而 在前期工作中 ,已经证实 VLB2PBCA2N P 对神经胶 质瘤细胞 B T325 的毒性作用较 VLB 原料药更 强[6 ] 。其原因可能在于 ,VLB 是耐药蛋白的作用底 物之一 ,易使肿瘤细胞产生多药耐药性 ,致使肿瘤细 胞内的药物浓度过低而难以维持药效[ 13 ] ;神经胶质 瘤细胞 B T325 膜上的耐药糖蛋白 ( P2gp) 的表达量 很高[14 ] , VLB2PBCA2N P 可能通过躲避 P2pg 的识 别而提高肿瘤细胞内的药物浓度 ,但小鼠成纤维细 胞 L929 和星形胶质细胞膜上的 P2gp 表达水平很 低 ,无载体包裹的 VLB 也不会产生耐药现象。此 外 ,VLB2PBCA2N P 进入细胞后从载体内缓慢释放 , 53第 10 期 刘玉梅 ,等 :长春碱纳米粒的细胞毒性和急性毒性研究 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 不会立即在 L929 成纤维细胞和星形胶质细胞内形 成较高的药物浓度 ,而大剂量的 VLB 原料药进入细 胞后很容易引起细胞毒性。 急性毒性试验是基础毒理研究的主要内容之 一 ,所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某 些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考 价值 ,而 LD50 是反应急性毒性大小的一个重要指 标。本研究发现 ,VLB2PBCA2N P 对小鼠的毒性小 于 VLB 原料药组 ,其原因可能是 PBCA2N P 缓慢降 解促使 VLB 从载体内缓慢释放 ,避免了一次性大剂 量给药而对机体造成的急性损害。 综合分析细胞毒性试验和小鼠急性毒性试验结 果表明 , VLB2PBCA2N P 对机体的毒副作用小于 VLB 原料药 ,但有关其详细作用机理还有待于进一 步探讨。 [参考文献 ] [ 1 ] 　Checchi P M ,Nettles J H , Zhou J ,et al . Microtubule2interac2 ting drugs for cancer t reat ment [J ] . Trends in Pharmacological Sciences ,2003 ,24 (7) :3612365. [ 2 ] 　李晓蕾 ,任其龙 ,杨亦文 ,等. 抗肿瘤药长春碱的提取纯化与分 析方法研究概况 [J ] . 中国医药工业杂志 ,2004 ,35 ( 4) : 2472 250. Li X L ,Ren Q L , Yang Y W ,et al . Outline of ext raction purifi2 cation and analysis of antitumor drug vinblastine [J ] . Chinese Journal of Pharmaceuticals ,2004 ,35 (4) :2472250. (in Chinese) [ 3 ] 　刘贤铭. 抗肿瘤药物不良反应及其防治 [J ] . 中国药事 ,2005 , 19 (10) :6362638. Liu X M. Antitumor drug adverse reaction and prevention and cure [J ] . 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