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lowry法.doc

lowry法

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2012-03-12 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《lowry法doc》,可适用于高等教育领域

lowry法(folin酚法)原理及优缺点双击自动滚屏发布者:dindin发布时间:阅读:次►基本原理Lowry法蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以在本公司订购)近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的只是加入了第二种试剂即Folin酚试剂以增加显色量从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是:在碱性条件下蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin酚试剂中的磷钼酸盐磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下兰色深度与蛋白的量成正比。►优缺点Folin酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高比双缩脲法灵敏得多缺点是费时间较长要精确控制操作时间标准曲线也不是严格的直线形式且专一性较差干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素()硫酸纳()硝酸纳()三氯乙酸()乙醇()乙醚()丙酮()等溶液对显色无影响但这些物质浓度高时必须作校正曲线。含硫酸铵的溶液只须加浓碳酸钠氢氧化钠溶液即可显色测定。若样品酸度较高显色后会色浅则必须提高碳酸钠氢氧化钠溶液的浓度~倍。►注意事项进行测定时加Folin酚试剂时要特别小心因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定但上述还原反应只在pH=的情况下发生故当Folin一酚试剂加到碱性的铜蛋白质溶液中时必须立即混匀以便在磷钼酸磷钨酸试剂被破坏之前还原反应即能发生。

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