首页 RT－PCR技术专题

RT－PCR技术专题

RT－PCR技术专题nullnull―RT系统TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD“从RNA提取到荧光定量PCR”解决方案null RT-PCR原理简介 RT-PCR技术中的关键点 TIANGEN公司RT产品选择指南RT-PCR原理简介RT-PCR原理简介cDNA第一链合成法示意图（两步法）cDNA第一链合成法示意图（两步法）一步法实验示意图（同一个反应管中）一步法实验示意图（同一个反应管中）RT-PCR两种方法适用于mRNA表达量解析 Two Step RT-PCR效率高使用Random...

nullnull―RT系统TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD“从RNA提取到荧光定量PCR”解决方案 null RT-PCR原理简介 RT-PCR技术中的关键点 TIANGEN公司RT产品选择指南RT-PCR原理简介RT-PCR原理简介cDNA第一链合成法示意图（两步法）cDNA第一链合成法示意图（两步法）一步法实验示意图（同一个反应管中）一步法实验示意图（同一个反应管中）RT-PCR两种方法适用于mRNA表达量解析 Two Step RT-PCR效率高使用Random和Oligo-dT 引物可以制备cDNA pool cDNA可长期保存适用于病毒、病原菌检测操作简单污染几率低RT-PCR两种方法RT引物的选择RT引物的选择目的片段在mRNA任何位置都能使用。通常mRNA表达量分析最适。目的片段在距Poly(A) Tail 2kbp以内适用。One Step RT-PCR只能使用Gene specific Primer，不适用于mRNA表达量分析等复数基因的检出。null RT-PCR原理简介 RT-PCR技术中的关键点 TIANGEN公司RT产品选择指南null 模板：总RNA，mRNA，体外转录的RNA 引物：随机引物，Oligo dT，基因特异性引物(GSP) 反转录酶：AMV M-MLV Quant Reverse Transcriptase RT反应体系逆转录酶的选择逆转录酶的选择 AMV：禽成髓细胞瘤病毒，逆转录酶和RNA酶H活性。最适42℃。 MMLV：Moloney 鼠白血病病毒，逆转录酶，RNA酶H活性较弱。最适37℃或42℃。 Quant Reverse Transcriptase 全新高效逆转录酶，与RNA模板的亲和力强，对GC含量高的模板通读效果好，质量稳定，最适37℃。 RNase H的作用RNase H的作用水解RNA-DNA杂合链中的RNA RT实验要素－决定反应的特异性及灵敏性分离高质量RNA 使用高活性的逆转录酶提高逆转录酶保温温度减少基因组DNA污染RT实验要素－决定反应的特异性及灵敏性问题 1：RT-PCR没有产物RNA降解或起始量少 RNA提取后含抑制成分 cDNA合成时引物退火不充分 PCR失败目的基因在组织中不表达或表达量低原因对策分离无污染、高质量的RNA，用0.1－0.5μg乙酰BSA增加RNA的量用70%乙醇洗涤RNA 确定退火温度适合实验中所用的引物 PCR步骤中cDNA模板不能超过反应体积的1/5 尝试其它组织问题1：RT-PCR没有产物问题2：非特异性扩增问题2：非特异性扩增非特异性扩增非特异性扩增问题3：弥散问题3：弥散弥散cDNA第一链产物的含量过高 DNase降解DNA产生的寡核苷酸的非特异性扩增 PCR反应中引物过多循环数过多退火温度过低原因对策常规PCR步骤中减少模板cDNA的量提取高质量RNA，防止被DNA污染减少引物的用量优化PCR反应条件，减少PCR的循环次数提高退火温度，防止非特异性的起始及延伸弥散null RT-PCR原理简介 RT-PCR技术中的关键点 TIANGEN公司RT产品选择指南nullTIANGEN公司RT产品系列null谢谢！谢谢！

                    本文档为【RT－PCR技术专题】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
                    图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。 
 该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。

                    [版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。

                    本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。

                    网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
                

下载需要：免费已有0 人下载

立即下载

你可能还喜欢

最新资料

资料动态

专题动态

is_619762

暂无简介~

格式：ppt

大小：1MB

软件：PowerPoint

页数：0

分类：

上传时间：2012-03-04

浏览量：52

热点搜索

暑假学习计划书作文滑雪场员工岗位职责公路工程质量检验评定标准第二册机电工程平构、色构、立构详解【课件】质朴与率真——浓郁乡情的视觉呈现+课件高一美术人美版（2019）美术鉴赏责任书之施工安全责任承诺书民航危险品运输试题法语翻译句子.doc 转帖Dimarzio拾音器详细解释朗文英语听说教程1-答案手术室紧急护理人力资源调配规定及执行方案云南省生物医药科技合作项目人生一世不容易简谱乐谱【东风悦达起亚锦州4s店营销策划全案】暑假学习计划书作文滑雪场员工岗位职责公路工程质量检验评定标准第二册机电工程平构、色构、立构详解【课件】质朴与率真——浓郁乡情的视觉呈现+课件高一美术人美版（2019）美术鉴赏责任书之施工安全责任承诺书民航危险品运输试题法语翻译句子.doc 转帖Dimarzio拾音器详细解释朗文英语听说教程1-答案手术室紧急护理人力资源调配规定及执行方案云南省生物医药科技合作项目人生一世不容易简谱乐谱【东风悦达起亚锦州4s店营销策划全案】