麦角固醇提取及分离纯化研究

麦角固醇提取及分离纯化研究 -138- 中国科技信息2005年第12期 CHINA SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION Jun.2005 医药卫生论坛麦角固醇是一种重要的医药化工原料，用于生产VD2，黄体酮，可的松，氢化可的松，芸苔素内酯等。目前关于角麦固醇菌种筛选, 发酵工艺的报道较多而分离纯化研究少见。由于原料中含量较低,如啤酒厂、酒厂、抗生素厂等等的发酵废弃菌丝中含量不足干重的 1%，而相关文献中的麦角固醇生产菌含量也仅占干重的3%左右，目前常用麦角固醇提取纯化方...

-138- 中国科技信息2005年第12期 CHINA SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION Jun.2005 医药卫生论坛麦角固醇是一种重要的医药化工原料，用于生产VD2，黄体酮，可的松，氢化可的松，芸苔素内酯等。目前关于角麦固醇菌种筛选, 发酵工艺的报道较多而分离纯化研究少见。由于原料中含量较低,如啤酒厂、酒厂、抗生素厂等等的发酵废弃菌丝中含量不足干重的 1%，而相关文献中的麦角固醇生产菌含量也仅占干重的3%左右，目前常用麦角固醇提取纯化方法是用石油醚、乙醇、丙酮等有机溶剂反复萃取提纯。因此有机溶剂用量大，溶剂回收费用高昂、成本居高不下；另一方面，由于有机溶剂易燃易爆，导致生产设备须防爆装置，设备投资大幅增加，相应生产管理要求严格，安全形势严峻。本研究采用酸碱降解法,首先将菌体中的蛋白质、糖类、脂类等分解并溶解于水中除去，而麦角固醇附着在水解残渣上，过滤残渣再加入蔗糖等物质后混匀、真空烘干、装柱，于常温下用石油醚洗脱，最后乙醇重结晶可得纯品。 1．料和方法 1.1，菌种和培养基[1] 麦角固醇酵母：本实验室筛选；斜面培养基：麦芽汁斜面培养基；发酵培养基：酵母浸膏(1%,蛋白胨2%，葡萄糖4%，PH自然１.２，分析方法[2] １.２.１，仪器：色谱仪　　Waters 515HPLC pump, Rheodyne7725；进样器， 486紫外检测器，HSP色谱工作站 1.2.2,色谱条件: 色谱柱HYPersilBDSC185u，流动相甲醇－水（97：3），流速1.8ml/min,检测波长283nm，灵敏度0.02AuFS，衰减＝5，采用外标法进行定量１.２.３，样品处理：对固体样品，称取适量，加入１０倍正己烷提取后，真空回收正己烷，再加入无水乙醇定容到５０ｍｌ（控制浓度在０.１－０.３ｍｇ／ｍｌ）；对石油醚选脱液体液体样品，直接吸取一定量，真空回收石油醚后加无水乙醇定容５０ｍｌ（控制浓度在０．１－０.３ｍｇ／ｍｌ）１.3发酵培养[3] １.３.１，菌种活化：斜面保存菌种接入麦芽汁斜面培养基上，于28℃－30℃培养40hr。１.３.２，液体种子制备：接种到250mol三口瓶于摇床，28℃振荡培养１.３.３，发酵罐培养：接种量1%，通气量0.3vvm,转速300rpm，温度28℃，培养 20hr放罐，离心收集菌体 1.３.４，麦角固醇基本提取工艺：精确称取湿酵母　1 ０ｇ，加入2 ０倍体积 10%NaOH溶液于60℃水溶液中水解1 hr，离心收集残渣，加入５倍５％盐酸，６０度保温３０分钟，过滤并用水洗涤，滤渣加入０. 5倍蔗糖混匀并于50℃真空干燥烘干,得粗品1。１.３.５，精制：将粗品1干法装柱,用二倍体积石油醚反洗填料柱,流速1倍粗品1/小时，收集麦角固醇组分,回收石油醚得粗品2；粗品用9 5 %乙醇溶解，重结晶、过滤、烘干得成品 2，结果与讨论：２.１，碱降解条件初筛:以降解用碱浓度,降解温度,降解时间作为试验因素,每个因素选4个水平,见表１表１实验因素及水平由于低碱浓度下对菌降解率低，而高碱浓度下麦角固醇损失较大，因此在较低碱浓度下选择高温长时间，高碱浓度下选择低温短时间，实验设计及结果见表2 表 2初筛实验设计及结果 *残渣重量为粗品1的量减去加入蔗糖的量由以上结果可见碱浓度在10%时最有可能找到麦角固醇损耗小,而降解率较高的平衡点。确定碱浓度为10%，因此只有两因素4水平，采用单因素实验法，实验设计及结果见表3 表 3平衡点实验设计及结果由此可见B2C2为最佳条件,即在碱浓度为 10%,温度60度,时间1小时为最佳,此时残渣可降到原料湿重的5%,而含量几乎没有损失。 2.２，石油醚洗脱粗品１流速条件优化，见表４表４流速优化 2 .３，结论： 2.3.1，本研究以湿菌体直接加入酸碱降解预处理法取代传统的先烘干菌体后，再直接加入有机溶剂回流提取，可以大大降低有机溶剂用量，为发酵工厂废弃菌丝回收麦角加固醇提供成本支持。 2.3.2，本研究将蔗糖拌入降解残渣中烘干，可避免直接烘干时结块，形成较为均匀松散颗粒，有利于有机溶剂的渗入，使之类似于非极性吸附树脂，从而保证常温洗脱的高收率，据此取代传统加热回流提取法，降低了设备的安全要求，提高了安全生产系数。 2.3.3，采用本工艺提取麦角固醇，菌体可先采用温和条件提取醇脱氢酶、谷胱甘肽、细胞色素C等水溶性物质，从而提高废菌利用率。 2.3.4，本工艺仍存在废水量相对较大，对环境有一定污染，需进一步处理后方可排放。参考文献： 1．用酵母菌生产麦角固醇发酵工艺研究谭天伟张博润等微生物学通报 1996.23(2) 88 —91 2．高效液相色谱法测定酵母中麦角固醇含量谢和金肖毅郭建强等生物工程进展 2000.20(4) 75-76 3．麦角固醇高产酵母菌的快速筛选方法杨婉身梁如玉四川农业大学学报 1997 15 （3）：304-306 麦角固醇提取及分离纯化研究邱从平张慧波施立钦朱建华宁波职业技术学院 315800 摘要：麦角固醇是一种重要的化工原料，常用发酵工厂的废弃菌丝为原料提取，但由于菌丝中含量低，常用的有机溶剂萃取法，耗用大量的有机溶剂，使设备投资巨大，生产成本难以降低，本研究采用先酸碱降解，残渣加入等量蔗糖后装柱，常温洗脱、结晶，收率大于９０％，溶剂用量可降低８０％。关键词：麦角固醇；有机溶剂；酸碱降解；常温洗脱（上接第140页）状为主要目的。前面所述的应用于ⅢA型的可缓解症状的药物和方法，均可适用于ⅢB型。考虑到盆壁紧张性肌痛可能为ⅢB型的重要发病基础，近年有学者通过生物反馈技术训练、调节盆壁肌群的舒缩来达到解除痉挛、缓解疼痛的治疗目的。由于ⅢA和ⅢB病因未明，临床表现又多种多样，因而任何单一的治疗方法都不可能对所有的病人均产生理想的疗效。对这2类病人的治疗，我们认为应以根据病情及个体化的原则，采用以缓解症状为主要目的的综合治疗。值得注意的是，近年来非淋菌性尿道炎（NGU）的发病率较以往有升高趋势，因而临床上应考虑NGU合并前列腺炎的可能，对于在EPS中检出衣原体、支原体抗体的病人应给予积极的治疗。

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