麦冬的HPLC指纹图谱分析方法研究

2007年 1月 第29卷 第 1期 中成 药 Chinese Traditional Patent Medicine January 2007 V01．29 No．1 麦冬的 HPLC指纹图谱分析方法研究 白 晶， 于治国 (沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳110016) 关键词：麦冬；指纹图谱；高效液相色谱法 摘要：目的：研究麦冬的指纹图谱。方法：高效液相色谱法，Kromasil cm柱(5 m，4．6 mm×250 mm)，乙腈一0．01％磷酸 水溶液梯度流动相，流速 1．0 mL／min，检测波长为297 nm。结果：标示出30个共有峰。结论：方法可靠、简便，为提高麦 冬质量控制 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 提供参考。 中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：1001-1528(2007)014)012-02 HPLC fingerprint analysis of Rad／x Ophiopogonis BAI Jing， YU Zhi-guo (School ofPharmacy·Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 11001 6，China) KEY W ORDS：Radix Ophiopogonis；fingerprint；HPLC ABSTRACT：AIM ：To establish chromatography fingerprint of Radix Ophiopogonis．METHODS：HPLC was ap- plied on a Kromasil C18 column(5 txm，4．6 mm×250 mm)with CH3CN-0．01％H3PO4 solution by gradient elu- tion，flow-rate of 1．0 mL／min，and the UV absorbance was monitored at 297 am．RESULTS：30 common peaks were picked up．CONCLUSION：This method is reliable，simple and provides a reference standard for the quality control of Radix Ophiopogonis． 麦冬为百合科植物麦冬 Ophiopogon japonicus(Thunb．) Ker．Gaw1．的干燥块根。具有养阴生津、润肺清心之功效。用 于肺燥干咳，虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠等症。本文采用 高效液相色谱法，建立了麦冬的指纹图谱分析方法。 1 仪器与试药 Agilent 1100高效液相色谱仪，包括：四元泵，在线脱气 机，柱温箱，VWD检测器，化学工作站(chemstation system工 作站)； 槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批 弓：081- 200406)；乙腈为色谱纯(fisher公司)，水(二次重蒸水)，磷 酸为分析纯(北京化工厂)。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 色潜柱：Kromasil Cl8柱(5 Ixrn，4．6 mm×250 mm)；流速 1．0 mL／min；检测波长为297 nm；柱温：35。C；乙腈 一0．01％ 磷酸水溶液梯度洗脱；分析时间65 min；进样量：20 L。 2．2 对照品溶液的制备 12 精密称取槲皮素对照品0．O06 25 g，置50mL量瓶中，用 甲醇溶解并稀释至刻度 ，摇匀，即得。 2．3 供试品溶液的制备 称取麦冬药材5 g，加甲醇60 mL水浴回流提取 1 h，滤 过，蒸干，用甲醇3 mL溶解，上AB一8型大孔吸附树脂柱(10 cm×1．5 cm)，保留1 h后洗脱，依次用 150 mL水，100 mL 10％乙醇洗脱并弃去，继用 100 mL 95％乙醇洗脱，收集洗脱 液并蒸干，残渣用5 mL水溶解。精密量取上述溶液以5：l (体积比)精密加入槲皮索对照品溶液，混匀，经0．45 m微 孔滤膜滤过，即得。 2．4 方法学考察 2．4．1 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在 l，2，4，8， 24 h进样分析， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，各色谱峰的相对保 留时间和其相对峰面积比值基本一致，RSD均小于3．0％， 符合指纹图谱技术要求。 2．4．2 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样5次，记 录色谱图。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和其相对峰 收稿日期：2005·11—17 作者简介：白 晶(1980～)。女。硕士生。电话：01044934040．14，E．mail：bxl111@sohu．corn。 通讯作者：于治国(1958～)，男，硕士研究生导师，研究方向：中药质量控制与药物动力学研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com 2007年 1月 第29卷 第 1期 中 成 药 Chinese T1-Hditional Patent Medicine January 2007 VoI．29 No．1 面积比值基本一致，RSD均小于 3．O％，符合指纹图谱技术 要求。 2．4．3 重复性试验 取同一批号药材5份，按“供试品溶液 的制备”项下的方法操作，在上述色谱条件下进样分析，记录 指纹图谱。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和其相对峰 面积比值基本一致，RSD均小于 3．0％，符合指纹图谱技术 要求。 2．5 麦冬指纹图谱及技术 参数 转速和进给参数表a氧化沟运行参数高温蒸汽处理医疗废物pid参数自整定算法口腔医院集中消毒供应 2．5．1 测定方法 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照 品溶液及供试品溶液各 20 ，注入液相色谱仪，记录色谱 图，即得。(见图1)。 hL JIlI ， ． ^刖L～．— ． 0 10 20 30 4O 5O 60 r／min A 0 lO 20 30 40 50 60f／min B 9 30 儿IL 搬 ． 20 √／ 』LL 妣瓤． }j2 — 一 ^ ^』^ 0 l0 20 30 4U 5U 6Uf／rain C A麦冬药材 B对照品(槲皮素) C麦冬药材十对照品 图1 麦冬的高效液相指纹图谱 Fig 1 HPLC fingerprint of Rad／x Ophiopogonis 2．5．2 指纹图谱及共有指纹峰的标定 按上述方法检测 10批麦冬药材的指纹图谱，共获得30个共有峰。应用中药 色谱指纹图谱相似度 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 系统(A版，国家药典委员会)将 10批麦冬药材的指纹图谱建立共有模式，然后选用夹角余 弦法考察样品与共有模式之间的相似度，结果分别为： 0．980，0．925，0．945，0．988，0．972，0．944，0．963，0．932， 0．985，0．918。 2．5．3 共有指纹峰相对保留时间及相对峰面积比值 根 据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》 ，以参 照峰(S)的相对保留时间和峰面积为1，计算 10批指纹图谱 中30个共有指纹峰的相对保留时间为：1(0．170-0．171)，2 (0．366-0．367)。3(0．377-0．383)，4(0．396-0．397)，5(0．417- 0．418)，6(0．432-0．434)，7(0．455-0．456)，8(0．536-0．539)， 9(0．589-0．594)，l0(0．603-0．606)，11(0．622-0．623)，l2 (0．642-0．643)，13(0．678-0．680)，14(0．802-0．803)，15 (0．812-0．813)，16(0．842-0．843)，17(0．876-0．877)，18 (0．913-0．914)，S(1．000)，19(1．287-1．289)，20(1．301- 1．304)。21(1．383-1．386)，22(1．395-1．398)，23(1．417- 1．423)，24(1．435-1．438)，25(1．469，1．472)，26(1．484- 1．487)，27(1．539-1．542)，28(1．557—1．561)，29(1．616- 1．620)，30(1．643—1．648)； 30个共有指纹峰 的相对峰面积分别为：1(0．049- 0．375)，2(0．178-0．540)，3(0．252-1．243)，4(0．070-0．500)， 5(0．032-0．063)，6(0．037-0．174)，7(0．097-0．425)，8 (0．563．1．122)，9(0．152-1．249)，10(0．104-0．446)，11 (0．056-0．135)，12(0．042-0．158)，13(0．030-0．120)，14 (0．044-0．074)，15(0．053-0．122)，16(0．080-0．182)，l7 (0．044-0．244)，18(0．098-0．364)，S(1．000)，19(0．040— 0．200)，20(0．125-0．302)，21(0．070-0．242)，22(0．034- 0．128)，23(0．331．1．283)，24(0．384，1．398)，25(0．198- 1．052)。26(0．081 ．334)，27(0．074-0．327)，28(0．161- 0．784)，29(0．740-2．132)，30(0．607—1．86O) 3 讨论 3．1 样品来源 10批麦冬药材均来源于百合科植物麦冬 Ophiopogonjaponicus(Thunb．)Ker-Gaw1．；产地：1～5批药材 产白绵阳市三台县，6～8批药材产自慈溪市，9、10批药材产 自杭州市。 3．2 检测波长的选择 在对供试品溶液进行指纹图谱条件 摸索时，考察了320、297、254、208 nm检测波长下的色谱图。 其中297 nm波长下检测色谱峰较多，分离度可以达到指纹 图谱要求的标准，而且麦冬中高异黄酮类成分在此波长下多 有最大吸收L2j，因此选 297 nm为检测波长。 3．3 供试品溶液制备方法的选择 本实验对水提醇沉法 、 超声波振荡法、热回流提取法3种方法进行了考察，结果显 示，热回流提取法所得色谱峰较多。采用甲醇热回流提取 后，须过AB-8型大孔吸附树脂柱并采用大量的水洗脱去糖， 继用95％乙醇洗脱富集。 3．4 流动相的选择 本试验比较了甲醇一o．01％磷酸水溶 液、乙腈．水、乙腈-0．01％磷酸水溶液3种不同的梯度洗脱溶 剂系统，以乙腈-0．01％磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系统所得 图谱的峰形较好、分离度大，所以选用乙腈一o．01％磷酸水溶 液梯度洗脱溶剂系统为本试验的流动相系统。 3．5 参照物的确定 麦冬药材中不含槲皮索，相同色谱条 件下，槲皮素与麦冬药材中各成分有较好的分离，且来源稳 定(由中国药品生物制品检定所提供)，因此选槲皮素作为 参照物。 参考文献： [1] 中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)[s]．中国药品 标准，2000，1(4)：3-7． [2] 黄文风，郭舁平，蔡 琪．增液口服液中麦冬高异黄酮的高效 液相色谱法测定【J]．福建药学杂志，1992，4(2)：7-8． 13 维普资讯 http://www.cqvip.com