枸杞多糖对实验性高血压妊娠小鼠血压和胎鼠发育的影响

-70- 第29卷第2期Vol.29, No.2 2009年2月Feb.2009 生 殖 与 避 孕 Reproduction & Contraception http://www.RandC.cn randc@sippr.stc.sh.cn 枸杞多糖对实验性高血压妊娠小鼠血压 和胎鼠发育的影响 潘正军 张晓蕾 周建武 王建成 (淮阴师范学院生物学系, 淮安, 223300) 【摘要】目的: 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 枸杞多糖对实验性高血压妊娠小鼠血压和胎鼠发育的影响。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 : 提取宁夏 枸杞多糖; 冷刺激诱导建立孕小鼠高血压模型。将小鼠分为5组: 正常妊娠对照组(A组)、冷刺激 妊娠组(模型组, B组)、冷刺激+不同浓度多糖组(实验组, C-E组)。C、D、E组分别灌胃给予枸 杞多糖5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg, qd×18 d; A组、B组相应地给予等量生理盐水, 连续饲 养18 d。妊娠小鼠颈动脉插管记录血压, 剖宫检测胎盘、胎鼠重, 全长、体长。结果: B组血压显 著高于A组(P<0.01), 实验组血压与A组比无统计学差异(P>0.05)。B组胎盘、胎鼠重, 全长、体 长显著低于A组(P<0.01); 实验组与A组比差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 枸杞多糖对实验 性高血压妊娠小鼠有降低血压、保护胎儿发育的作用。 关键词: 枸杞多糖; 妊娠; 血压; 胚胎发育 中图分类号: R972+.4 文献标识码: A 文章编号: 0253-357X(2009)02-0070-03 通讯作者: 潘正军; Tel: +86-517-83525993; Fax: 517-83525992; E-mail: zhengjunpan@163.com 枸杞子为宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)的干 燥成熟果实, 在我国主要产于河北和宁夏, 日本、朝 鲜、欧洲及北美也有分布。它在祖国传统医学中 具有重要的地位, 其药用价值备受历代医家的推崇。 《本草纲目》记载:“枸杞, 补肾生精, 养肝, 明目, 坚精骨, 去疲劳, 易颜色, 变白, 明目安神, 令人长 寿”[1]。《神农本草经》中就指出: 久服坚筋骨; 《食疗本草》也记载枸杞“能益人, 去虚劳”。现 在医学研究表明, 枸杞具有抗氧化、抗衰老、免疫 调节、降血糖、降血脂、抗肿瘤等作用[2-6]。我 们的研究也表明, 枸杞具有降低血压和调节血脂的 功能[7]。药理学研究证明, 枸杞的这些作用与枸杞 多糖(lycium barbarum polysaccharides, LBP)有着 密切的关系, 枸杞多糖是枸杞中的主要功能活性成 分[1]。将实验动物反复置于低温(4±2℃)条件下进 行寒冷刺激可诱发实验性高血压[8], 对孕鼠进行寒冷 刺激能使其产生妊娠期高血压疾病样改变[9]。枸杞 多糖能否降低孕鼠血压、保护胎儿发育目前尚未 见报道, 我们拟选择小鼠建立冷刺激诱导的孕鼠高 血压模型, 检验枸杞多糖对实验性高血压妊娠小鼠 血压和胎鼠发育的影响。 1 材料和方法 1.1 实验动物 清洁级ICR小白鼠, 雌性60只、雄性15只, 购 于南京医科大学实验动物中心, 合格证号: SCXK(苏) 2008-0004, 25℃适应性饲养1周后开始实验。 1.2 实验仪器 BL-420F生物机能实验系统、PT-100生物血 压传感器为成都泰盟科技有限公司产品, 250 D数 显光照培养箱为上海佳胜实验设备有限公司产品, Sartorius电子天平(0.0001g)由北京赛多利斯仪器 -71- 系统有限公司生产。小鼠灌胃器为张家港市生物 医学仪器厂产品。 1.3 主要试剂 宁夏枸杞购于淮阴医药公司(特级, 产地: 宁夏 中宁县)。20%氨基甲酸乙酯(乌来糖), 0.9%NaCl, 3.8%柠檬酸三钠。 1.4 实验方法 1.5.1 枸杞多糖的制备 按文献资料[10]进行: 称取 250 g枸杞子, 60℃烘干, 放置于干燥器18 h。粉碎, 称取100 g干燥枸杞粉, 每次用氯仿-甲醇(2∶1) 300 ml, 用索氏回流装置于60℃回流脱脂2次, 每次 2h。残渣风干后, 再用80%乙醇300 ml, 回流2次, 每次2h。残渣加适量水于90℃,1h×3次。4 190 ×g, 离心10min, 合并上清液, 浓缩成200 ml。在 磁力搅拌下, 将浓缩液滴入5倍体积的95%乙醇中, 静置12 h。抽滤, 固形物分别用95%乙醇, 无水乙 醇, 丙酮洗涤, 真空干燥, 得LBP粗品。Sevag法 脱蛋白: 按枸杞多糖水溶液20%体积加入氯仿, 随 之加入氯仿体积20%的正丁醇, 混合物剧烈震荡 20 min, 离心, 倾出上清液, 除去中间层变性蛋白和 下层氯仿。重复操作到中间层无变性蛋白为止。 收集上清液, 浓缩, 透析, 冷冻干燥得LBP。 用所得LBP分别配制成浓度为5mg/ml、 10mg/ml、20mg/ml的水溶液, 4℃保存备用。 1.5.2 实验分组及处理 小鼠按雌雄4∶1合笼, 每 日上午7∶00检查雌鼠, 将有阴栓者挑出, 记作怀 孕d 0。将孕鼠随机分成5组: 正常妊娠对照组(A 组)、冷刺激妊娠组(模型组, B组)、冷刺激+不同 浓度多糖组(实验组, C-E组)。实验组: 分别于每天 下午4∶00灌胃给予枸杞多糖5 mg/kg、10 mg/kg、 20 mg/kg, qd×18 d, 正常喂食饮水; A组、B组相 应地给予等量生理盐水; 实验组和B组同时每日上午 8∶00-12∶00置于4±2℃环境下冷刺激处理, 其 余时间同A组, 25℃饲养, 连续饲养18 d。 于d 18按5 ml/kg体重腹腔注射20%氨基甲酸 乙酯将小鼠麻醉, 颈动脉插管法测量并记录血压。 解剖小鼠并剖宫, 测量胎盘重量, 仔鼠的全长(含尾 长)、体长、体重。 1.6 数据处理 用SPSS13.0统计分析软件对各组数据进行t检 验, 以x- ±s表示, P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 各组小鼠血压值 从表1中可以看出, 孕鼠经间歇性寒冷刺激, 血 压升高(与A组比, 差异非常显著, P<0.01), 冷刺激 孕鼠用枸杞多糖灌胃处理后, 各组血压下降, 其中 D组、E组血压已经接近正常值(与A组比, 无统计 学差异, P>0.05), 即随着用药剂量的增加降压效应 增强。 2.2 胎鼠发育状况 从表2中可以看出, B组的胎盘重、体重、全 长、体长全部显著低于A组(P<0.01), 实验组的上 述指标与A组比, 无统计学差异(P>0.05), 也即喂服 枸杞多糖后胚胎的发育状况得到了显著改善, 实验 组间相比, 差异无统计学意义(P>0.05)。 3 讨论 妊娠期高血压疾病样改变以前也称妊娠高血压 综合征, 是妊娠期影响母婴健康的严重疾病, 也是 影响孕产妇和围产儿患病率和死亡率的重要因素, 以 妊娠20周后高血压、蛋白尿、水肿为特征并伴全 身多脏器的损害, 发病率为9.14%, 是严重威胁母婴 安全、导致孕妇及围生儿发病及死亡的主要原因之 一, 但其病因学因素仍未彻底阐明, 治疗也无根本性 进展[11]。流行病学调查资料表明寒冷是诱发妊娠期 表1 对照组与实验组小鼠血压值比较(单位: mmHg, 1 mmHg=0.133 kPa, x-±s) Table 1 Blood pressures comparison of control group and experimental groups (unit: mmHg, 1 mmHg=0.133 kPa, x-±s) 组别Group n 最大收缩压Max.systolic最小舒张压Min.diastolic 平均动脉压Mean arterial A 11 91.1±3.1 82.9±4.2 86.3±4.2 B 9 106.4±4.2** 95.8±3.7** 99.3±3.4** C 12 98.9±4.8* 88.3±3.6* 93.7±3.5* D 10 94.6±3.9 84.6±4.0 89.4±3.6 E 9 93.4±3.3 84.5±3.6 87.3±3.3 *: P<0.05, **: P<0.01, 与A组比 compared with group A -72- 表2 对照组与实验组胎鼠发育状况比较 ( x-±s) Table 2 Fetus development status of control group and experimental groups ( x-±s) 组别 Group胎鼠数No. of Fetus 胎盘Placenta(mg) 体重Body weight(mg) 全长Full-length(mm) 体长Body-length(mm) A 83 144.00±0.02 1 509±196 43.2±2.7 30.7±2.1 B 79 97.00±0.02** 1 407±208* 40.2±1.7* 27.4±1.5** C 77 110.00±0.02 1 505±177 43.3±2.4 30.3±1.3 D 130 123.00±0.09 1 547±168 44.5±2.1 31.4±1.7 E 89 113.00±0.02 1 528±143 44.4±1.8 30.8±1.4 *: P<0.01, **: P<0.001, 与A组比 compared with group A 高血压疾病样改变的高危因素之一, 子痫发作与气温 突变密切相关[12]。动物实验也表明, 寒冷刺激不仅 能诱发孕鼠妊娠期高血压疾病样改变, 而且对胎盘 形态、细胞滋养细胞的浸润、血管内皮损伤的影 响都与人类临床表现类似[13-15], 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 寒冷刺激可能是 诱发妊娠高血压疾病样改变的因素之一, 由此可以建 立研究妊娠期高血压疾病样改变的动物模型。我们 的实验也表明, 冷刺激妊娠组胎鼠发育状况明显不及 对照组, 与临床妊娠高血压疾病样改变并发症状 IUGR(intrauterine growth restriction)吻合。 枸杞子是我国传统的药食兼用名贵中药材, 是我 国重要出口药材之一, 也是卫生部首批公布的食药兼 用品种之一, 具有补肾养肝、润肺明目等功能, 是 一种重要的食品配料。近年来, 对枸杞子生物活性 作用的研究表明, 枸杞子具有增强机体免疫功能、 减肥、细胞凋亡诱导、抗肿瘤和抗衰老等作用, 我 们以前的研究也表明枸杞能降低实验性高血压[7]。 这些活性作用被认为与LBP有关, LBP是从枸杞子中 分离提取得到的一种小分子水溶性的多糖化合物, 由 阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、木糖、 半乳糖6种单糖组成, 呈白色纤维状[16]。本研究表 明, 枸杞多糖确有降血压的效应, LBP不仅能降低寒 冷刺激诱发的妊娠高血压状态, 还能有效改善胎鼠的 发育状况, 使胎盘发育、胎鼠生长趋于正常。从而 为枸杞产品的进一步开发利用积累实验依据, 也为临 床治疗妊娠期高血压疾病提供理论数据。至于LBP 降低血压的生理机制还有待继续探讨。 参考文献: [1] 霍 超, 徐桂花. 枸杞生理功效和活性成分的研究进展. 中 国食物与营养, 2007, (11):50 -3. [2] 何兰杰, 刘 萍. 枸杞多糖对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的 影响. 中国医院药学杂志, 2006, 26(12):1 475-8. [3] 李 晶, 欧 芹, 孙 洁. 枸杞多糖对衰老大鼠蛋白质氧化 损伤影响的实验研究. 中国老年学杂志, 2007, 27(24): 2 384-5. [4] 曹淑彦, 王 宇. 枸杞多糖对外周血单核细胞激活作用. 中 国医院药学杂志, 2007, 27(9):1 219-21. [5] 王 玲, 董 坚, 蒋绿芝, 等. LBP-D单用及与降糖药联合应 用对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和免疫功能的影响. 云南 大学学报(自然科学版), 1999, 21(3):186-8. [6] 甘 璐, 张声华. 枸杞多糖的抗肿瘤活性和对免疫功能的 影响. 营养学报, 2003, 25(2):200-2. [7] 潘正军, 王新风, 杨占军.宁夏枸杞水煎剂对实验性高血 压小鼠血压和血脂含量的影响. 淮阴师范学院学报(自然 科学版), 2007, 6(4):327-9. [8] Kanayama N,Tsujimura R, She L, et al. Cold-induced stress stimulates the sympathetic nervous system, causing hy- pertension and proteinuria in rats. J Hypertens, 1997, 15(4): 383-9. [9] 俞丽丽, 李 力, 陈 鸣, 等. 寒冷刺激诱发孕鼠妊娠高血压 综合征动物模型研究. 第三军医大学学报, 2001, 23(4): 419-21. [10] 田丽梅, 王 旻. 枸杞多糖的提取分离和其组成研究. 中国 中药杂志, 2006, 31(19):1 603-6. [11] 翁 侨, 陈汉平. 妊娠期高血压疾病病因学研究现状. 中国 优生与遗传杂志, 2006, 14(3):124-5. [12] 乐 杰. 妇产科学. 北京:人民卫生出版社, 2000:114. [13] 俞丽丽, 李 力, 陈 鸣, 等. 寒冷刺激致妊高征孕鼠的胎盘 形态学观察. 重庆医学, 2004, 33(9):1 351-3. [14] 俞丽丽, 李 力, 陈 鸣. 寒冷刺激对细胞滋养细胞浸润的 影响. 中华医学杂志, 2001, 81(6):374-6. [15] Zhu Z, Zhu S, Zhu J, et al. Endothelial dysfunction in cold- induced hypertension rats. Am J Hypertens, 2002, 15(2): 176-80. [16] 张 民, 张声华. 枸杞多糖的制备及其结构研究. 食品研 究与开发, 2007, 28(7): 68-71. (2008年8月12 日 收稿) (英文摘要见第112页) -112- Influence of Ovarian Response to Pregnancy Outcome in IVF-ET Jue MA, Lu LI, Xiao-hong GAO, Yu WU, Xiang LU, Dan-ni CHEN, Xiao-xi SUN (International Peace Maternity and Child Health Hospital of Shanghai Jiaotong University, Shanghai, 200030) 【ABSTRACT】 Objective: To explore the predictive ability of ovarian response to pregnancy outcome in controlled ovarian hyperstimulation (COH) cycles in IVF-ET. Methods: A total of 402 cycles with long protocol in COH were included, which grouped as the different specific ratio of recombinant follicle stimulating hormone and the mature oocyte number (rFSH/n), and the relationship between rFSH/n and pregnancy outcome was retrospectively analyzed. Results: With the raise of rFSH/n, basic antral follicle count (AFC) was decreased, total dose of rFSH was increased, number of acquired oocytes reduced and mean score of transferred embryos was also decreased (P<0.05). When rFSH/n>450, the clinical pregnancy rate was obviously decreased (P<0.05). Conclusion: Ovarian response is significantly correlated with the IVF-ET outcome. The cut of point that pregnancy rate decreases followed with the raise of rFSH/n is >450. Key words: IVF-ET; controlled ovarian hyperstimulation (COH); ovarian response; pregnancy rate Effects of Lycium Barbarum Polysaccharides on Blood Pressures and Fetus Development of Hypertensive Pregnant Mice Zheng-jun PAN, Xiao-lei ZHANG, Jian-wu ZHOU, Jian-cheng WANG (Department of Biology, Huaiyin Teachers College, Huai’an, 223300) 【ABSTRACT】 Objective: To study the effects of lycium barbarrum polysacharides on blood pressures and fetus development of hypertensive pregnant mice. Methods: Lycium barbarum polysaccharides were extracted. Hyper- tensive mice were induced by cold-stress. Mice were divided into control pregnancy group (the control, gruop A), cold-stress pregnancy group (model, group B), cold-stress polysaccharides treated group (experimental groups, groups C-E). The control group and model group were given physiological saline as the control, and experimental groups were fed with polysaccharides by irrigating gastric (5 mg/kg,10 mg/kg, 20 mg/kg, respectively). After 18 d, the blood pressures, weight of placenta, length and weight of fetus were all measured. Results: The blood pressures of group B increased significantly compared with group A (P<0.01), and experimental groups had no statistical significance compared with group A (P>0.05). The weight of placenta, length and weight of fetus in group B were significantly lower that in group A (P<0.01), but no significant difference was found between experimental groups and group A (P>0.05). Conclusion: The lycium barbarrum polysacharides has the functions of depressing blood pressure and protecting fetal development. Key words: lycium barbarrum polysacharides (LBP); pregnancy; blood pressure; fetal development $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ (正文见第72页 refer to p.72)