冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释放动力学研究

冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释放动力学研究 刘　颖 , 张　萍 , 冯年平 3 , 张　欣 , 许　洁 (上海中医药大学 中药学院 , 上海 201203) [摘要 ]　目的 :研究冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释放特性 ,探讨释药机制。方法 :利用 HPLC测定冬凌 草甲素的含量 ,以反向透析法进行冬凌草甲素自微乳的体外释放实验 ,考察释放介质、搅拌速度和处方因素对药物 释放的影响。采用相似因子法比较释药曲线的相似性 ,利用药物释放模型方程拟合释放曲线。结果 :释放介质对 药物释放无显著影响 ;在 50～100 r·m in - 1药物释放曲线具有相似性 ;冬凌草甲素自微乳与乙醇溶液的释放曲线相 似 ;冬凌草甲素自微乳在 pH 718 PBS中 , 30 m in释放达 65% ,释放曲线符合 H ixson2Crowell方程。结论 :冬凌草甲 素自微乳释药较快 ,在水性环境中自发形成的微小乳滴在释药过程中粒径和表面积均发生改变 ,药物分子透膜为 被动扩散过程。 [关键词 ]　冬凌草甲素 ;自微乳给药系统 ;体外释放动力学 ;反向透析法 [中图分类号 ] R 283　[文献标识码 ] A　[文章编号 ] 100125302 (2008) 1822049204 [收稿日期 ]　2008202218 [基金项目 ]　上海市教委重点学科建设项目 (J50302) [通讯作者 ]　3 冯年平 , Tel: (021) 51322197, Fax: (021) 51322197, E2 mail: npfeng@hotmail. com 　　冬凌草甲素 (oridonin)是从唇形科香茶菜属植 物冬凌草 R abdosia rubescens ( Ham sl. ) Hara中提取 分离出的一种活性化合物 ,具有较强的抗肿瘤作用 , 作用机制涉及抑制肿瘤细胞的增殖、诱导细胞凋亡 和抑制肿瘤的血管生成等 [ 122 ]。冬凌草甲素属于难 溶性药物 ,生物利用度差 ,从而限制了其临床应用。 研究表明自微乳给药系统 ( self2m icroemulsifying drug delivery system, SMEDDS)口服后通过提高药物的溶 解性、促进淋巴吸收以及增加肠渗透性等来提高难 溶性药物的生物利用度 [ 3 ]。为此 ,本研究制备了冬 凌草甲素自微乳制剂 ,采用反向透析法考察自制的 冬凌草甲素自微乳制剂的体外释放特性 ,并初步探 讨其体外释药机制 ,为制剂的进一步研究提供依据。 1　材料 冬凌草甲素原料 (南京青泽生物制品有限公 司 ,纯度 > 98% ) ;冬凌草甲素对照品 (江西本草天 工科技有限公司 ) ; maisine 3521, labrafac CC, transcu2 tol P (法国 Gattefosse公司赠送 ) ; cremophor EL (德 国 BASF公司赠送 ) ;甲醇 (色谱纯 ,上海安谱科学仪 器有限公司 ) ;其余试剂均为分析纯。 Angilent 1200 series高效液相色谱仪 ; Agilent G1314A紫外 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 器 ; BP210S电子天平 (德国 Sarto2 rius) ; ZRS - 4智能溶出试验仪 (天津大学无线电 厂 ) ; PHS - 3S型 pH计 (上海精密科学仪器有限公 司 ) ; DKB - 501A型超级恒温水槽 (上海精宏实验设 备有限公司 ) ;透析袋 (直径 25 mm,截留相对分子 质量 12 000～14 000,上海西唐生物科技有限公 司 )。 2　方法与结果 2. 1　HPLC分析方法的建立 2. 1. 1　色谱条件 　Kromasil C18色谱柱 ( 416 mm × 250 mm, 5μm ) ;流动相甲醇 2水 ( 60∶40) ;流速 110 mL·m in - 1 ;柱温 30 ℃;检测波长 238 nm;进样量 20μL。 2. 1. 2　方法学验证 　精密称取冬凌草甲素对照品 适量 ,用甲醇配制 012, 110, 210, 510, 1010, 1510, 2010 mg·L - 1的冬凌草甲素溶液 ,进样 ,测定。以冬 凌草甲素的峰面积 (A )对浓度 ( C )作线性回归 ,得 冬凌草甲素的标准曲线方程 A = 25165C - 21582 5, r = 01999 8 ( n = 3)。线性范围 012～20 mg·L - 1。 高、中、低 3种浓度的回收率为 9911% ～10013% ( n = 5) ,日内、日间精密度 RSD均小于 2% ( n = 5)。 2. 2　冬凌草甲素自微乳制剂的制备 精密称取冬凌草甲素、处方量的油相 [ maisine 35212labrafac CC (1∶1) ] ,表面活性剂 cremophor EL, 助表 面 活 性 剂 transcutol P [ ( W油相 2W表面活性剂 2 W助表面活性剂 (30∶23∶47) ] ,于 50 ℃水浴混匀 ,缓慢振 ·9402· 第 33卷第 18期 2008年 9月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica 　　　　　　　Vol. 33, Issue　18 Sep tember, 2008 荡至澄清透明 ,即得冬凌草甲素自微乳制剂。 2. 3　体外释放实验 实验前先将透析袋在蒸馏水中室温浸泡 24 h。 按照《中国药典 》2005年版附录 ⅩC第三法进行。 释放介质为 250 mL PBS(pH 618) ,搅拌转速 50 r· m in - 1 ,温度 37 ℃。取 6只大小形状相同的透析袋 , 精密吸取 2 mL释放介质分别加至每个透析袋中 ,两 端用透析夹夹好 (透过面积大小应相同 ) ,将透析袋 完全浸入在释放介质中 ,平衡 12 h。称取自微乳制 剂 (含 5 mg冬凌草甲素 )于释放介质中 ,分别于 10, 30, 60, 90, 120 m in及 12 h取透析袋一只 ,同时补充 2 mL的释放介质。取 20μL袋内溶液 ,经 HPLC进 样测定 ,计算冬凌草甲素浓度。求累积释放率 [ 4 ] , 计算公式如下 : 累积释放率 ( % ) =Q t /Q∞ ×100% Q t为 t时的释药量 , Q∞为 12 h的总释药量 2. 3. 1　释放介质对药物释放的影响 　称取冬凌草 甲素适量 ,分别以 pH 618 PBS, 011 mol·L - 1盐酸、 水为溶剂 ,配制含冬凌草甲素约 20 mg·L - 1的溶 液 ,置于 37 ℃恒温水浴中 ,分别于 0, 10, 30, 60, 90, 120 m in及 12 h取样 ,经 HPLC测定并计算含量 ,考 察稳定性。在 12 h内冬凌草甲素在 3种溶液中的 含量均无明显变化 , RSD < 1% ,表明冬凌草甲素在 释放介质中基本稳定。 分别以 011 mol·L - 1 HCl, pH 618 PBS和 H2 O 为释放介质 ,采用 2. 3项下方法考察冬凌草甲素自 微乳的体外释放。释放曲线如图 1所示。 图 1　冬凌草甲素自微乳在不同的释放介质中的 体外释放曲线 ( €x ±s, n = 3) 　　采用相似因子 ( f2 )法比较释放曲线的相似性。 f2的计算公式如下 : f2 = 50 lg{ [ 1 + 1N ρNi = 1 (X ti - X ri ) 2 ] - 1 /2 ×100} 式中 , X ti与 X ri分别表示受试和参比制剂于 i点 的平均累积释放度 ,在本研究中分别表示为同一制 剂在不同释放条件下于 i点的平均累积释放度。N 为测试总点数。 f2表示释放曲线的累积释放率相似 性 ,当 50≤f2 ≤100时表示两条释放曲线相似。经 计算得不同释放介质中的释放曲线之间的 f2值分别 为 72108 ( PBS和 H2 O ) , 64190 (HCl和 PBS) , 70129 (HCl和 H2O ) ,表明不同的释放介质对药物的释放 无影响。 2. 3. 2　搅拌速度对药物释放的影响 　测定冬凌草 甲素自微乳在搅拌速度分别为 50, 75, 100 r·m in - 1 下的释放 ,释放曲线如图 2所示。 图 2　冬凌草甲素自微乳在不同搅拌速度下的 体外释放曲线 ( €x ±s, n = 3) 　　经计算在不同搅拌速度下的释放曲线之间的 f2 值分别为 78132 (100, 75 r·m in - 1 ) , 82159 (75, 50 r ·m in - 1 ) , 69180 (100, 50 r·m in - 1 ) ,表明释放曲线 两两之间具有相似性 ,在 50～100 r·m in - 1搅拌速 度对药物的释放无影响 ,从而推测冬凌草甲素自微 乳制剂进入体内后药物释放将不受胃肠道蠕动激烈 程度的影响。 2. 3. 3　处方因素对药物释放的影响 　分别测定了 冬凌草甲素自微乳、冬凌草甲素乙醇溶液、冬凌草甲 素原料的体外释放。冬凌草甲素乙醇溶液制备方法 如下 :称取冬凌草甲素 ,用乙醇溶解完全溶解即得。 释放曲线如图 3所示。 图 3　冬凌草甲素在不同处方中的体外释放曲线 ( €x ±s, n = 3) 　　从图 3可知 ,冬凌草甲素自微乳的体外释药较 快 ,在 30 m in时约有 65%药物被释放 ,基本接近冬 凌草甲素乙醇溶液的药物释放。经计算冬凌草甲素 自微乳、乙醇溶液和原料的释放曲线两两之间的 f2 值分别为 62186 (自微乳和乙醇溶液 ) , 12120 (乙醇 ·0502· 第 33卷第 18期 2008年 9月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica 　　　　　　　Vol. 33, Issue　18 Sep tember, 2008 729zhangjian 高亮 729zhangjian 高亮 729zhangjian 高亮 729zhangjian 高亮 729zhangjian 高亮 溶液和原料药 ) , 14115 (自微乳和原料药 ) ,表明冬 凌草甲素自微乳的体外释放曲线与冬凌草甲素乙醇 溶液的相似 ,两者均与原料药的释放曲线有明显差 异。 对冬凌草甲素自微乳及乙醇溶液的释药数据分 别用以下方程进行拟合 :零级释放 ;一级释放 ; H igu2 chi方程 ; H ixson2Crowell方程 ; R itger2Peppas方程 ,拟 合结果分别见表 1, 2。 表 1　冬凌草甲素自微乳释药数据拟合的回归方程及 相关系数 ( n = 3) 模型 回归方程 r 零级动力学 Q t = 01719 4 t + 251892 01889 2 一级动力学 ln (1 - Q t /Q∞ ) = - 01032 t - 01050 6 01984 6 H iguchi方程 Q t = 71733 7 t1 /2 + 181714 01966 2 H ixson2Crowell方程 (Q∞ - Q t ) 1 /3 = 01024 5 t + 01556 7 01990 6 R itger2Peppas方程 ln (Q t /Q∞ ) = 01401 ln t - 11867 01974 8 表 2　冬凌草甲素乙醇溶液释药数据拟合的回归方程及 相关系数 ( n = 3) 模型 回归方程 r 零级动力学 Q t = 01504 3 t + 461784 01876 4 一级动力学 ln (1 - Q t /Q∞ ) = - 01030 4 t - 01279 5 01991 8 H iguchi方程 Q t = 71716 8 t1 /2 + 211216 01940 4 H ixson2Crowell方程 (Q∞ - Q t ) 1 /3 = 01023 7 t + 01725 8 01968 2 R itger2Peppas方程 ln (Q t /Q∞ ) = 01402 7 ln t - 11843 9 01963 4 　　由拟合方程的结果可知 ,冬凌草甲素自微乳和 乙醇溶液的释药动力学不同 ,对于冬凌草甲素自微 乳 ,用 H ixson2Crowell方程对其释放曲线拟合的相关 系数最大 (01990 6) ,故冬凌草甲素自微乳的体外释 放符合 H ixson2Crowell方程 ;而冬凌草甲素乙醇溶液 的体外释放则最符合一级动力学。 3　讨论 目前 ,国内外文献报道的自乳化和自微乳化制 剂的药物体外释放研究方法主要有透析法 ( dialysis method)、反向透析法 ( reverse dialysis technique)和 超速离心法 ( ultrafiltration method) [ 426 ]。透析法在客 观地解释微乳的药物体外释放动力学方面存在一定 的不足 ,如由于释放较慢可能会造成药物有缓释效 果的假象 ,原因在于 : ①制剂没有被释放介质充分稀 释而难以满足漏槽条件 ; ②药物释放主要是透析袋 与释放介质之间的浓度梯度造成的 ,而非液滴内部 　　 与外水相之间的浓度梯度 [ 7 ]。而反向透析法在能 保证满足漏槽条件的前提下 ,由于直接与释放介质 接触并被大量稀释 ,能够更好地模拟药物口服后到 达体内的状态 ,也可以避免采用超速离心法可能会 发生的样品无法快速及时地分离而影响测定结果准 确性的缺点 [ 4 ]。因此 ,本研究采用反向透析法考察 冬凌草甲素的体外释药行为。 为了探讨冬凌草甲素自微乳的释药特性及机 制 ,本研究采用了零级、一级、H iguchi方程、H ixson2 Crowell方程和 R itger2Peppas方程分别对释放数据 进行拟合 ,根据相关系数 r确定最适方程。冬凌草 甲素自微乳的最符合 H ixson2Crowell方程 ,初步表明 其释药行为可能是由于自微乳制剂在水性环境中自 发形成的微小乳滴在释药过程中粒径和表面积均发 生改变而造成的 ,而冬凌草甲素乙醇溶液的释药最 符合一级动力学模型 ,药物分子透膜为被动扩散过 程。冬凌草甲素自微乳释药较快 ,在 30 m in时 ,约 有 65%的药物以游离形式释放出 ,由此推测在体内 也可以快速释药 ,从而有可能提高难溶性药物的生 物利用度 ,但冬凌草甲素自微乳给药系统的体内吸 收与体外释放的相关性还有待于进一步研究。 [参考文献 ] [ 1 ]　李　瑛 ,张覃林 1冬凌草甲素对体外无细胞 DNA的影响 [ J ]. 1988, 9 (5) : 465. [ 2 ]　L iu J iajun, Huang Renwei, L in Dongjun, et al. Anti2p roliferative effects of oridonin on SPC2A21 cells and its mechanism of action [ J ]. J IntMed Res, 2004, 32 (6) : 617. [ 3 ]　Porter C J H, TrevaskisN, Charman W N. L ip ids and lip id2based formulations: op tim izing the oral delivery of lipophilic drugs[ J ]. Nature Reviews: D rug D iscovery, 2007, 6 (3) : 231. [ 4 ]　刘　华 ,李三鸣 ,袁　悦 ,等. 酮洛芬自乳化制剂的释药动力学 研究 [ J ]. 沈阳药科大学学报 , 2005, 22 (2) : 91. [ 5 ]　陈　鹰 ,李　高 ,李海平 ,等. 长春西汀自微乳化释药系统的体 外释药特性研究 [ J ]. 中国药师 , 2006, 9 (12) : 1092. [ 6 ]　W u W ei, W ang Yang, Que L i. Enhanced bioavailability of sily2 marin by self2m icroemulsifying drug delivery system [ J ]. Eur J Pharm B iopharm, 2006, 63 (3) : 288. [ 7 ]　Abraham R, Yashwan V P, Jackie K, et al. In vitro release and intestinal absorp tion of physostigm ine salicylate from subm icro e2 mulsions[ J ]. J Pharm Sci, 1991, 80 (7) : 643. ·1502· 第 33卷第 18期 2008年 9月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica 　　　　　　　Vol. 33, Issue　18 Sep tember, 2008 729zhangjian 高亮 Relea se k inetics of or idon in self2m icroem ulsify ing drug delivery system in vitro L IU Ying, ZHANG Ping, FENG N ian2p ing, ZHANG Xin, XU J ie (D epartm ent of Pharm aceu tics, Shangha i U niversity of Trad itiona l Chinese M edicine, Shangha i 201203, Ch ina) [ Abstract] 　O bjective: To investigate the release characteristics and mechanism of oridnonin self2m icroemulsifying drug deliver2 y system ( SMEDDS) in vitro. M ethod: The concentration of oridonin was determ ined by HPLC. In vitro release studies were conduc2 ted by reverse dialysis technique. The effects of release medium, agitation rate and p reparations on the oridonin release were studied. The sim ilarity factor ( f2 ) was app lied to the release p rofile comparisons. Model fitting was used to determ ine the kinetics and mecha2 nism. Result: The release media and agitation rate from 502100 r·m in - 1 had no distinctive effect on the oridonin release kinetics, which the sim ilarity factors were greater than 50. The oridonin release p rofiles for oridonin SMEDDS and oridonin ethanol solution were sim ilar. 65% of oridonin were released in 30 m in for oridonin SMEDDS in pH 718 PBS. O ridonin SMEDDS fit the H ixson2Crowell model best. Conclusion: The release data from oridonin SMEDDS showed it release fast. The deduced release mechanism is that the surface and particle sizes of self2m icroemulsion in water solution are changing during the p rocess of release and the drug penetration through membrane is a passive diffusion p rocess. [ Key words] 　oridonin; self2m icroemulsifying drug delivery system; in vitro release kinetics; reverse dialysis technique [责任编辑 　鲍 　雷 ] [收稿日期 ]　2008203225 [基金项目 ]　2006年国家教育部科技研究重点资助项目 (206087) [通讯作者 ]　3 白雁 , Tel: (0371) 65962967, E2mail: white_yan@ hotmail. com N IR和 HPLC指纹图谱在熟地黄饮片 质量稳定性考察中的对比研究 雷敬卫 1, 2 , 白　雁 23 , 樊克锋 3 (1. 南京中医药大学 , 江苏 南京 210046; 2. 河南中医学院 , 河南 郑州 450008; 3. 郑州牧业 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 高等专科学校 , 河南 郑州 450011) [摘要 ]　目的 :建立近红外光谱法 (N IR)考察熟地黄饮片质量稳定性的方法。方法 :以 N IR光谱聚类分析法 对不同种类的熟地黄样品进行了聚类鉴别 ,并与 HPLC指纹图谱方法进行了对比研究。结果 : N IR光谱聚类分析结 果反映了熟地黄饮片间的相似程度 ,与 HPLC指纹图谱实验结果比较结果准确、分析过程简便。结论 : N IR技术应 用于熟地黄饮片质量的稳定性考察是可行和有效的 ,具有独特的优点。 [关键词 ]　熟地黄 ; N IR; HPLC指纹图谱 ;聚类分析 [中图分类号 ] R 284. 1　[文献标识码 ] A　[文章编号 ] 100125302 (2008) 1822052204 　　近红外光谱法 ( near2infrared spectrum, 简称 N IR)是一种快速无损分析 ,样品很少或无需进行预 处理即可进行定性、定量分析。将近红外技术与计 算机技术和化学计量学相结合 ,采用漫反射光学检 测方法 ,可以对复杂化合物进行分析 ,目前已广泛应 用于各个领域 [ 122 ]。作为一种物理测试技术 ,它可以 实现对药物的定性、定量分析 ,可以较好的适应现代 化药物研发和生产的需要 ,目前该技术在药物质量 ·2502· 第 33卷第 18期 2008年 9月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica 　　　　　　　Vol. 33, Issue　18 Sep tember, 2008