可见分光光度法测定酸腌菜中亚硝酸根的含量

安徽农业科学．Journal ofAnhui A ．Sci．2010。38(10 J：5312—5314 责任编辑 高晓余 责任校对 况玲玲 可见分光光度法测定酸腌菜中亚硝酸根的含量 田大民 ，刘向云 ，李晓 ，武文 (1．河南城建学院化工系，河南平顶山467044l；2．中平能化集团尼龙化工公司化工二厂，河南 平顶山467000；3．周口师范学院化学系，河南周口466001) 摘要 [目的]测定 lO种市售酸腌菜中亚硝酸根的含量。[方法]采用可见分光光度法，利用亚硝酸根可与试剂中性红、8一羟基喹啉分子 中苯环上的伯胺基发生重氮化反应，溶液由红色转为蓝色(Xmax=480 nm)，然后在氨性溶液中与8一羟基喹啉的羟基对位偶联生成偶氮 染料，溶液颜色由蓝色变为黄褐色(kmax=560 nm)这一性质测定酸腌菜中亚硝酸根的含量。f结果]10种市售酸腌菜中亚硝酸根含量 均没有超过国家食品 中亚硝酸盐含量规定 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 (≤3O rag／kg)，但其亚硝酸根离子的含量都是较高的。[结论]可见分光光度法测定酸腌 菜中亚硝酸根的含量，亚硝酸根浓度快速、简单、选择性好、灵敏度较高；消费者应少吃腌菜，尽量以新鲜的蔬菜为主食。 关键词 亚硝酸根；中性红；8一羟基喹啉；分光光度法 中图分类号 O657．32 文献标识码 A 文章编号 o517—6611(2010)10—05312—03 Visible Spectrophotometric Determination of Nitrite in Sour Pickles TIAN Da·min et al (Department of Chemical Engineering，Henan University of urban construction，467044) Abstract [Objective]Determination of nitrite content in 10 kinds of sour pickles．[Method]By using visible spectrophotometry and the na- ture of that nitrite with reagent neutral red，8-hydroxyquinoline benzene molecules Occurs on the primary amine diazotization reaction，the solu· tion colop was from red to blue(~．max=480 nm)，and then ammonia solution，with 8-bydroxyquinolineazo dyes generated hydroxyl coupling alignment，the solution became yellowish brown color from blue(kmax=560 nm)to determine the nitrite content in acid pickles．[Result] 10 kinds of commercially available acid content of nitrite in pickled vegetables did not exceed the State Food and nitrite content of the required standard(≤ 30 mr,／kg)，but the nitrite ion concentration was high．[Conclusion]Visible spectrophotometric determination of nitrite and con- centration of nitrite in acid pickles content is the fast，simple，good selectivity and high sensitivity；consumers should eat more fresh vegeta— bles，less sour pickles． Key words Ni~ite；Neutral red；8-hydroxyquinoline；Speetrophotometry 亚硝酸盐广泛存在于许多物质如土壤、水、蔬菜及腌制 动植物食品中，是水体中氮循环的重要中间产物 ，同时也 是很多动植物食品的食品添加剂，因此容易出现亚硝酸盐超 标的情况，亚硝酸盐在人体长期累积的情况下就容易出现中 毒。人群中流行病学调查表明，人类某些癌症，如胃癌、食道 癌、肝癌、结肠癌和膀胱癌等可能与亚硝胺有关。联合国环 境规划署 1987年报道称已发现的130多种亚硝胺中，80％以 上可使动物致癌 。 目前，测定亚硝酸根有很多方法，主要有分光光度法 、 荧光法 、催化光度法 、离子色谱法 、极谱法 等。荧光 光度法需要用有机试剂萃取，操作较麻烦，易造成污染；催化 光度法虽然灵敏度高，但选择性不好，干扰较严重；离子色谱 法、极谱法需要应用较贵重的大型仪器，条件苛刻，难以推 广。在这几种方法中，分光光度法简单、快速，因而被许多试 验采用。笔者亦采用可见分光光度法，利用亚硝酸根可与试 剂中性红、8-羟基喹啉分子中苯环上的伯胺基发生重氮化反 应，溶液由红色转为蓝色(hmax：480 l,lm)，然后在氨性溶液 中与8-羟基喹啉的羟基对位偶联生成偶氮染料，溶液颜色由 蓝色变为黄褐色(kmax=560 nm) 这一性质测定酸腌菜中 亚硝酸根的含量。 1 材料与方法 1．1 试验试剂 200 g／ml亚硝酸根标准溶液，5 g／m1的 亚硝酸根工作液，0．01％中性红水溶液，0．2％8-羟基喹啉乙 醇溶液，3 moVL HC1，7 mol／L氨水。 基金项目 作者简介 收稿日期 周口师范学院青年基金(zknuqn 200915)。 田大民(1964～)，男，河南民权人，副教授，从事分析化学与 功能材料学等方面的研究工作。 通讯作者，E．mail：chi。 nawuwen@ 126．tom。 20o9．12_25 1．2 试验方法 1．2．1 吸收曲线的绘制。在 25 rnl比色管中，加入 200 g／rnl的亚硝酸根标准溶液 1 ml，1．8 ITIl中性红，2．0 Il1l盐 酸，水 1O IT11左右，摇匀，静置 5 min后，加 2 fIll 8．羟基喹啉，2．5 ml氨水，定容至25 ml，摇匀。同时配制试剂空白，5 min后 ，以 实际空白为参比，用1 cm比色皿，在不同波长下测其吸光度。 1．2．2 标准曲线的绘制。分别取5 g／rnl的亚硝酸钠工作 液 0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5、4．0、5．0、 5．5、6．0 ml于1组25 fnJ比色管中，分别加入1．8 ml中性红， 2．0 ml HCI，加水至 l0 rIll，静置 5 min后，加2 ml 8-羟基喹啉， 2．5 ml氨水，定容至25 ml，以试剂空白为参比，用 1 crll比色 皿于560 nm处测试液吸光度。通过计算，这一组比色管中 亚硝酸钠的浓度分别为0．04、0．08、0．12、0．16、0．20、0．30、 0．40、0，50、0．60、0．70、0．80、1．00、1．1O、1。20 mg／,~。然后根 据所记录数据，绘制其标准曲线。 1．3 样品测定条件的选择 1．3．1 中性红 、盐酸 、8一羟基喹啉、氨水用量的选择。按照 “1．2．1吸收曲线的绘制”测定亚硝酸根标准溶液吸光度，在 其他条件不变的条件下，分别研究不同中性红用量(1．2、 1．4、1．6、1．8、2．0、2．2 m1)，不同盐酸用量(1．6、1．8、2．0、2．2、 2．4 )，不同 8一羟基喹啉用量(1．0、1．2、1．4、1．6、1．8、2．0、 2．2 m1)、不同氨水用量(1．4、1．6、1．8、2．0、2．2、2．4 m1)对溶 液吸光度的影响。 1．3．2 试剂加人顺序对吸光度的影响。测定方法同“1．2．1 吸收曲线的绘制”，设定4种试剂加入顺序：(1)NO 一+中性 红 +盐酸 +8-羟基喹啉 +氨水；(2)NO：。+盐酸 +中性红 + 8一羟基喹啉+氨水；(3)NO：一+中性红+盐酸 +氨水 +8．羟 基喹啉；(4)NO 一+盐酸+中性红+氨水+8．羟基喹啉。 1．4 样品的处理与测定 1．4．1 样品的采集。超市购买l0种酸腌菜，10种酸腌菜的 38卷10期 田大民等 可见分光光度法测定酸腌菜中亚硝酸根的含量 名称分别是芥菜丝、腌萝 卜条、八宝菜 、腌青菜 、黄瓜菜、海白 菜 、酱菜、雪里红、海带丝、榨菜。 1．4．2 样品的测定。将 1O种菜用粉碎机处理，分别精确称 取粉碎后的粉末 10 g于小烧杯 中，分别加 60 rrd水浸腌 3O rain，加入活性碳脱色，分别过滤滤液至 l0个 100 ml容量瓶 中，定容至 100 ml，容量瓶编号为1～10。准备 1组 25 fnl比 色管 ，分别取 10种滤液 10 ml于 1组 25 ml比色管中，加入 1．8 ml中性红 ，2．0 ml 3 mol／L盐酸，静置5 rain后 ，加 2 ml 8一 羟基喹啉，2．5 ITll氨水，定容至 25 mJ，同时配制试剂空白，5 min后，以试剂空白为参比，用 1 cnl比色皿于 560 rim处测定 试液吸光度，每种样品重复测定3次，取平均值。 2 结果与分析 2．1 吸收曲线的绘制 按照“1．2．1”试验方法，以吸光度 为纵坐标 ，以浓度为横坐标绘制标准 曲线如图 1，由图 1可 知，在 ：560 nm处有最大吸收。 波长 Wavelength／f1N1 图1 吸收曲线的绘制 Fig．1 The drawing of absorption curve 2．2 标准 曲线的绘制 按照“1．2．2”实验方法 ，以吸光度为 纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线如图2。直线方程为 A 7---一0．072 57+0．194 62C，相关系数 R=0．995 06。 llaNO2浓度 Concentration of Nail?2 lag／ml 图 2 标准 曲线 F ．2 The standard curve 2．3 样品测定条件的选择 2．3．1 中性红用量的选择。由图3可知，中性红的用量增 加，体系的吸光度也增加，但中性红过量太多(超过 1．8 m1) 时，会导致产物的吸收光谱无最大吸收峰，故试验选择加入 中性红的量为 1．8 ml。 2．3．2 盐酸用量的选择。由图4可知 ，当盐酸用量在 1．5～ 2．5 In1之间，体系的吸光度值较大，在2．0 rnl处有最大值，故 选用盐酸加入量为2．0 ml。 2．3．3 8-羟基喹啉用量的选择。由图 5可知 ，当 8一羟基喹啉 用量在1．0—2．0 I1ll时，体系的吸光度随 8一羟基喹啉用量的 中性红用量 Neutral red dosage m【 图3 中性红用量与吸光度的关系 Fig．3 The relationship between the absorbance and neutral red dosage 盐酸用量 Hydro datoric acid usageⅣml 图4 盐酸用量与吸光度的关系 Fig．4 Th e relationship between the absorbance an d hydrochlo- tic acid usage 增加而增大，超过2．0 ml，随8一羟基喹啉用量的增加吸光度 反而减小 ，故 8一羟基喹啉选用 2．0 。 羟基喹啉用量 8-hydroxyquinol i∞ usage N mL 图5 8-羟基喹啉用量与吸光度的关系 Fig．5 The relationship between the absorbanee and 8- hydroxyquinoline usage 2．3．4 氨水用量的选择。由图6可知，偶联反应只能在碱 性条件下发生，但在强碱性溶液中，中性红易成沉淀，故选用 弱碱性的氨水，有利于提高体系的稳定性。当氨水用量在 2．0～3．0 ml，吸光度较大且较稳定，选用 2．5 ml。 2．3．5 试剂加入顺序对 吸光度的影 响。由试验结果可知 ， 按(1)顺序试液的吸光度最大，按(2)顺序吸光度次之，按 (3)、(4)顺序吸光度明显偏低，原因是按(2)顺序亚硝酸根 在酸性条件下分解而使吸光度偏小；按(3)、(4)顺序可能使 重氮化产物在碱性溶液中分解，使偶联反应物减少，致使吸 光度明显偏低。故本实验选用(1)顺序加入试剂。 2．4 酸腌菜中亚硝酸根的测定结果 由表 1可知，此次测 8口皇』U∞。《 8 g吕∞兽 8qgJo∞D《 8口皇J0∞。 ∞3u j(]∞0《 5314 安徽农业科学 2010盎 氨水-用量 Ammonin ccms~ptionⅣml 图6 氨水用量与吸光度的关系 Fig．6 The relationship between ammonia consumption and the absorban ~e 定的几种腌菜，其亚硝酸根含量均没有超过国家食品中亚硝 酸盐含量规定标准(430 mg／kg)。但是需要引起我们注意 的是无论哪种酸腌菜，其亚硝酸根离子的含量都是较高的。 3 小结 人们长期食用酸腌菜，其中的硝态氮在被食用之前就可 部分还原成亚硝态 ，而试验结果表明酸腌菜的亚硝酸根含量 很高，长期食用会对人们的身体造成危害，该研究通过测定 腌菜中亚 酸根的含量，提示人们酸腌菜可能对人体健康的 危害，建议人们少吃腌菜，尽量以新鲜的蔬菜为主食。该实 验方法测定亚硝酸根浓度快速、简单、选择性好、灵敏度 较高。 表1 样品测定结果 Table 1 Determination results of samples 参考文献 『1 I BERNARD JUSKOWIAK．WALEN．rY SZCZEPANIAK．Sensitive determi— nation of nitrite by means of a Landolt．．type reaction in fluorescent aggre．． gates of a binaphthy1．basedⅢphiphile[J]．Microchimlca Acta，1996(5)： lo0l一11l3． [2]王广健 藏红T一亚硝酸根1禺联反应及其应用于光度法测定亚硝酸根离 子[J]．分析化学，1998，26(4)：495—497． [3]杨志斌，万红．H一酸重氮盐自偶联反应及其分析应用研究[J]．分析化 学，1992，20(7)：816—818． [4]张改兰，张振辉 亚硝酸根的催化动力学分析法：V．甲基红 一溴酸钾体 (上接第 5311页) 次为：乙醇体积浓度>提取温度 >提取时间>料液比。最佳 组合为 A2B C D，，即提取温度为 80 、乙醇体积浓度为 50％、料液比为 1：12、提取时间为60 rain。 3 小结 采用乙醇溶液提取椰子多酚，该工艺设备简单、操作方 便。通过单因素和正交试验对椰子多酚提取工艺条件进行 了优化，试验结果表明：对提取产率的影响程度从高到低的 因素依次是乙醇体积浓度、提取温度、提取时问、料液比，最 佳提取条件为：乙醇体积浓度为50％、提取时间为60 rain、提 取温度为80℃、料液比为 12。在此条件下，椰子多酚以 PC计提取产率为4．48％。该研究确立了采用乙醇溶液作为 浸提剂从椰子粉中提取椰子多酚的最佳工艺条件 ，为椰子多 酚的工业化生产提供理论依据。 参考文献 [1]BAGCHI D，BAGCHI M，STOHS S J，et a1．Free radicals and grape seed 系[J]．分析实验室，1990，9(6)：24-27． [5]刘福铃，戴行均．食品物理与化学分析法[M]．北京：轻工业出版社 l987·177—187． [6]胡道道．生姜对亚硝胺合成阻断作用初探[J]．食品科学，1989(6)： 3511—3513． [7]刘近周．大蒜阻断亚硝胺的化学合成[J]．营养学报，1986，8(1)：91— 93． [8]高元，肖和宇．食品中亚硝酸盐对人体健康危害及检测方法简介[J]． 中国卫生监督，2001，8(4)：52-55． proanthocyanid in extract：importance in human health and disease preven。 tion[J]．Toxicology，2O0O，148：187—197． [2]BRUVNE T D，PIETERS L，DEELSTRA H，et a1．Condensed vegetable tan— nins：biodiversity in structure and biological activities[J]．Biochemical Systematics an d Ecology ，1999，27：445—459． [3]董文宾，胡英，周玲，等．离子沉淀法制备茶多酚的工艺研究[J]．食品 科技，2002(9)：15—17． [4]王利，翟金兰，杨婷，等．茶多酚的应用及提取方法[J]．食品研究与开 发，2OO6，27(3)：154—156． [5]汪金莲，邱业先，陈宏伟，等．茶多酚对几种植物病原真菌的抑制作用 及柳理研究[J]．天然产物研究与开发，2o08(4)：690一科 ． [6]王川．葡萄籽单宁的抗氧化性研究[J]．食品科技，2009，34(2)：184一 l87． [7]李昌如．国外椰子加工和和利用[J]．热带农业科学，1987(1)：78-81． [8]冯美利，李杰，王必尊，等．我国椰子综合加工研究进展概述[J]．中国 热带农业，2o07(5)：30—31． f9]SINGLETONv L，ROSSI J A．Colofimetrv oftotal phenolieswith phospho． molybdic—phosphotungstie acid reagents[J]．Am J Enal Vitic，1965，16：144 — 158． [10]朱登祥，尉连玲，侯志敏．葡萄籽中多酚类物质提取工艺研究[J]．安 徽农业科学，2OO8，36(17)：7068-7070． [11]陈红惠，吕静，彭郦，等．雪莲果叶中多酚的提取工艺研究[J]．食品科 学，2O09，30(2)：88—91． 8口 J0∽ 《