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枸杞多糖对肾血管性高血压大鼠肾功能不全的作用.pdf

枸杞多糖对肾血管性高血压大鼠肾功能不全的作用

babylizhen
2012-03-30 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《枸杞多糖对肾血管性高血压大鼠肾功能不全的作用pdf》,可适用于高等教育领域

【实验研究】枸杞多糖对肾血管性高血压大鼠肾功能不全的作用Ξ詹银珠,郑惠珍△,倪锡胜,郑锦滨,朱伟荣,吴希春(广东医学院,广东湛江 )  摘要:目的:观察枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide,LBP)对肾血管性高血压大鼠肾功能不全的作用。方法:只SD大鼠,随机分为高血压组、LBP组和假手术组。用左侧肾动脉缩窄方法制备肾血管性高血压大鼠模型,周后给造模成功、肾功能明显损害的高血压大鼠以LBP(mgΠkg·d)灌胃,连续d,观察血压、肾脏形态、功能的改变。结果:高血压组大鼠血压明显较假手术组为高。左肾萎缩,右肾稍肥大,肾指数左肾低于右肾。病理学检查见左肾部分肾小球萎缩,肾小囊扩大,部分肾小球肿胀,肾间质水肿,炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞明显肿胀。血清肌酐、尿素氮、h尿蛋白均高于假手术组(P<或P<),尿沉渣中见大量管型、细胞。LBP组大鼠肾形态学改变以肾小球缩小,肾小囊扩大为主,组织水肿和肾小管上皮细胞肿胀不明显血压、血清肌酐和尿素氮均低于高血压组h尿蛋白和尿沉渣中管型、细胞数较给药前明显减少。结论:枸杞多糖对一侧肾动脉缩窄引起的高血压和肾功能损害有一定改善作用。  关键词:枸杞多糖肾血管性高血压肾功能不全大鼠  中图分类号:R  文献标识码:B  文章编号:()Ξ基金项目:广东医学院教学教育研究资助项目()广东医学院大学生课外科研资助项目(ZSZ)  枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide,LBP)为中药枸杞的有效成分之一,近代医学研究揭示其具有免疫调节、抗衰老、降血脂、降血糖、护肝、抗疲劳、保护生殖系统、抗肿瘤、抗应激和预防高血压形成等功效、,LBP能否改善缺血性肾损害有待研究。本实验用改良的两肾一夹(kc)高血压大鼠模型,在大鼠肾功能损害后给予LBP,观察LBP对一侧肾动脉缩窄诱导的肾损害是否有治疗作用。 材料与方法 材料清洁级SpragueDawley(SD)大鼠,雄性,体重g~g,广东医学院实验动物中心MedLab生物信号采集处理系统,南京美易科技有限公司紫外光栅分光光度计,上海精密科学仪器有限公司,LBP为上海康舟真菌多糖有限公司血尿素氮、肌酐测定试剂盒,南京建成生物工程研究所。 方法 分组与动物模型建立 SD大鼠只,随机分成组:高血压模型组(高血压,n=)、高血压LBP组(LBP,n=)、假手术组(n=)。大鼠用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,无菌条件下取上腹部正中切口,高血压模型动物暴露左肾,钝性分离左肾动脉,在肾动、静脉之间穿线,沿左肾动脉的长轴置一号去尖针头,将动脉与针头一起结扎后,抽去针头,形成缩窄的左肾动脉,动脉缩窄程度约~,腹腔注射青、链霉素各万U,逐层关腹。假手术组动物不结扎左肾动脉,其他操作同高血压模型动物。术后喂养常规饲料,饮用自来水。LBP组于术后周,肾功能明显改变后,给予LBP、mgΠ(kg·d)灌胃,连续d。假手术组及高血压组动物于术后周,LBP组动物于术后周进行指标检测。 动脉血压测定 大鼠用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后取颈前正中切口,暴露并钝性分离左侧颈总动脉,动脉插管,动脉导管的另一端经压力换能器与MedLab生物信号采集处理系统通道连接,记录动脉血压。 血清尿素氮和肌酐的检测 动脉血压测量结束后,于颈总动脉采集血液ml离心,rΠmin,×min,取血清μl,用钨酸蛋白沉淀剂除蛋白,加入苦味酸及氢氧化钠溶液,℃水浴min,用分光光度计,波长nm测定OD值,计算各管肌酐含量。取血清μl,加入圬溶液和酸溶液,沸水中水浴mmin,用分光光度计,波长nm,测定OD值,计算各管尿素氮含量。实验操作步骤及肌酐、尿素氮含量计算方法按试剂盒说明书进行。 肾重量及肾指数的检测 实验结束时摘取两侧肾脏,剔除肾周围的筋膜及结缔组织,滤纸吸干,分别称重,并按下列公式计算肾指数:左(右)肾指数=左(右)肾的重量Π体重×。 收集h尿量检测尿蛋白及尿沉渣 所有动物术后每隔周收集次h尿量,直至实验结束。收集尿量时将大鼠放入代谢笼,并于代谢年第卷第期VolNo      中国中医基础医学杂志ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine©ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouseAllrightsreservedhttp:wwwcnkinet笼的漏斗部中央垫上细铁丝网以隔离粪便。从收集的h尿液中取尿液ml离心,rΠmin,×min,取上清液,用考马斯亮蓝法(CBB法)检测尿蛋白含量。尿液离心后取沉渣,用生理盐水稀释(∶)、混匀,滴在载玻片上,涂匀后低倍镜下镜检。每个样品观察个视野,将每个视野的细胞、管型半定量为“”、“”、“”、“”、“”个等级,每个样品的结果为个视野的平均值。 左肾病理学观察 实验结束时摘取左侧肾脏,置中性甲醛溶液中固定,常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色,然后光学显微镜下观察、显微摄影。 统计学处理实验结果采用SPSS统计软件进行方差检验,组间比较用LSD法,以均数±标准误(€x±s)表示,P≤表示差异显著。 结果 血压表显示,假手术组平均动脉压为±mmHg,高血压组血压较假手术组高,组间比较P<LBP组血压低于高血压组,但高于假手术组,组间比较均P>。表 枸杞多糖对一侧肾动脉缩窄大鼠血压的影响(€x±s)组  别例数平均动脉压(mmHg)收缩压舒张压平均动脉压假手术组±±±高血压组±a±±aLBP组±±±注:aP<,VS假手术组 肾重和肾指数表显示,高血压组大鼠左侧(结扎侧)肾重量、肾指数均明显低于假手术组(P<)。右侧肾脏(未结扎侧)肾重及肾指数明显大于左肾和假手术组的右肾(P<和P<)。LBP组大鼠肾重及肾指数的改变与高血压组的改变基本相同,组间比较P>。表 枸杞多糖对一侧肾动脉缩窄大鼠肾重及肾指数的影响(€x±s)组  别例数体重(g)肾重(g)肾指数左右左右假手术组±±±±±高血压组±±b±±b±bLBP组±±b±a±b±b注:aP<,bP<,VS假手术组   肾脏病理学改变假手术组:肉眼可见两侧肾脏表面光滑,无结节,色泽红润,质地柔软,大小形态正常。镜下见组织结构正常(图、)。高血压组:左侧肾脏明显萎缩,表面凹凸不平,有多处灰黄色坏死区或白色钙化区,右侧肾脏表面呈暗红色,光滑,未见缺血与坏死区,体积大于假手术组。镜下见肾小球明显萎缩,肾小囊囊腔扩大,系膜增生,间质炎性细胞浸润,肾皮质内部分血管内溶血或栓塞形成,肾小管上皮细胞肿胀,有些部位组织坏死,结构模糊(图、)。LBP组:左肾萎缩,右肾肥大的现象较高血压组大鼠更为明显。镜下见肾小球及肾小管排列混乱,肾小球萎缩,肾小囊囊腔扩大,少量肾小球肿胀,组织缺血坏死现象较高血压大鼠为重,但肾小管上皮细胞肿胀不明显(图、)。 肾功能检测结果高血压组大鼠血浆尿素氮、肌酐、h尿蛋白均高于假手术组,组间比较P<。而LBP组则均低于高血压组,接近假手术组,组间比较分别为P<和P>。h尿量,在LBP组较其他两组略多,但组间比较P>(表)。h尿沉渣镜检,假手术组尿沉渣中以结晶为主,偶见管型及细胞高血压组所有动物均出现大量管型及细胞LBP组尿沉渣中也可见管型及细胞,但其量不及高血压组。此外,LBP组给药后h尿蛋白较给药前明显减少,给药前后比较P<尿沉渣中管型、细胞数也较给药前明显减少。图 枸杞多糖对一侧肾动脉缩窄大鼠肾大体形态的影响A:假手术组B:高血压组C:LBP组L:左侧肾脏R:右侧肾脏图 假手术组 组织结构正常(HE×)图 高血压组 肾小球萎缩,肾小囊扩大,系膜增生,血管内溶血(HE×)图 LBP组 肾小球萎缩,肾小囊扩大(HE×)中国中医基础医学杂志ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine      年第卷第期VolNo©ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouseAllrightsreservedhttp:wwwcnkinet表 枸杞多糖对一侧肾动脉缩窄大鼠肾功能的影响(€x±s)组  别例数血尿素氮(mmolΠml)血肌酐(μmolΠml)h尿量(ml)尿蛋白(mgΠml)假手术组±±±±高血压组±b±±±aLBP组±d±±±c注:aP<,bP<,VS假手术组cP<,dP<,VS高血压组   讨论枸杞子(Lyciumbarbarum)为茄科植物,甘平,归肝、肾经,是我国传统的名贵中药材,因其具有补肾养肝、润肺明目等功效,因而一直受到中外医家及食疗专家的高度重视。枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide,LBP)是枸杞的主要有效成分之一,具有免疫调节、抗衰老、降血脂、降血糖、护肝、抗疲劳、保护生殖系统、抗肿瘤、降血压等作用,改善脑缺血再灌注小鼠的行为障碍及卒中的症状,提高脑缺血再灌注小鼠的学习、记忆能力,并促进学习、记忆能力的恢复。本项研究用上海康舟真菌多糖有限公司生产的枸杞多糖(多糖含量,水分,砷mgΠkg,铅mgΠkg,汞检不出),用蒸馏水配制成枸杞多糖溶液,在动物肾血管性高血压模型建立、肾功能不全表现明显后,以mgΠkg·d的剂量灌胃,观察LBP对肾血管性高血压肾损害是否有治疗作用。文献报道,大鼠肾动脉部分结扎后,血压明显升高,经周后基本形成肾性高血压模型,随着结扎时间的延长,血压呈持续升高。本实验大鼠左肾动脉缩窄术后周,用颈总动脉插管法检测动脉血压,结果高血压组血压明显高于假手术组,同时出现肾功能的明显损害,表明肾血管性高血压模型已建立。LBP组动物术后喂养时间较高血压组长周,其动脉血压反而低于高血压模型组,提示LBP对已经形成的高血压有一定的降压作用。关于一侧肾动脉狭窄引起的血压升高的机制,我们的另一部分研究结果表明,与动脉管壁增厚、变硬、顺应性降低、外周阻力增高有关。此外,文献报道、与血管内皮功能紊乱,血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ、醛固酮、内皮素等缩血管物质生成异常增多,而组织和循环中降钙素基因相关肽含量不足等因素有关。本实验研究发现,一侧肾动脉缩窄周后,h尿蛋白较假手术组明显增加,尿沉渣镜检有少量细胞管型,周后尿蛋白大量增加,尿沉渣镜检有大量细胞管型,同时血清肌酐和尿素氮明显高于假手术组而LBP组尿蛋白、尿沉渣中细胞管型均明显较高血压组少,血肌酐和尿素氮也低于高血压组,接近假手术组。这些结果提示,一侧肾动脉缩窄术后周,肾功能已经损害,并随缩窄时间延长,损害加重,LBP对已经损害的肾功能有逆转作用。本实验研究同时揭示,一侧肾动脉缩窄周后,肾动脉狭窄侧肾脏明显萎缩,有多处坏死灶及钙化点,重量减轻,肾指数下降病理切片见肾小球萎缩,肾小囊囊腔扩大,间质炎性细胞浸润,肾皮质有部分血管内溶血和栓塞现象,肾小管上皮细胞肿胀。LBP组双侧肾脏病理学改变与高血压组相似,但肾小管上皮细胞无明显肿胀。这些结果提示,LBP能够修复肿胀变性的肾小管上皮细胞,对严重缺血坏死的组织结构则无修复作用。文献报道,LBP对大鼠剧烈运动后肾小管上皮细胞超微结构的改变有保护作用,使肾小管上皮细胞表面微绒毛密集,糖原颗粒增多,线粒体较为丰富等。LBP能够清除自由基,抑制自由基所致的细胞线粒体损伤等。LBP改善肾血管性高血压大鼠肾功能损害的作用可能与这些机制有关,详细机制有待进一步研究。致谢:感谢我校生理科学实验室以及实验动物中心的大力支持和帮助。参考文献: 倪慧,卿德刚,凯撒·苏来曼,等枸杞多糖的基础研究进展J新疆中医药,,(): 汪建龙枸杞多糖药理作用的研究进展J时珍国医国药,,(): 吴秀香,马克玲,李淑云,等内皮素、降钙素基因相关肽在肾性高血压大鼠的动态变化J中国心血管杂志,,(): 李英兰,程彦斌肾素血管紧张素系统、内皮素及降钙素基因相关肽在肾性高血压大鼠的动态变化J青海学院学报,,(): 张焱,高天顺,王淑静,等枸杞多糖对游泳训练大鼠肝、肾脏超微结构的保护作用J中国中医基础医学杂志,,(): 郑惠珍,詹银珠,郑锦滨,等枸杞多糖对肾血管性高血压大鼠心血管的影响J(待发表) 李贵荣枸杞多糖的提取及其对活性氧自由基的清除作用J中国现代应用药学杂志,,():收稿日期:作者简介:詹银珠(),女,广东汕头人,级临床医学在读本科生。△通讯作者:郑惠珍(),女,广东汕头人,生理学教授,医学博士,从事心血管生理学与病理生理学研究。年第卷第期VolNo      中国中医基础医学杂志ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine©ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouseAllrightsreservedhttp:wwwcnkinet

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