慢病毒载体构建及包装操作手册
上海市徐汇区斜土路 1175号 1501 E-mail:service@hanbio.net
Tel：021-51296258 http://www.hanbio.net
1
慢病毒载体构建及包装操作手册
（一） 实验流程（1 和 2 为并列步骤）
1.慢病毒过
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
达质粒载体的构建
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保
真 KOD 酶，3K 内突变率为 0%)从模板中（CDNA 质粒或者文库）调取
目的基因 CDS 区（coding sequence）连入 T 载体。将 CDS 区从 T 载
体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。
2.慢病毒干扰质粒载体的构建
合成 siRNA 对应的 DNA 颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载
体
3. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化
制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体
分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染 293T 细胞，转染后 6 h 更换
为完全培养基，培养 24 和 48h 后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞
上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
(二) 实验
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
2.1 慢病毒载体、包装细胞和菌株
该病毒包装系统为三质粒系统，组成为 pspax2, pMD2G,
慢病毒载体构建及包装操作手册
上海市徐汇区斜土路 1175号 1501 E-mail:service@hanbio.net
Tel：021-51296258 http://www.hanbio.net
2
pLVX-IRES-ZsGreen1/pLVX-shRNA2。其中质粒上的 ZsGreen1 表达框
能表达绿色荧光蛋白（GFP）。
载体信息
1) 慢病毒克隆载体图谱如下：
2） 包装质粒信息如下：
慢病毒载体构建及包装操作手册
上海市徐汇区斜土路 1175号 1501 E-mail:service@hanbio.net
Tel：021-51296258 http://www.hanbio.net
3
PMD2G 载体图谱和序列信息
PSPAX2 载体图谱和序列信息：
细胞株 293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细
胞，生长培养基为 DMEM(含 10% FBS)。贴壁细胞经培养生长增殖形成
慢病毒载体构建及包装操作手册
上海市徐汇区斜土路 1175号 1501 E-mail:service@hanbio.net
Tel：021-51296258 http://www.hanbio.net
4
单层细胞。
菌株 大肠杆菌菌株 DH5α。用于扩增慢病毒载体和辅助包装
载体质粒。
慢病毒载体构建及包装操作手册
上海市徐汇区斜土路 1175号 1501 E-mail:service@hanbio.net
Tel：021-51296258 http://www.hanbio.net
5
(三)流程图
浙公网安备 33021202002483