45095关于缓冲液

45095关于缓冲液谈谈缓冲液在使用于 HPLC 的移动相中，有的要在计算出磷酸二氢钠并溶解于水中之后，一边盯着 pH 计一边调整其 pH 值。对这一麻烦的操作，我们常常一面调整一面在想：要是只用蒸馏水便能分析就方便多了。这种缓冲液(buffer)规定了溶液中的氢离子浓度，起着决定 HPLC 之分离的重要作用。在由 ODS 柱的使用所代表的反相色谱分析中，抑制分析对象物之特定宫能团的离子离解。或者在积极地利用离解现象的离子 pair 对色谱法中决定其分离。甚至在离子交换色谱法中，可以说正是移...

谈谈缓冲液在使用于 HPLC 的移动相中，有的要在计算出磷酸二氢钠并溶解于水中之后，一边盯着 pH 计一边调整其 pH 值。对这一麻烦的操作，我们常常一面调整一面在想：要是只用蒸馏水便能分析就方便多了。这种缓冲液(buffer)规定了溶液中的氢离子浓度，起着决定 HPLC 之分离的重要作用。在由 ODS 柱的使用所代表的反相色谱分析中，抑制分析对象物之特定宫能团的离子离解。或者在积极地利用离解现象的离子 pair 对色谱法中决定其分离。甚至在离子交换色谱法中，可以说正是移动相的 pH 才是分离的基本。另外在水系 GPC 中，蛋白等仅以其分子的大小被分离，吸附、排斥等作用难以产生的 pH 被选出作为移动相。这个缓冲液是怎样地被选出的呢？先来看看缓冲液的性质吧。缓冲液的 pH 由下式表示： HA ]A[logpKapH − += Ka；离解定数，[]；浓度 HA；非离解型，A－；离解型缓冲液是一种具有这种性质的溶液：一般由弱酸与其盐构成，在其溶液中，当有例如其它的酸或碱加入之际，将保持 pH 与原来的值尽量相同。当 pH 为 pKa 时，弱酸的离解成份与非离解成份的浓度将相等。代表性弱酸的 pKa 为醋酸(4.8)，柠檬酸(3.1,4.7,5.4)，磷酸(2.1,7.2,12.3)，氨(9.3)。缓冲液的能力是所使用之弱酸盐的浓度越高则越大，还有 pH 越是接近所使用之弱酸的 pKa 附近也越大。pH 调在 pKa 的±1 程度的范围内应为适宜。此外，在作成缓冲液之际，如果不是当量加入弱酸和其盐，而是在比例上作考虑的话，则也可以不必有使用 pH 计的微调。现在来考虑一下缓冲液的设计上所必需的 HPLC 的特质吧。首先必须从检测一侧来考虑。假定现代是检测可见光的吸收的话，则上述的弱酸每种都能够使用。但在以紫外的短波长，例如 210nm 作为检测波长时，醋酸、柠檬酸等由于其自身对 210nm 具有吸收，因而不能使用。磷酸缓冲液在 HPLC 中多被采用，就是因为它对 UV200nm 以上不具有显著的吸收，故只要是通常的检测波长，不论何种皆可使用。此外，在 HPLC 中，相对于导入的试样量，移动相的量要压倒性地多得多。为此，移动相的每一单位量的缓冲能力小一些也就不要紧了。在 HPLC 中，浓度为 5mM 或者 2mM 的 buffer 1 也有被使用的。进一步从装置的保养上来看，盐是尽量稀为好，最好当然是没有。稍许超出一下缓冲液的概念，作为移动相的 pH 调整用，有时加入一定量的醋酸、三氟醋酸。它们没有 pH 调整的必要，因而其挥发性在装置保养上很为有益。进而在将 HPLC 使用于制备时，试样的浓缩将变得容易。如上所述，在将缓冲溶液用于移动相的场合，将要考虑其性质和 HPLC 的特质来设计。各位是不是也再一次考虑一下自己的分析条件呢？浓缓冲就此放置…… 将会因析出而堵塞 2

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