赤芍饮片质量标准研究_芍药苷的含量测定

© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net [5 ] 　和田攻. 重金属毒理学 ,延边 :延边医学院出版社 ,1984. 112 [6 ] 　翟　武 ,宣栋梁 ,蔡　嵘. 离子色谱法同时 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 中药丹参中碱金 属和碱士金属. 理化检验·化学分册 ,2002 ,38 (2) :66. [7 ] 　李　磊 ,谢明勇 ,吴熙鸿 ,等. 用 MAP2ICP2MS测定保健食品青钱 柳及其浸提物中多种矿质营养素的研究. 食品科学 ,2000 ,21 (2) :53. [8 ] 　孙振华 ,吴熙鸿 ,孙大海 ,等. 草药中 11 种元素的聚焦微波辅助 萃取2等离子体质谱法测定. 分析测试学报 ,2001 ,20 (2) :1. [9 ] 　吴熙鸿 ,孙大海 ,王小如 ,等. 聚焦微波浸取2C18反相色谱柱分离2流动注射2电感耦合等离子体质谱联用技术测定龙胆草浸取液 中的金属离子及其结合态. 光谱学与光谱分析 ,2002 ,22 (1) :75.[10 ] 　Patterson W P , Winkelmann M , Perry M C. Zinc2induced copper de2ficiency : megamineral , sideroblastic anemia. Ann Intern Med ,1985 ,103 :385.[11 ] 　王 　夔 ,生命科学中的微量元素 ,北京 :中国计量出版社 ,1992.[12 ] 　Anderson R A. Nutritional role of chromium. Sci Total Environ ,1981 ,17 :13.[13 ] 　Langard G. Chronium in metal , in the environment . London : Aca2demic Press ,1980. 111. Preliminary attempt at the speciation of 252elements in the chinese medicinal herbs WANGJing2yu1 , OUYANGLi1 , LIU Ya2qiong1 , XIE Qing1 , HUANG Zhuo1 , TU Peng2fei2 , GUO Xu2lin2 , LIU Hu2sheng1 , (1. School of Public Health , Peking University , Beijing 100083 , China ; 2. School of Pharmaceutical Sciences , Peking University , Beijing 100083 , China) [ Abstract] 　Objective : To make an attempt at the multi2element speciation in the chinese medicinal herbs by determining the concen2 trations of 25 elements in different extraction solutions. Method : Firstly , five chinese medicinal herbs ( Buddleja officinalis , Dictamnus dasy2 carpus , Myristica fragrans , Albizia julibrissin and Inula japonica) from the same region of China were treated to obtain water2soluble phase , lipid2soluble phase and non2soluble phase by water extraction , organic solvent extraction and acid digestion , respectively. Secondly , Phytolac2 ca acinosa , a chinese medicinal herb collected from 9 regions of China , was extracted by 0 %EtOH , 50 %EtOH , 75 %EtOH , 95 %EtOH , re2 spectively , referring the Chinese Pharmacopoeia. Finally , the concentrations of 25 elements , such as Be , Cr , Cu , Zn , Ge , Sr , Y, Mo , Cd , Tl , Pb and REEs , in the above three phases were determined by ICP2MS. Result : Under the optimal conditions , all the 25 elements could be determined with detection limits ranged from 0. 003 to 0. 71 ng·g - 1 . The average recoveries of the elements in P. acinosa were 88 %～ 119 % , with the relative standard deviations 1. 7 %～13. 3 %. It was observed that the determined 25 elements distributed in all the water2sol2 uble , lipid2soluble and non2soluble phases , indicating that the inorganic species , organicspecies , as well as the protein bound species were co2 existed in the herbs. Big differences of the element extraction rates could be found by using different ethanol solutions. Conclusion : With the aid of the obtained results , we may increase the extraction of necessary elements while decrease that of the toxic elements from the herbs by choosing a suitable solvent during the drug production. [ Key words] 　Chinese medicinal herbs ; extraction ; trace elements ; rare earth elements ; ICP2MS; speciation [责任编辑 　李 　禾 ] 赤芍饮片质量标准研究 ———芍药苷的含量测定 谢晓梅1 3 , 余长柱1 , 徐　衡1 , 王　盛1 , 汪电雷1 , 张　玲1 , 桂新2 , 王峥涛2 (1. 安徽中医学院 ,安徽 合肥 230031 ; 2. 上海中医药大学 ,上海 200032) [摘要 ] 　目的 :为制定赤芍饮片炮制 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 化质量标准建立含量测定方法。方法 :利用超声提取 ,RP2HPLC 分离 分析技术 ,测定 10 批赤芍饮片。结果 :用 50 %甲醇超声提取供试品 ,以十八烷基键合硅胶为固定相 ,乙腈2水 (18∶ 82)为流动相 ,在 230 nm检测芍药苷。结论 :方法重现性好 ,准确度高 ,操作简便。 [收稿日期 ] 　2004202215 [通讯作者 ] 　3谢晓梅 , Tel : (0551) 5169230 , E2mail :xiexiaomei9401 @sina. com ·957· 第 29 卷第 8 期 2004 年 8 月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica 　　　　　　　 Vol. 29 , Issue 　8 August , 2004 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net [关键词 ] 　赤芍饮片 ;质量标准 ;芍药苷 ;高效液相色谱法 [中图分类号 ] R 283 ; R 284. 1 　[文献标识码 ] A 　[文章编号 ] 100125302 (2004) 0820759204 　　赤芍 Radix Paeoniae Rubra 为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall . 或川赤芍 P. veitchii Lynch 的 干燥根 ;通过除杂、切片、干燥 ,即得赤芍饮片。其药 用历史悠久 ,为临床常用中药之一 ,具有清热凉血 , 散瘀止痛之功效。现代药理研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明 ,赤芍总苷为 主要活性部位 ,可显著调节机体微循环 ,改善血液流 变学状态 ,抑制血小板凝聚 ,抗血栓形成[124 ] 。芍药 苷 (paeoniflorin)是赤芍总苷的主要活性成分 ,在总苷 中含量占 75 %以上[5 ] 。因此作者选择芍药苷作为赤 芍饮片含量测定的目标检测成分 ,采用高效液相色 谱法[628 ] ,通过方法学考察 ,建立最佳分析条件 ;并对 10 批赤芍饮片中芍药苷进行含量测定。旨在为制 定赤芍饮片炮制规范化质量标准提供科学依据。 1 　仪器与试药 LC - 10AT液相色谱仪 (日本岛津) ,SPD - 10Avp 紫外检测器 ,江申色谱工作站 ;AE240 电子天平 (梅 特勒) 。 赤芍饮片和药材由上海雷允上中药饮片厂提 供 ,作者鉴定 ;芍药苷对照品 (中国药品生物制品检 定所 ,供含量测定用 ,批号 07362200219) ;乙腈、甲醇 为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。 2 　方法和结果 2. 1 　色谱条件 　Hypersil C18色谱柱 (4. 6 mm ×250 mm ,5μm ) ;流动相乙腈2水 (18∶82) ;检测波长 230 nm ;流速 1. 0 mL·min - 1 ;柱温为室温 ;进样量 20μL。 2. 2 　对照品溶液的制备 　取经五氧化二磷减压干 燥器中干燥 36 h 的芍药苷对照品适量 ,精密称定 ,置 量瓶中 ,加 50 %甲醇制成每 1 mL 含 0. 2 mg 的溶液 , 摇匀 ,即得。 2. 3 　供试品溶液的制备 　取样品粗粉约 0. 25 g ,精 密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 50 %甲醇 50 mL ,称定重量 ,浸泡 4 h ,超声处理 (功率 125 W ,频率 40 kHz) 20 min ,放冷 ,再称定重量 ,用 50 %甲醇补足 减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,续滤液过 0. 45μm 微孔滤 膜 ,即得。 2. 4 　线性关系考察 　精密称取经五氧化二磷减压 干燥器中干燥 36 h 的芍药苷对照品 25 mg ,置 50 mL 容量瓶中 ,加 50 %甲醇制成每 1 mL 含 0. 5 mg 的对 照品溶液 ;精取该溶液 0. 20 ,0. 40 ,0. 80 ,2. 00 ,4. 00 , 8. 00 mL ,分别置 10 mL 容量瓶中 ,加 50 %甲醇定容 , 摇匀。按上述色谱条件依序进样测定。以芍药苷对 照品溶液浓度 (mg·L - 1) 为横坐标 ,色谱峰面积积分 值 ( A)为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,建立回归方程 : A = 34 630 C + 570 , r = 0. 999 9 ( n = 3) 。结果表明芍药 苷浓度在 10. 96～549. 8 mg·L - 1与色谱峰面积有良 好的线性关系。 2. 5 　精密度试验 　取供试品溶液重复进样 6 次 ,计 算芍药苷色谱峰面积的 RSD 为 0. 41 %。 2. 6 　重复性试验 　取同一批次赤芍饮片 ,按照 2. 3 项下方法制备供试品溶液 5 份 ,测定芍药苷含量。 结果平均含量为 4. 34 % ,RSD 为 1. 0 %。 2. 7 　稳定性试验 　取同一供试品溶液 ,于 0 ,2 ,4 ,8 , 24 ,72 ,480 h 分别进样 ,芍药苷色谱峰面积的 RSD 为 0. 28 %。结果表明供试品溶液置冰箱冷藏至少稳定 20 d。 2. 8 　加样回收率试验 　取同一批次已知含量的赤 芍饮片粗粉约 0. 12 g ,精密称重 ,分别以高、中、低 3 个浓度水平准确加入一定量的芍药苷对照品 ,按上 述供试品溶液制备方法和色谱条件进行测定并计算 回收率 ,结果见表 1。 表 1 　赤芍饮片加样回收率试验结果 称样量 / g 样品含量 / mg 加入量 / mg 测得量 / mg 回收率 / % x / % RSD / % 0. 126 4 6. 408 5. 620 　 12. 11 101. 5 97. 6 2. 1 0. 126 2 6. 398 　 12. 04 100. 4 　 　 0. 124 6 6. 317 　 11. 75 96. 7 　 　 0. 124 3 6. 302 　 11. 77 97. 3 　 　 0. 125 3 6. 353 　 11. 86 98. 0 　 　 0. 125 1 6. 343 6. 558 12. 71 97. 1 　 　 0. 124 4 6. 307 　 12. 62 96. 3 　 　 0. 125 4 6. 358 12. 78 97. 9 　 　 0. 124 6 6. 317 　 12. 58 95. 5 　 　 0. 125 4 6. 358 　 12. 76 97. 6 　 　 0. 125 8 6. 378 7. 870 14. 35 101. 3 　 　 0. 125 4 6. 358 　 13. 84 95. 1 　 　 0. 121 1 6. 140 　 13. 66 95. 6 　 　 0. 122 1 6. 190 　 13. 84 97. 2 　 　 0. 121 7 6. 170 　 13. 76 96. 4 　 　 2. 9 　定量限 　参照线性关系试验 ,逐级稀释芍药苷 对照品溶液并注入色谱仪测定 ,结果表明芍药苷浓 度为 10. 96 mg·L - 1时 ,仍有较好的精密度 ,峰面积的 RSD 为 0. 56 %( n = 3) ;该点参与线性回归计算仍能 保持 r = 0. 999 9。由此拟定芍药苷能被准确定量测 ·067· 第 29 卷第 8 期 2004 年 8 月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica 　　　　　　　 Vol. 29 , Issue 　8 August , 2004 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 定的最小量为 0. 219μg。 2. 10 　含量测定 　精密称取 10 批赤芍饮片粗粉 ,按 照 2. 3 项下制成供试品溶液 (同时另取本品粉末按 照《中国药典》2000 年版一部附录 ⅨH 第二法测定水 分) ;分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液 20μL , 注入液相色谱仪 ,按外标一点法 ,以干燥品计算芍药 苷百分含量分别为 :3 . 84 ,2 . 32 ,3 . 76 ,5 . 33 ,4 . 40 , 2. 95 ,3. 00 ,2. 67 ,4. 53 ,4. 46。 4 　讨论 4.1 　分离条件的选择 　本试验在 4 种不同品牌 ( Hypersil C18 , Kromasil C18 , Rainbow C18 及 Shim2pack C18)色谱柱 (4. 6 mm ×250 mm ,5μm)上 ,用乙腈2水和 甲醇20. 05 mol·L - 1磷酸二氢钾溶液系统进行试验 , 结果均显示乙腈2水 (18∶82) 对供试品有较好的分配 性能 ,使芍药苷色谱峰具有较好的对称性 ,理论塔板 数 ( N 在 4 000 以上) 较大 ,很容易在供试品进样量 (100μg)和 1. 0 mL·min - 1的常用流速下使芍药苷与 共存组分达基线分离。分离结果见图 1。 　　除了对色谱柱没有明显的依赖性 ,在分离中也 无需柱温箱控温 ,室内温度在 (22 ±5) ℃变化对测 量结果无影响。因此选定方法具有较好的耐用性。 图 1 　赤芍饮片及芍药苷对照品色谱图 A. 样品 ;B. 对照品 4. 2 　供试品溶液制备方法的选择 　考察文献[ 6 ,7 ] 中 2 种提取方法对赤芍饮片中芍药苷含量及共存组 分干扰的影响。对 5 批供试品的测定结果显示 ,采 用50 %甲醇加热回流使芍药苷含量平均提高了 24. 9 %。在对溶剂和提取方式的比较试验中显示 , 引起提取率增加的主要因素是溶剂变化 :用 50 %甲 醇超声提取与用同样溶剂加热回流提取所得芍药苷 含量无明显差异。试验结果提示用甲醇制备供试品 溶液测定芍药苷含量存在提取不完全、测定结果偏 低的现象。与加热回流相比 ,超声波提取具有操作 简单、省时、重复性好等特点 ,因此本实验采用了 2. 3 项下供试品溶液制备方法。 芍药苷和供试品溶液性质较为稳定 ,用 50 %甲 醇制备的溶液置冰箱冷藏室至少可稳定 20 d ,但保 存期间需注意容器的密封性 ,防止溶剂挥发。 4. 3 　中药饮片由于受到各地及不同季节空气潮湿 度不一的影响 ,含水量在规定限量下仍会有较大差 异。在测定有效成分含量的同时做含水量的测定 , 以干燥品表示含量 ,对于含量较高的数据 (如 5. 0 %) 更具有科学性和可比性。 4. 4 　作者在测定饮片含量的同时也测定了药材的 含量 ,色谱图和测定结果表明 ,本法同样适用赤芍药 材的含量测定。 [参考文献 ] [1 ] 　刘 　超 ,王 　静 ,杨 　军. 赤芍总甙活血化瘀作用的研究. 中药 材 ,2000 ,23 (98) :557. [2 ] 　王玉琴 ,马立昱. 赤芍对血液凝固———纤溶系统酶活性的影响. 中西医结合杂志 ,1990 ,10 (28) :101. [3 ] 　徐红梅 ,刘青云 ,戴　敏 ,等. 赤芍总甙抗血栓作用研究. 安徽中 医学院学报 ,2000 ,19 (18) :46. [4 ] 　Ye J , Duan H , Yang X , et al . Anti2thrombosis effect of paeoniflorin : evaluated in a photochemical reaction thrombosis model in vivo. Planta Med , 2001 ,67 (8) :766. [5 ] 　马双成 ,邓少伟. 赤芍总苷的生产工艺条件研究. 中草药 ,1998 , 29 (10) :664. [6 ] 　中国药典. 一部. 2000. 125. [7 ] 　第十四改正日本药局方. 2001. 877. [8 ] 　程新萍 ,孙文基 ,李新生. 赤芍药材中芍药甙的含量考察. 西北 药学杂志 ,1998 ,13 (1) :41. Quality evaluation of prepared slices of Paeonia lactiflon —Determination of paeoniflorin by HPLC XIE Xiao2mei1 , YU Chang2zhu1 , XU Heng1 , WANG Sheng1 , WANG Dian2lei1 , ZHANGLing1 , CHOU Gui2xin2 , WANG Zheng2tao2 (1. Anhui College of Traditional Chinese Medicine , Hefei 230031 , China ; 2. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine , Shanghai 200032 , China) [ Abstract] 　Objective : To establish the quality criteria of the prepared slices of Paeonia lactiflon . Method : RP2HPLC was used for the determination of paeoniflorin in 10 lots of samples by ultrasound2assisted extraction. Result : The samples were extracted with 50 % ·167· 第 29 卷第 8 期 2004 年 8 月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica 　　　　　　　 Vol. 29 , Issue 　8 August , 2004 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net methanol . Seperation of the solution was performed on an ODS column with a mobile phase of acetonitrile2water (18∶82) , detected at 230 nm. Conclusion : The method is simple , repeatable , accurate and applicable. [ Key words] 　prepared slices of Paeonia lactiflon ; quality criteria ; paeoniflorin ; HPLC [责任编辑 　李 　禾 ] HPLC2ESI2MS 测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中 腺苷和虫草素含量 黄兰芳1 , 郭方遒1 , 梁逸曾1 3 , 陈本美2 (1. 中南大学 化学化工学院 中药现代化研究中心 ,湖南 长沙 410083 ; 2. 中南大学 湘雅医学院 分析测试中心 ,湖南 长沙 410083) [摘要 ] 　目的 :建立测定冬虫夏草及蚕蛹虫草中腺苷和虫草素的方法。方法 : HPLC2ESI2MS 法 ,用甲醇为提取 溶剂 ,采用选择性离子检测 (SIM) 和电喷雾离子化 ( ESI) ;色谱条件 : Shimadzu VP2ODS 色谱柱 ;流动相水2甲醇2甲酸 (94∶5∶1) ,以 22氯腺苷为内标。结果 :腺苷回归方程 Y = 0. 134 6 X + 0. 012 9 , r = 0. 998 4 ,线性范围 0. 5～124. 5 mg· L - 1 ;虫草素回归方程 Y = 0. 216 4 X + 0. 021 5 , r = 0. 999 1 ,线性范围 0. 5～136. 5 mg·L - 1 ;腺苷和虫草素加样回收率 分别为 95. 8 %及 98. 1 %。结论 :方法灵敏、快速和选择性好 ,可用于冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的分析及 质量控制。 [关键词 ] 　HPLC; ESI ;MS;冬虫夏草 ;蚕蛹虫草 ;核苷类 [中图分类号 ] R 284. 1 　[文献标识码 ] A 　[文章编号 ] 100125302 (2004) 0820762203 　　冬虫夏草 Cordyceps sinensis 是我国传统名贵中 药材之一 ,由于自然条件的限制 ,来源紧缺、价格昂 贵 ,现多采用人工深层发酵培养虫草菌丝体 ,以满足 市场的需求。核苷类物质为冬虫夏草有效成分之 一 ,尤以腺苷和虫草素具有明显的药理作用 ,如可用 于治疗高血糖症、肝脏疾病、肾功能紊乱和肾衰 竭[1 ,2 ] 。腺苷已被用作冬虫夏草的质控指标[3 ] 。测 定冬虫夏草中腺苷等核苷类物质的含量 ,主要有薄 层色谱法[4 ,5 ] ,高效液相色谱法[6 ,7 ] 和毛细管电泳 法[8 ,9 ] ,其中以 HPLC 法最适用 ,但该类方法灵敏度 低、选择性差且耗时过长。本研究首次报道采用 HPLC2ESI2MS 法测定天然和人工冬虫夏草中腺苷和 虫草素的含量 ,为冬虫夏草的质量评定提供了一种 快捷、有效的检测方法。 1 　仪器与试剂 Shimadzu LCMS - 2010 (日本京都 , 含 LC - 10 Advp 高压泵 , FCV - 10Alvp低压梯度装置 ,DGU - [收稿日期 ] 　2003204225 [基金项目 ] 　国家自然科学基金资助项目 (2017503 ,20235020) [通讯作者 ] 　3梁逸曾 ,Tel : (0731) 8830831 14A 在线脱气机 ,CTO - 10Avp 柱温箱 ,SPD - M10Avp 二极管阵列检测器 ,四极杆质谱仪。 腺苷、虫草素和内标 22氯腺苷购于 Sigma 公司 (St . Louis , MO , 美国) ,甲酸为分析纯 ;色谱纯甲醇 购于江苏汉邦科学技术有限公司 ;藏产冬虫夏草购 于长沙九芝堂 ,蚕蛹虫草由云南蚕桑研究所提供。 2 　方法与结果 2. 1 　色谱条件 　Shimadzu VP - ODS 色谱柱 (2. 0 mm ×150 mm ,5μm) ,色谱柱前用 Waters C18小柱保护 (Waters , Milford , MA , USA) 。流动相水2甲醇2甲酸 (94∶5∶1) ,使用前超声脱气 ,流动相中的每一组分均 用 0. 22μm 微孔滤膜过滤 ,配制流动相用 Milli2Q 纯 水 ;温度为室温 ,流速 0. 2 mL·min - 1 ,进样量 5μL。 2. 2 　质谱检测条件 　离子化方式 :电喷雾离子化 (ESI) ;离子极性 :正离子 ;选择性离子检测 m/ z :腺 苷 268[M + H] + ;虫草素 252[M + H] + ;22氯腺苷 (内 标 , IS) 302[M + H] + 。ESI 源温度 380 ℃。脱溶剂和 加热块温度分别为 250 ℃和 200 ℃。源电压 + 4. 0 kV。检测电压 1. 5 kV。脱溶剂电压 - 18 V。Q2阵列 偏转电压 45 V。雾化气 (N2)流速为 4. 5 L·min - 1。 2. 3 　对照品溶液的制备 　甲醇用 0. 45μm 微孔滤 ·267· 第 29 卷第 8 期 2004 年 8 月 　　　　　　　　　 　　　 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica 　　　　　　　 Vol. 29 , Issue 　8 August , 2004