高效液相色谱法测定不同炮制法的女贞子中齐墩果酸的含量

液稀释至 5 倍后, 产生的沉淀少, 能够克服在流动相中产生沉 淀。 参考文献: [ 1] � 陈奇.中成药名方药理与临床[ M ] .北京:人民卫生出版社, 1998. 968. [ 2] � 高学敏.中药学[ M ] .北京:中国中医药出版社, 2002. 288. [ 3] � 阴健,郭力弓.中药现代研究与临床应用( 1) [ M ] .北京:学苑出版 社, 1993. 387~ 389. [收稿日期] 2004-08- 18 [作者简介] 王书梅,女,副主任药师,电话: 0377-3328311 高效液相色谱法测定不同炮制法的女贞 子中齐墩果酸的含量 王书梅1 ,王灿岭2 ,孙洪涛1 � ( 1. 南阳医学高等专科学校附 属医院, 河南 南阳 473058; 2 . 南阳医学高等专科学校, 河南 南阳 473058) [摘要] � 目的:探讨不同炮制法对女贞子中齐墩果酸含量的影 响。方法:采用高效液相色谱法, 以 shim-pack-ods ( 150 mm � 4 . 6 mm, 5 �m)为分析柱。甲醇-水 ( 95�5 ) 为流动相, 流速为 1 . 0 mL�min- 1 , 柱温为室温,检测波长为210 nm。结果:在浓度 0 . 05~ 1 . 6 g�L - 1范围内,齐墩果酸的浓度与峰面积线性关系良 好( r= 0. 999 7 ) , 平均回收率为98. 54% ( n= 6)。结论: 炮制方 法不同对女贞子中齐墩果酸的溶出有影响, 对女贞子的炮制及 从女贞子中提取齐墩果酸具有参考意义。 [关键词] � 女贞子;炮制; 齐墩果酸;高效液相色谱法 [中图分类号] R283. 3 � � [文献标识码] A � � [文章编号] 1001-5213 ( 2005) 08-0781-02 � � 女贞子为木犀种植物女贞 L igustr um Lucidum Ait 的干燥 成熟果实,为常用中药, 是多种成药和成方的主要组分。主要成 分为齐墩果酸,该药性味甘、苦、凉, 具有兹补肝肾、明目乌发之 功效。临床上用于眩晕耳呜, 腰膝酸软, 须发早白,目暗不明等 症[1 ]。女贞子常以炮制品入药, 其不同的炮制方法对齐墩果酸 的含量影响较大[2 . 3]。同时, 产地不同女贞子中齐墩果酸含量 相差甚远[4 ]。为此,本研究采用来自同一植株上的女贞子进行 不同方法的炮制后用高效液相色谱( HPLC)法测定其齐墩果酸 的含量,使结果更加可靠, 对女贞子的炮制及提取齐墩果酸更 具指导意义。 1 � 仪器与试剂 日本岛津 LC � 10AT VP 泵, SPD � 10AVP 紫外检测器, Chr oma- solution L ight 色谱工作站; Shim-Pack- vp-ODS 色谱柱 ( 150 mm � 4 . 6 mm, 5 �m) , 保护柱 C18柱(日本岛津制作所 )。 甲醇为色谱纯,水为纯化水; 齐墩果酸对照品(中国药品生物制 品检定所) ; 女贞子采自河南南阳的高等医学专科学校种植的 女贞树,由河南南阳高等医学专科学校中药教研室杨转云副教 授鉴定为木犀种植物女贞 Lig us tr um L ucidum Ait的干燥成熟 果实。炮制品按照中药大辞典中的常用炮制方法制备成生品: 将采摘的女贞子去除杂质用水洗净,阴干。蒸制品: 将采摘的女 贞子去除杂质用水洗净, 蒸2 h以上 ;酒制品: 每 500 g女贞子用 200 mL黄酒搅拌至将酒吸干后蒸2 h以上阴干; 醋制品: 每500 g 女贞子用200 mL食用醋搅拌至醋吸干蒸2 h以上阴干。 2 � 方法及结果 2. 1 � 色谱条件 � 色谱柱: Shim- Pack-ODS 柱 ( 151 mm � 4. 6 mm, 5�m) ;流动相: 甲醇-水( 95�5 ) ; 流速: 1 . 0 mL�min- 1 ; 柱温:室温; 检测波长: 210 nm; 压力: 5 . 0 kPa; 样品采集速度: 100 s。在该色谱条件下, 样品色谱图见图 1。 图 1 � HPLC图 A.对照品; B.生品; C.蒸制品; D .酒制品; E .醋制品; 1.齐墩果酸 Fig 1 � HPLC chromatogram A. reference substance; B. crud dru g; C. brai sed produ ct ; D. alcoh ol pro- ces sed product; E. vinegar proces sed product; 1. rolean ol ic acid 2. 2� 标准曲线绘制 � 取干燥至恒重的齐墩果酸对照品125 mg 置25 mL量瓶中用甲醇定容, 分别吸取0 . 1 , 0. 2, 0 . 4 , 0. 8, 1 . 0 , 3. 2, 6 . 4 mL置10 mL量瓶中, 用甲醇定容,分别得不同浓度的工 作液,每工作液进样 3 次, 得峰面积平均值, 进样量为20 �L , 以 各浓度对对应的峰面积做线性回归, 得回归方程为: C= 25 . 88X - 1. 14 , r = 0 . 999 7。结果表明, 齐墩果酸在 0. 05~ 1. 6 g�L - 1 的浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。 2. 3� 样品液的制备及测定 � 分别精密称取 4 种不同炮制品的 女贞子粉末各 3 份, 每份约 1 g, 用甲醇 30 mL置超声震荡清洗 器中,超声20 min, 分离出溶液, 残渣用 20 mL甲醇同法处理, 合 并两次溶液,精滤后移至50 mL量瓶中, 用甲醇定容摇匀, 在上 述色谱条件下每次进样20�L , 每样进样 3 次, 代入回归方程并 计算含量,结果见表 1。 表 1 � 不同炮炙方法的女贞子中齐墩果酸的含量( % ) Tab 1 � The contents in product s with differ ent processing method( % ) 样品 齐墩果酸含量( n= 3) 1 2 3 平均值 RSD 生品 1. 643 1. 631 1. 702 1. 658 2. 29 蒸制品 1. 916 1. 945 1. 981 1. 947 1. 54 酒蒸品 2. 223 2. 218 2. 290 2. 227 0. 45 醋蒸品 1. 839 1. 864 1. 882 1. 862 1. 14 2. 4� 精密度试验 � 取上述标准系列浓度中的0. 4 g�L - 1标样重 复进样,日进样 6次, RSD为 0. 81% ;日间试验连续3 d, RSD 为 1. 74%。 2. 5� 回收率试验 � 取已知含量的女贞子样品 6 份, 每份约1 g , 精密称定,分别依上述样品液制备方法制备样品液,合并后定容 前加入一定量的标准齐墩果酸溶液, 同法同条件测定齐墩果酸 的含量,结果见表 2。 3� 小结 实验结果证明,经过不同方法炮制后,齐墩果酸的提取量均 有不同程度的增加,尤其是以黄酒蒸制增加率最大,其次是蒸制 �781�中国医院药学杂志 2005年第 25卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2005 Aug, Vol 25, No. 8 表 2� 齐墩果酸回收试验结果 Tab 2 � Recovery t ests o f oleanolic acid 加样量 回收量 回收率 平均回收率 RSD / mg / mg / % / % / % 3. 2 3. 18 99. 37 3. 2 3. 15 98. 44 3. 2 3. 16 98. 75 3. 2 3. 14 98. 13 98. 54 0. 475 3. 2 3. 15 98. 44 3. 2 3. 14 98. 13 品和醋制品,蒸制与醋制差异无显著性, 这与女贞子的传统用 药方法酒制、蒸制、醋制相一致, 也为应用现代技术从女贞子中 提取齐墩果酸提供参考据。用 HPLC 法测定女贞子中齐墩果 酸的含量,方法简便, 结果可靠,具有一定意义。 参考文献: [ 1] � 中国药典.一部[ S] . 2000. 34. [ 2] � 李炯林.女贞子不同炮制品中齐墩果酸的含量[ J ] .广西中医药, 2001, 24( 6) : 48~ 49. [ 3] � 王新功,吕华瑛,李箐.不同蒸制时间对女贞子中齐墩果酸含量的 影响[ J ] .山东医药工业, 2002, 21( 4) : 53~ 54. [ 4] � 孙文基,谢世昌.天然药物成分定量分析[ M ] .北京:中国医药科技 出版社, 2000. 325~ 330. [收稿日期] 2005-02- 18 [作者简介] 王真,男,学士,副主任药师,电话: 0573-2055082 高效液相色谱法测定抗炎涂剂中氯霉素 和地塞米松磷酸钠的含量 王真, 涂厉标, 徐其平 � (嘉兴市第二医院, 浙江 嘉兴 314000) [摘要] � 目的:建立同时测定抗炎涂剂中氯霉素和地塞米松磷 酸钠含量的方法。方法:用 C18柱为固定相,甲醇-0 . 34%磷酸二 氢钾溶液( 60�40)为流动相, 氢化可的松为内标物, 流速 1. 0 mL �min- 1 , 检测波长240 nm。结果: 氯霉素和地塞米松磷酸钠分 别在 160~ 640 mg� L- 1 ( r = 0 . 999 9 ) , 4~ 16 mg� L - 1 ( r = 0 . 999 9)范围内线性关系良好; 平均回收率分别为 100. 0% , 100 . 8% ;精密度 RSD 分别为0 . 16% , 0. 15%。结论: 此方法简 便、快速、准确。 [关键词] � 高效液相色谱法; 抗炎涂剂; 氯霉素; 地塞米松磷酸 钠;氢化可的松 [中图分类号 ] R927 � � [文献标识码] A � � [文章编号] 1001-5213 ( 2005) 08-0782-02 � � 抗炎涂剂在临床上主要用于治疗痤疮, 其主要成分为氯霉 素和地塞米松磷酸钠。为控制其制剂质量, 本研究采用专属性 较强的 H PLC 法测定了制剂中的氯霉素和地塞米松磷酸钠的 含量,方法简便易行, 结果可靠。 1 � 仪器和试药 HP1100 高效液相色谱仪(二级管阵列检测器 ) 。氯霉素、 地塞米松磷酸钠、氢化可的松对照品(中国药品生物制品检定 所) ; 抗炎涂剂 (本院自制, 批号 040913, 040914, 040915) ; 甲醇 为色谱纯,磷酸二氢钾为分析纯, 注射用水(自制)。 2 � 方法与结果 2. 1� 色谱条件 � 色谱柱: A gilent ZORBAX SB- C18柱( 4. 6 mm � 250 mm, 5�m) ;流动相: 甲醇-0 . 34%磷酸二氢钾溶液( 60�40) ; 检 测波长: 240 nm; 流速: 1 . 0 mL�min- 1 ; 柱温: 30 � ; 定量进样环 20 �L。 2. 2� 检测波长的确定 � 分取氯霉素、地塞米松磷酸钠和氢化可 的松对照品适量,分别用流动相溶解并稀释成每1 mL含氯霉素 1. 0 mg、地塞米松磷酸钠40 �g及氢化可的松0 . 15 mg的溶液, 在 200~ 400 nm的波长范围内进行紫外扫描。根据两成分及内 标物的紫外吸收,选择240 nm作为测定波长。 2. 3� 干扰试验 � 精密称取氯霉素、地塞米松磷酸钠及氢化可的 松对照品适量,用流动相溶解并稀释;取样品适量加入适量氢化 可的松对照品用流动相溶解并稀释; 另取空白辅料在上述色谱 条件下, 分别进样20�L得色谱图, 见图 1。结果辅料不干扰样 品的测定。 图 1 � 色谱图 A.空白辅料; B.对照品; C.样品 1.氯霉素; 2.地塞米松磷酸钠; 3.氢化可的松 Fig 1 � HPLC chromatogram A. b lan k; B. cont rast ; C. sample 1. chloramphenicol; 2. dexamathas one sodium phosphate; 3. hydro- cortis one 2. 4� 标准溶液的配制 2. 4. 1 � 内标溶液(氢化可的松)的制备 � 取氢化可的松对照品 适量,用流动相溶解并稀释成每 1 mL含氢化可的松28 �g的溶 液。 2. 4. 2� 混合标准溶液的制备 � 取氯霉素及地塞米松磷酸钠对 照品适量,用流动相溶解并稀释制成每 1 mL含氯霉素2 mg、地 塞米松磷酸钠50 �g的溶液, 得混合标准储备液。 2. 5� 线性关系 � 分别精密量取混合标准储备液 2. 0, 3. 0, 4 . 0 , 5. 0, 6. 0 , 7 . 0 , 8 . 0 mL与5 mL内标溶液置于25 mL量瓶中, 加流 动相稀释至刻度,摇匀。按上述色谱条件,分别取20 �L进样,记 录色谱图。以浓度为纵坐标,样品与内标峰面积比为横坐标,得 回归方程分别为: Y氯霉素 = 27 . 92X - 1 . 112 , r = 0. 999 9 ; Y地塞米松磷酸钠 = 8 . 707X- 0 . 055 8 , r = 0 . 999 9。试验结果表明, 氯霉素在 160~ 640 mg�L- 1 ,地塞米松磷酸钠在 4~ 16 mg�L - 1 浓度范围内,线性关系良好。 2. 6� 精密度试验 � 取氯霉素 400 mg� L - 1、地塞米松磷酸钠 10 mg�L- 1的对照品溶液, 连续测定 5 次, 氯霉素和地塞米松磷 酸钠测定结果的 RSD 分别为0. 16% , 0. 15%。 2. 7� 稳定性考察 � 取氯霉素 400 mg� L - 1、地塞米松磷酸钠 10 mg�L- 1的对照品溶液, 在室温条件下, 分别于 0 , 2, 4, 6 , 8 h 后进样测定,测得的氯霉素及地塞米松磷酸钠的浓度的 RSD分 别为0. 30% , 0 . 27%。结果表明, 室温下溶液在8 h内稳定性良 好。 2. 8� 重复性试验 � 取抗炎涂剂( 040915 )制备 6 份供试品溶液, 氯霉素和地塞米松磷酸钠测定结果的 RSD 分别为 0. 15% , 0. 31% ( n= 6)。 �782� 中国医院药学杂志 2005年第 25卷第 8期 Ch in H osp Pharm J, 2005 Aug, Vol 25, No. 8