首页 原核表达系统

原核表达系统

原核表达系统原核表达系统原核表达系统 ***基因公司技术讲座*** 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 原核表达系统分类分类方式分类表达调控方式组成型，诱导型表达产物定位分泌型，不分泌型（细胞内、细胞膜、周质空间）产物纯化...

原核表达系统原核表达系统 ***基因公司技术讲座*** 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 原核表达系统分类分类方式分类表达调控方式组成型，诱导型表达产物定位分泌型，不分泌型（细胞内、细胞膜、周质空间）产物纯化方式是否融合蛋白、是否一步亲和纯化产物溶解状况可溶、包含体、分泌型生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs * 基因功能研究 * 重组蛋白特性研究 * 重组蛋白制备/制药主要用途生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs NEB 公司的 IMPACTTM 系统 Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag 采用了最新的“可诱导的内含肽自身剪切”技术，使内含肽在适当的pH或还原条件进行自身剪切，无需另外加入蛋白酶就可将目的蛋白经过一步亲和层析从融合表达的蛋白中分离出来，大大提高了纯化效率。 InteinCBD MCS Target Gene Chitin Binding Domain Chitin-bound intein tag Multiple cloning site 世界首创独家提供生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 内含肽（Intein)内含肽（Intein) 内含肽是一种蛋白剪切元件（Protein splicing element), 是一些读框区中打断宿主基因编码区的序列。与内含子 (Intron) 不同的是，它们是在翻译后通过自身催化的蛋白剪切机制从蛋白前体中被剪切的。 InBase(The Intein Database) NEB’s web site: Technical Resource section 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs IMPACT-CN 系统特点 * 操作灵活——目的蛋白可在C端或N端与标记融合 * 目的蛋白产物序列不变 * 一步亲和纯化——无需另加蛋白酶除亲和标记 * 严谨的转录控制 * 目的蛋白能够进行C端标记独家的Intein 介导的肽连接技术（IPL）生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs IMPACT-CN 系统流程生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs IMPACT-TWIN 系统特点 * 操作灵活——目的蛋白可在C端或N端与标记融合 * 目的蛋白产物序列不变 * 一步亲和纯化——无需另加蛋白酶去除亲和标记 * 可选择硫醇试剂或pH和温度条件诱导Intein 自身剪切 * IPTG诱导的T7启动子，可实现高水平表达及严谨的表达调控 * 唯一可直接产生带N端Cys 和C端硫酯的蛋白的表达纯化系统纯化产物可方便地进行标记、连接及环化等操作独家的Intein 介导的肽连接技术（IPL）生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs IMPACT-TWIN 系统流程 Protein cyclization 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs NEB 公司的 IMPACTTM 系统载体选择 Vectors Intein length (amino acids) Target protein Fusion site Preferred residues at cleavage site Cleavage method Applications IMPACT-CN Kit pTYB1,2 454 C-terminus All except: P C N D R Thiol Purification;C-terminal thioester for protein ligation pTYB11,12 510 N-terminus All except: P S C T Thiol Purification IMPACT-TWIN Kit pTWIN1 154 198 N-terminus C-terminus S C G A M T All except: S P E D G A pH & temperature Thiol Purification;C-terminal thioester; defind N-terminus(e.g.Cys); protein ligation and cyclization pTWIN2 154 134 N-terminus C-terminus S C G A M T G A pH & temperature Thiol Purification;C-terminal thioester; defind N-terminus(e.g.Cys); protein ligation and cyclization Sold Separately pTYB3,4 and pKYB1 454 C-terminus All except: P C N D R Thiol Purification;C-terminal thioester for protein ligation pTXB1,3 198 C-terminus All except: P C N D R Thiol Purification;C-terminal thioester for protein ligation 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs pMAL蛋白融合及纯化系统特点 * 表达量高，稳定可靠经验证，75%以上的样本产量高达100mg/L * 产物可分布细胞质或周质空间分布周质空间可增强有二硫键的蛋白的折叠 * 与MBP融合可增加表达蛋白的溶解性 * 温和洗脱条件不用去垢剂及强烈变性生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs • A1:未诱导细胞 • A2:诱导细胞 • B1:直链淀粉柱第一次纯化 • B2: Factor Xa 处理后 • B3:直链淀粉柱第二次纯化生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs • pMAL-C2:无信号顺序，融合蛋白产物定位于细胞质中 • pMAL-P2:含信号顺序，融合蛋白分泌表达于细胞周质载体选择产量产物占总蛋白比例产物稳定性蛋白折叠 pMAL-C2 20-40% 更稳定 pMAL-P2 100mg 每升培养物 5-10% 特殊折叠必需:帶二硫键生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs PRO Bacterial Expression System ----- CLONTECH----- 特点 *严谨调控，高水平诱导表达新型的杂合启动子和操纵子，低背景，高表达，调控精确，可用于有毒或抑制生长的蛋白表达。 *产物便于纯化 N-端带有c-Myc 亲和标记和肠激酶位点 * 改造方便载体的三个主要的功能区各配有单一酶切位点，用户可根据需要对载体进行改造。生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs PRO Bacterial Expression System ----- CLONTECH----- 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs PRO Bacterial Expression System Simultaneous, independent expression of two proteins The pPROTet.E332-lacZ and pPROLar.A222-Luc Control Vectors were simultaneously propagated in DH5αPRO ----- CLONTECH----- 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs HAT Protein Expression & Purification System ----- CLONTECH----- 特点 *可在中性pH条件下纯化蛋白有效去除杂质 *纯化可采用变性或非变性条件降低蛋白酶活性，提高蛋白稳定性 * 提供纯化的专用树脂：TALON®IMAC 钴离子高度专一地亲和HAT和其它6×His蛋白，且洗脱条件温和，保证蛋白完整性 * pHAT-GFPuv 载体还带有荧光标记极大的方便了表达产物的检测、定位及纯化生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs HAT Protein Expression & Purification System ----- CLONTECH----- 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs QIAexpress 以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统特点 * 表达量高表达产物可占总蛋白的50% * 严谨调控 IPTG诱导的T5启动子，可表达有毒蛋白 * 基因克隆灵活：可选择N-端或C-端融合标记可选择一端或两端6×His标记 * 纯化方便：一步纯化可选择变性或不变性条件可选择多种灵敏的检测方法生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs QIAexpress 以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs QIAexpress 以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs QIAexpress 以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 纯化流程生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs QIAexpress 以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 表达系统调控方式纯化方式特点原理 CBD-intein融合于目的蛋白N端或C端, 可将CBD-intein融合于目的蛋白N端或利用intein在还原条件下裂解的特性便于亲和纯化并分离目的蛋白纯品 C端,无需蛋白酶切即可将融合端去除将目的蛋白的融合端去除可在目的蛋白的两端加上CBD- 目的蛋白两端的intein不同,一是在 intein融合物,分别用pH和thiol洗脱 pH7的条件下裂解另一为还原条件 pMAL Protein Fusion & Ptac 启动子诱导表达可溶每升培养物产量高达100 mg, 产物分 MBP促进融合蛋白溶解性,特异结合 Purification Kit 产物布细胞质和周质空间,有蛋白酶切位点 Amylose 可除去N端融合物 PROTet Bacterial PLtet0-1启动子严谨调控诱导产物可达2500倍,表达量高达总蛋 aTc与Tet阻遏物结合,调控PLtet0-1 Expression System anhydrotetracucline调控白的10% 启动子 PROLar Bacterial Plac/ara-1启动子更严谨杂和启动子提供更强的表达能力, Expression Vectors 的调控更严格调控 HAT Protein Expression EK位点可供Enterkinase切除N端融合 & Purification System 蛋白 QIAexpress Type IV Kit 强大的T5启动子, 2个 lac 表达量高达总蛋白的50%, 便于纯化, &QIAexpress Type ATG Kit 操纵子序列用于抑制T5 严谨型调控可以表达有毒蛋白, 提供 IPTG诱导表达带pREP 4的菌株用于更严谨表达. ATG Kit MCS的N端前带ATG cis-Repress pQE Vector Set 带cis-laclq 基因, 更强同上严谨型调控可以表达有毒蛋白, 抑制T5,更严谨调控无需pREP4 pQE-100 DoubleTag Vector Set 同上 N端His-Tag 同上,C端带Tag-100 epitope 同上 IMPACT-CN System IMPACT-TWIN Syst e m T7 promoter诱导表达同上 N端His-Tag N/C端His-Tag 同上 Plac启动子, IPTG诱导表达无无 N端His-Tag N端融合MBP,便于纯化同上低拷贝,对抑制元件更敏感 His-Tag特异螯合Ni离子 S U M M A R Y 生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs 基因公司技术支持*陈芳生物秀实验频道——生命科学实验中心 www.bbioo.com/bio101 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 www.bbioo.com/bbs

                    本文档为【原核表达系统】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
                    图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。 
 该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。

                    [版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。

                    本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。

                    网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
                

下载需要：免费已有0 人下载

立即下载

原核表达系统

你可能还喜欢