G6410A QQQ onsite training-200701

安捷伦 6410 QQQ LC/MS 现场培训教材 气相色谱 液相色谱 质谱 毛细管电泳 数据系统 注意 包含在该文件中的信息将可能在未通知的情况下改变。 安捷伦科技有限公司不对与该材料有关的任何活动做担保。这些活动包括但 不仅限于为了某特殊目的而进行的销售和适应性。 安捷伦科技有限公司将不会对包含在材料里的与装备，表现和材料使用有关 的错误或导致的损失负责。 这份文件中的任何部分都得不拷贝或复制或未经安捷伦科技公司的预先允许 进行翻译。 安捷伦科技有限公司 售后服务电话：800-8203278 手机用户：400-8203278 中文网站：http://www.agilent.com/chem/cn © 安捷伦科技有限公司 2007 年 1 月 生命科学及化学 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪器部 G6410A QQQ 硬件概述及原理 1 of 6 G6410A QQQ 基本原理与硬件概述 仪器硬件概述 1.1 典型配置 1.2 仪器原理简介 1.2.1 四极杆分析器由四根棒状电极组成。相对两根电极间加有电压（Vdc+Vrf），另外两 根电极间加有-（Vdc+Vrf）。其中 Vdc为直流电压，Vrf为射频电压。四个棒状电极 形成一个四极电场。下图是这种分析器的示意图： 1.2.2 离子从离子源进入四极场后，在场的作用下产生振动，如果质量为 m，电荷为 e 的 离子从 Z 方向进入四极场，在电场作用下其运动方程是： 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 硬件概述及原理 2 of 6 其中 1.2.3 离子运动轨迹可由马修方程的解描述，下图是马修稳定图。这是一张 RF 和 DC 电 压结合图。这张图可以预测给定的离子在四级杆场中是否稳定。对于特定的 RF 和 DC 电压，包含这个点的在质谱区域内的离子将会通过进入四级杆进入检测器。这 条扫描线由调谐文件中设置的宽度增益和宽度补偿决定。如果降低宽度补偿，扫描 线将会下降，峰宽度将会加宽。如果扫描线被提高，峰宽度将会变窄。 1.2.4 空间串联之谱 QQQ 的几种操作方式： – 子离子扫描 – 母离子扫描 – 中性丢失扫描 – 多重反应监测 子离子扫描方式： • MS1 选择了某一特定质量的母离子，碰撞池产生碎片离子，然后在 MS2 中分析。 此过程产生典型的质谱/质谱碎片谱图。 { 扫描线 922 622 322 直流电压 斜率 = Width Gain Width Offset 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 硬件概述及原理 3 of 6 母离子扫描方式： • 在母离子扫描中，MS1 测定母离子，MS2 测定某个特定的碎片离子，因此可在非 常复杂的混合物中监测某种特定的分子。在下面的例子中，睾丸激素在母碎片(m/z 367) 中碎片 m/z 97 得到选择性监测，具有极高的灵敏度和精确的定量分析。 中型丢失扫描方式： • 在 QQQ 中进行中性丢失扫描，MS1 和 MS2 分析器的结合使灵敏度和选择性得到 最大化。 MS1/MS2 中性丢失扫描可监测母离子特定的中性丢失，例如缩氨酸磷酸盐 中一个磷酸根的丢失。在这个例子中，MS1 和 MS2 的扫描得到母离子的谱图，这张 谱图是母离子为了磷酸化，丢失了碎片 98 而得到的。 多重反应监测（MRM）： • MS1 选择某一质量的母离子，碰撞单元产生碎片离子。MS2 用于搜寻多个选择反 应监测，这就是多重反应监测（MRM） MH+ MH+ - 98 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 硬件概述及原理 4 of 6 在 QQQ 的应用中以 MRM 方式为最多： 1.3 仪器硬件概述 1.3.1 离子源 1.3.2 离子源原理（ESI） 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 硬件概述及原理 5 of 6 1.3.3 系统结构图 1.3.4 仪器构造（实物） 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 硬件概述及原理 6 of 6 1.3.5 QQQ 原理动画（点击下面画面开始播放） 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 开机关机基本操作培训 1 of 5 G6410A 开机软件概述以及关机基本操作 开机 2.1 现场准备：将水相放入 A 瓶，有机相放到溶剂瓶 B（或 C，D）。如果有柱塞清洗附 件，请配制 90/10( 水/异丙醇）溶液，并在每次开机前打开，调节其流动速度为每分钟 10-20 滴左右。 2.2 打开液氮罐自增压阀门，调节液氮罐或 N2 发生器的输出压力为 0.56-0.69MPa（80- 100psi），调节高纯氮气钢瓶减压表输出压力小于 0.2 MPa (一般为 0.15MPa 或 10- 30Psi）。确认前级泵的气镇阀处于关闭状态 2.3 依次打开 LC1200 各电源开关，打开 G6410A QQQ 的电源开关，此时听到一声电磁阀的 声音，前级泵启动，然后涡轮泵开始工作，等待大概 2min 左右待 QQQ 上的 Smart Card4 通讯板完成初始化。 2.4 执行 Start—Programs-Accessories—Command Prompt 打开 Dos 提示符，输入命令 Ping 192.168.254.12，如下图观察是否通讯正常（注：此步骤非必须）： 2.5 如果结果显示通讯正常，回到桌面启动 Data Acquisition 图标，此时 MassHunter 软件 启动，并听到另外一声电磁阀的声音，表示仪器通讯正常。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 开机关机基本操作培训 2 of 5 2.6 软件启动完成后的画面如下： 2.7 观察仪器状态和真空情况：不同颜色代表不同的仪器状态。 ¾ 在 Actuals 处点击鼠标右键，弹出 setup 对话框，选择前级真空；高真空，干燥气流量和压 力以及涡轮泵转速；毛细管电流等重要参数到实时状态显示，对于重要数据可以选中该参数，然 后用右键设定颜色及字体等等。 仪器状态栏 实时绘图 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 编辑栏 Worklist 栏 颜色代表各仪器模块的状态 Error -没有准备好 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 开机关机基本操作培训 3 of 5 ¾ 单击鼠标右键可以快速控制仪器状态 关机 2.8 确认前级泵的气镇阀（Gas Blast Valve）处于关闭状态。此气镇阀在操作状态应定期 打开（逆时针旋转三圈），建议每周打开一次，每次一个小时，以便泵油能够回流并去 除泵油中易挥发的组分。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 开机关机基本操作培训 4 of 5 2.9 点击 Pump 图标，将泵流量设置到 0，然后再次点击选择 Off，依次点击柱温箱和检测 器选择 Off。点击 MS QQQ 图标，依下图所示选择 Vent 2.10 出现下述提示，如果确认要放空，按照提示选择 2.11 观察涡轮泵转速，以及四极杆和干燥气的温度 2.12 等待大概 20-30min 左右，等待涡轮泵转速完全将下来，且干燥气温度和四极杆温度下 降到一定程度（四极杆温度 50℃以下），可能出现提示（视软件版本而异）。 点击 Vent 执行放空步骤 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 开机关机基本操作培训 5 of 5 2.13 关闭 MassHunter 软件，然后点击桌面 Acq System Launcher 图标，然后选择 Shutdown 关闭运行程序。关闭 MS QQQ 和 LC1200 各模块电源开关。关闭计算机和 显示器，关闭碰撞气（高纯氮气）和液氮罐开关阀。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 自动调谐和手动调谐 1 of 6 G6410A QQQ 基本原理与硬件概述 调谐 为了获取高质量，精准质量数的谱图，QQQ 必须对灵敏度和分辨率进行调整优化，并使用 已知质量数的离子对质量轴进行校正。调谐包括两种方式：自动调谐和手动调谐。自动调 谐是一个自动过程，它在整个质量范围调节 QQQ，使其获得最优性能，手动调谐允许用户 针对一段质量范围进行调谐优化，从而在一定质量范围达到特定要求。 3.1 自动调谐和检验调谐以及手动调谐步骤 3.1.1 打开数据采集软件，从 Acquisition 切换到 Tune 画面，如下图所示： 3.1.2 调谐有三种模式 Autotune Checktune 和 Manual Tune，在 Manual Tune 画面，有 编辑参数对话框，点击 Apply 则使更改参数生效。 3.1.3 点击 Autotune 标签，然后点击右侧箭头所示 Autotune，CDS 自动工作将调谐液压 入喷雾针，自动调谐过程开始，底部% Complete 和 Status 显示调谐进程。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 自动调谐和手动调谐 2 of 6 3.1.4 Autotune 调谐结束，底部显示调谐是否成功完成。退出此画面时请按照提示存储调 谐文件，一般为 Atune.TUNE.XML，调谐周期为一月左右一次或 Checktune 不过时 进行。 3.1.5 点击 Autotune 下面的 Checktune 会自动完成检验调谐过程，检验调谐提供了一个 不执行完整的 Autotune 而快速确定调谐文件是否合适的方法，Checktune 扫描各 个质量数的轮廓图并与目标值的峰宽和质量轴进行比较，如果 Checktune 超出范 围，建议进行 Autotune 和 Manual Tune。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 自动调谐和手动调谐 3 of 6 3.2 手动调谐步骤 3.2.1 在 Manual Tune 画面，点击 Calibrant 复选框，开始注入 ES 调谐液到喷雾针。 3.2.2 在 Instrument Mode 复选框选择 MS1 Scan。 3.2.3 在 MS1 栏设定 Width Offset 和 Width Gain 的最大值，使调谐液的离子峰宽度尽可 能宽。 3.2.4 选择 MS1 Profile 采集模式，采集离子 118 和 1522 的轮廓扫描图。 3.2.5 打开质量窗口，直到 118 和 1522 峰可见。。 3.2.6 调整 Width Offset,使 118 质谱峰变窄。调整 Widh Gain 使 1522 质谱峰变窄。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 自动调谐和手动调谐 4 of 6 3.2.7 调节 Mass Offset,直到 118 靠近 118.09。调节 Mass Gain 使 1522 接近 1521.97。 3.2.8 调节 Width Offset,直到 118 峰宽度为 0.7+/- 0.05，调节 Width Gain 直到 1522 峰宽度 为 0.7+/- 0.05。 3.2.9 也可以在峰宽度和质量轴接近目标值时，点击 Adjust Mass Axis 和 Adjust Peak widths 由软件协助完成峰宽和质量轴的调谐。 3.2.10 优化离子透镜系统，分别选中 Fragmenator，Lens1，Lens2 DC，点击右下角的 Ramp，分别对这些电压，选择感兴趣质量范围的最高丰度，将每个质量数对应的最 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 自动调谐和手动调谐 5 of 6 佳电压输入右上角的 Dynamic Ramp Table 中，在 Ramp 这些透镜后，重新检查质量 轴和峰宽是否依然在范围之内。 3.2.11 点击 Detector 标签，调节 EMV 电压达到目标质量所需的丰度。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 自动调谐和手动调谐 6 of 6 3.2.12 保存调谐文件，指定文件名和路径，点击 Save。这个文件可以在方法编辑画面选 中。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 1 of 10 G6410A QQQ 编辑色谱质谱方法 4.1 双击 MassHunter 数据采集图标: 4.2 在数据采集界面可以看到仪器状态；实时绘图；方法编辑和编辑工作表。 4.3 可以通过浏览在每个界面上的条目来判定 QQQ 和 HPLC 模块的状态。颜色说明目前模块的 状态。绿色说明模块或仪器“Ready”。黄色说明“Not Ready” 。在柱子的加热模块到达设定 的温度过程中，你经常可以看到这个颜色。红色说明模块中有“Error”。你可以检查日志 LogBook 浏览错误信息。蓝色表明系统正在运行。粉红色表明仪器等待注射。 仪器状态界面 实时窗口界面 方法编辑界面 工作列表界面 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 2 of 10 4.4 建立一个独立的简单方法和进样包括如下步骤： 准备样品 准备 HPLC 准备缓冲液流动相 初始化 HPLC 设定 HPLC 参数 打开仪器，设定柱子温度. 平衡柱子– 液相色谱，把废液排出. 如果使用紫外检测器，打开 D2 灯，至少预热 20 分钟 自动调谐或手动调谐质谱，保存调谐文件。 输入 QQQ 参数，包括正确的调谐文件。 保存所得的方法。 填写样品信息。 等待开始。运行方法。 在定性数据分析中浏览数据。 上述概括了建立一个单次样品采集所需要的步骤。接下来将详细叙述这些要点。 4.4.1 在这个界面中完成所有的方法编辑。有 HPLC 和 QQQ 的弹出菜单。方法编辑界面的右 边是 QQQ 采集参数和诊断参数，如，真空压力和涡轮泵速度。 仪器状态 颜色表示仪器模块的状态 Error -没准备好 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 3 of 10 4.4.2 输入自动进样器的参数。建议设置带洗针的进样。这样可以显著减少样品交叉污染。溶 剂洗瓶不要带盖。在 Options 中包括抽吸速度，打样速度以及抽吸的位置。高通量注射 选项可以通过预先搬运样品瓶和重叠样品，加快工作表速度。 4.4.3 输入泵参数。时间表可以让你建立一个梯度程序。也可以编写流量和压力的时间程序。 你也可以在弹出的框中输入体积，压缩和最大流量梯度的数值。如果你使用二元输液 泵，可以输入溶剂压缩因子。 4.4.4 在柱温箱编辑画面输入柱温箱温度，恒温可以使分析过程中保留时间稳定。 输入梯度 选项 •体积 •压缩 •最大流量梯度 选项 •抽吸速度 •打样速度 •抽吸位置(微量瓶) 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 4 of 10 4.4.5 如果你有紫外检测器，你就可以在这里设置参数。你应该用如下的规则选择信号波长和 带宽： 通常，当优化样品信号和参考信号时，使用如下的规则： 样品信号波长应该选在没有流动相吸收影响，样品吸收最大的位置。在样品吸收最大的 位置附近有一个高斯分布峰，样品信号的带宽应该设为半峰宽。参考信号波长应该选择 在尽可能靠近样品信号，吸收很低或没有的地方。参考信号带宽应该至少和样品信号带 宽一样宽。 4.4.6 在 MS QQQ 参 数 画 面 ， 注 意 为 方 法 选 择 调 谐 文 件 ， 缺 省 的 调 谐 文 件 为 Atune.TUNE.XML。下面的例子为一个简单的 MS2 扫描。其目的是选择母离子。 使用i-Button按钮 自动识别电离源 选择恰当的调谐方法 对于源内CID和离子传输有作用 对于m/z 300一般选择100；对于m/z 600 一般选择200 根据灵敏度，调 节Delta EMV 通 常设定 200-400 例如要找母离子， QQQ采用了全扫描 如有需要，可 设定多个时间 段 Gaussian过滤 轮廓图或棒图 分段扫描参数 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 5 of 10 4.4.7 在每个时间段里，可以设置扫描段 Scan Segment，例如以每个化合物为基础。这个信息 将传递到定量软件，包括 ISTD。 4.4.8 在 MRM 扫描段表中，用户可以设定母离子，子离子以及每个四极杆的分辨率。四极杆 分辨率的参数（unit，wide 和 widest）是在自动调谐中由实验决定的。 4.4.9 在方法编辑界面中可设置 QQQ 仪器的电离源参数。这些参数的设置可以参照 QQQ快 速参考指南。 4.4.10 APCI 源和复合源的设置如下： 质谱1 和质谱2的全扫描 样品为内标时的检查框 选择分辨率 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 6 of 10 4.5 使用工具栏中的 Save Method 图标或者文件菜单保存方法: 4.6 运行单个进样 为了运行单次进样，首先调出适当的方法。打开样品栏，输入样品描述，瓶号以及数据文 件名等。 4.7 使用工具栏的 Start Sample Run 图标开始运行， 或者运行菜单中的 Interactive Sample 项: APCI 源 复合源 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 7 of 10 4.8 使用工作列表（worklist)运行多个样品； 添加一个样品： 从工作列表菜单中选择 Add Sample 。工作列表表格就添加了一行新的样品。，直接在工作 列表表格输入以下样品信息：样品名称，样品位置，方法，Override DA 方法，数据文件名 称，样品类型，注射体积，注释和级别名称。从工作列表面板可获得更多信息。 添加多于一个的样品： 从工作列表菜单选择 Add Multiple Samples。填写 Add Multiple Samples 对话框，当它出现的 时候。点击 Sample Position 标签，选择样品的位置如下： 点击并拖动鼠标来确定一个邻近的区域 按住 Control 键向下并点击选择独立的位置。 使用 Shift+Ctrl 在相同地方选择多个样品 点击 OK 关闭 Add Multiple Samples 对话框。指定的样品出现在工作列表表格，并且可以在 那里编辑。 第一步—在工作列表面板点击左键，选择 Add Multiple Samples 在 Add Multiple Samples 面板中, 填写样品信息表格： 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 8 of 10 转到 Sample Position 表格,选择样品被分析的位置，点击 OK 按钮： 在工作列表面板点击左键，选择工作列表 Run Parameters… 样品盘 Block Increment窗口详细 说明了注入样品的顺序。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 9 of 10 给工作列表设定运行信息，方法路径以及数据文件储存路径。 建立脚本。 使用工具栏的保存工作列表工具或者 File--Save as--Worklist 菜单保存工作列表: 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 10 of 10 开始工作列表 运行工作列表中所选择的样品 在工作列表中选择只需要的这些样品 选择工作列表中的所有样品 锁定模式 (不可 以覆盖数据文 件) 开始工作 列表 开始单个 运行 停止运行 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 1 of 2 G6410A 数据分析-提取质谱图及背景扣除 数据分析-提取质谱图及背景扣除 5.1 双击 Agilent Masshunter Qualitative Analysis 图标。 5.2 点击 View>Restore Default Layout 恢复主窗口为默认设置。 5.3 选择 File > Open Data File，打开 MassHunter\Data\SulfaDrugs 文件夹下的 Sulfamix01.d， 5.4 按住鼠标左键拖拉鼠标，选择第三个色谱峰的半峰宽，然后点击鼠标右键，选择 Extract Spectram 5.5 同样操作，在基线部分，按住鼠标左键拖拉窗口，然后点击鼠标右键，选择 Extract Spectra to Background。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 方法编辑操作培训 2 of 2 5.6 在色谱图下面的 Spectrum Results 窗口点击第三个色谱峰的质谱图，然后在该窗口嗲点击鼠 标右键，选择 Substract Background Spectra。 5.7 注意 Spectrum Results 窗口的质谱图已经扣除了背景，这对于干扰严重或浓度较低的色谱峰尤 其重要。 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 1 of 12 G6410A 创建定量的批处理和定量方法 6.1 本部分基于已经采集到的 MRM 数据来创建批处理和方法，参见下面步骤进行练习： 6.1.1 运行“Agilent MassHunter Quantitative Analysis” 软件: 6.1.2 单击工具栏恢复为缺省布局 按钮“Restore Default Layout” 确认主画面使用缺省布局： 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 2 of 12 6.1.3 单击菜单项 File Æ New Batch: 6.1.4 在新的批处理对话框，找到文件夹 “C:\quantdata1\DrugOfAbuse”，输入批处理文件名 “Test_01” 并单击 Openi 按钮创建一个新的批处理文件： 6.1.5 单击菜单项 File Æ Add Samples: 1 数据文件可能存放路径不同，请按实际路径选择 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 3 of 12 6.1.6 在 Add Sample 对话框，单击选择所有 Select All 按钮然后单击 OK 来添加所有样品： 6.1.7 检查批处理表中的样品名，类型和浓度级别并显示色谱图： 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 4 of 12 6.1.8 如下所示用鼠标点亮校正表中最高浓度的样品： Tips: 建议在切换软件到方法编辑模式前先选择信号最好的区域。这样，最有代表 性的色谱图和质谱图可以很容易的在方法编辑模式下看到。保留时间和限定离子比 例可以使用最有代表性的样品谱图（较高浓度）在方法编辑模式下可以直接更新。 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 5 of 12 6.1.9 单击菜单 Method Æ Edit 切换到方法编辑模式： 6.1.10 在工具栏上单击恢复到缺省画面布局“ Restore Default Layout ”确认方法编辑窗口类似下 图的缺省布局设置： 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 6 of 12 6.1.11 单击菜单 Method Æ New Æ New Method from Acquired MRM Data… 6.1.12 用鼠标光标指向文件夹“CMAMCal_L5.d” 并选择“ Open ”按钮导入 MRM 方法采集信 息： 6.1.13 检查导入的用于 MRM 化合物设置的采集参数： 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 7 of 12 6.1.14 单击保留时间设置“ Retention Time Setup ”检查确认导入的参数（建议在样品分析时尽 量按保留时间分组，以免干扰）： 6.1.15 单击方法设置任务 Method Setup Tasks Æ ISTD，然后从下拉菜单“ISTD Compound Name”为每个目标化合物指定内标 化合物（ISTD），并在 ISTD Conc 列输入相应内标 的浓度）。 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 8 of 12 6.1.16 单击方法设置任务 Method Setup Tasks Æ Concentration Setup，输入 125 到稀释的最 高浓度（ Dil. High Conc）； 1:5:2:2.5:2 到稀释模式（Dil. Pattern）。确认浓度级别名称. （Level Name Prefix）为 L 且 # of Levels 为 5（实际样品分析时可以不必输入 L），然后 选择创建级别（Create Levels）： 6.1.17 比较新创建的校正浓度级别与稀释的最高浓度（Dilution High Concentration）和稀释样式 （Dilution Pattern）： 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 9 of 12 6.1.18 单击菜单然后复制校正级别到… Method Æ Copy Calibration Levels To… 6.1.19 在复制校正级别对话框，单击选择所有（Select All）对话框，然后单击 OK 按钮 6.1.20 关闭化合物信息窗口 6.1.21 浏览方法表（Method Table）比较四个目标化合物“Amp”, “Cocaine”, “Meth” 和 “MSDA” 的 校正浓度设置: 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 10 of 12 6.1.22 单击方法设置任务 Method Setup Tasks Æ Qualifier Setup，检查限定离子设置（check Qualifier setup）参数，在导入 MRM 方法采集参数时限定离子参数应该自动产生： 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 11 of 12 6.1.23 单击方法设置任务-校正曲线设置 Method Setup Tasks Æ Calibration Curve Setup, 检查 每个目标化合物曲线拟合（Curve Fit ）的缺省设置： 6.1.24 单击 Save/Exit Æ Validate 验证方法设置： 6.1.25 单击 Save/Exit Æ Exit，然后选择 Yes 应用方法到此批处理表。 6.1.26 在工具栏上单击分析批处理（Analyze Batch）图标启动批处理分析。 生命科学及化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析软件培训 Page 12 of 12 6.1.27 检查显示在批处理表（ Batch Table）上的批处理分析结果，化合物信息和校正曲线显示在 分析结果的下部： 6.1.28 单击 File Æ Save Batch，然后单击 File Æ Close 关闭批处理 生命科学与化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析-创建校正曲线 1 of 4 G6410A 定量分析-创建校正曲线 7.1 在校正（Calibration）窗口调节曲线拟合设置 Curve Fit Setup 7.1.1 启动定量分析软件 Quantitative Analysis 7.1.2 在工具栏上单击恢复为缺省画面 “Restore Default Layout” 按钮确认主窗口 显示画面为缺省布局 7.1.3 单击菜单 File Æ Open Batch… 从“X:\quantdata\DrugOfAbuse”路径下打开 批处理文件 “Test_01” （X 为盘符） 7.1.4 确认批处理表格显示模式为单一化合物而且显示的目标化合物为 Amp 7.1.5 将鼠标箭头指向样品 Calib-L1 的准确性（Accuracy）区域以便按照下图 所示显示出超出范围（outlier）信息 生命科学与化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析-创建校正曲线 2 of 4 7.1.6 在校正曲线拟合（Calibration Curve Fit）窗口，将曲线拟合原点处理方式 由强迫（ Force）改为忽略（Ignore）。检查改变后曲线拟合 方程和相关系数 R^2 的值。改变权重从没有（None）到 1/y，检查改变后曲线拟合方程和相关系数 R^2 的值。 要点: 曲线拟合原点 强迫“Force” –选择强迫校正曲线过原点(X=0, Y=0)。 忽略“Ignore”–校正曲线拟合不使用原点 (X=0, Y=0)。 曲线拟合权重 “None” –此选择对所有数据点等权重。 “1/Y” – 此选择对数据点使用 1/Y 权重以减少高 Y 值（高响应值）的影响 ， 增加低 Y 值（低响应值）的影响。 7.1.7 在工具栏上单击分析批处理图标（Analyze Batch）来分析批处理，在批 处理分析后检查批处理表中的结果。 7.1.8 在批处理表工具栏上单击下一化合物显示下一个化合物（Cocaine），检 查定量结果，尤其是准确度值。 生命科学与化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析-创建校正曲线 3 of 4 7.1.9 在批处理表工具栏上单击下一化合物显示下一个化合物（MDMA），检 查定量结果，尤其是准确度值。 7.1.10 在批处理表工具栏上单击下一化合物显示下一个化合物（Meth），检查 定量结果，尤其是准确度值。 7.1.11 在校正曲线拟合窗口，将曲线拟合原点处理方式由强迫（ Force）改为忽 略（Ignore）。改变权重从没有（None）到 1/y，检查改变后 曲线拟合方程和相关系数 R^2 的值。 生命科学与化学分析仪器部 Mass Hunter 定量分析-创建校正曲线 4 of 4 7.1.12 在工具栏上单击分析批处理 Analyze Batch 图标分析批处理，在批处理分 析后检查批处理表中的结果。 生命科学及化学分析仪器部 G6410A QQQ 日常维护与故障排除 1 of 2 G6410 日常维护与故障排除 故障排除 8.1 在采集画面点击 System LogBook 图标查看故障信息： 8.2 根据信息提示查找故障 日常维护 8.3 前级泵-添加泵油（按住 Ctrl 并点击鼠标,启动链接视频） 8.4 前级泵-检查泵油液面/每周 8.5 电离源-清洗电喷雾源电离腔/每日 8.6 电离源-清洗电喷雾源电离腔/每周 8.7 电离源-清洗 APCI 电离腔/每日 8.8 电离源-清洗 APCI 电离腔/每周 8.9 电离源-调节 ESI 喷雾针 8.10 电离源-更换 ESI 喷雾针 8.11 电离源-调节 APCI 喷雾针 8.10 电离源-更换 APCI 喷雾针 8.11 卸掉脱溶剂组件 8.14 取出毛细管 8.15 清洗毛细管 8.16 清洗 Skimmer 8.15 更换电子倍增器 EM 电离源: 电喷雾源(B)1 HPLC 流速 (ul/min) 雾化器 垫片 2 雾化器 压力(psi) 干燥气体 流速 (l/min) 干燥气体 温度 (oC) 毛细管 电压 (V) 1 – 10 不安装 10 – 15 4 325 4000 10 – 50 不安装 15 – 20 5 325 50 – 200 安装 20 – 40 8 350 200 – 500 安装 30 – 50 8 – 10 350 500 – 1000 安装 50 – 60 10 – 12 350 大气压化学源(B) HPLC 流速 (ul/min) 雾化器 压力 （Nebulizer Pressure） (psi) 干燥气 流量 (Drying Gas Flow) (l/min) 干燥气 温度 (Drying Gas Temp) (oC) APCI 汽化器温 度 Temp (Vaporizer Temp) (oC) 电晕电流 (Corona Current) (nA) 毛细管 电压 C(Capillary Voltage) (V) 200 – 15003 60 5 350 300 – 500 4000 (pos) & 20,000 (neg) 3500 1 如果流动相含水超过 50%,适当提高干燥气体的流速和温度 2 雾化器垫片随 LCMSD QQQ 仪器提供 3 APCI-B 需要足够的液体流量以便产量优化的离子信号,最佳灵敏度一般折衷到~400ul/min 4 优化的仪器参数可能因仪器以及流动相组成不同而不同，雾化器消耗 N2 为 0.7-1.2L/min(20 psi);2-2.5L/min(60 psi) ESI调谐液 G2421A APCI 调谐液 PN G2422A 编号 正模式 负模式 编号 正模式 负模式 Mass1 118.08 112.99 Mass1 121.05 119.04 Mass2 322.05 431.98 f Mass2 322.05 Mass3 622.03 601.98 Mass3 622.03 556.00 Mass4 922.01 1033.99 Mass4 922.01 805.99 Mass5 1521.97 1633.95 Mass5 1521.97 1305.95 Mass6 2121.93 2233.91 Mass6 2121.93 1805.92 Mass7 2721.89 2833.88 f = 此离子出现在 Fragmenator @ 140 V 单四极条件，对于 QQQ，140V 很难出现此离子，所以调谐时不选中此离子或 Frag 电压 240V 真空: 典型值：前级真空一般 2 Torr，高真空一般 2.7-3.3 x 10-5 （碰撞气打开）， 3 x 10-6 （碰撞气关闭） 真空注意事项: 1) 只要 LC/MSD QQQ 处于真空状态，维持喷雾腔（源内）正压至少需要 3L/min 的干燥 气流量。如果没有 N2 但系统还处在真空状态下，较低或没有干燥气流量会导致没有过滤或污染的空气 （废气管）吸入真空腔导致污染； 2) 如果系统要关机，在重新开机前要确认关闭前级泵上的气镇阀。 3) 气镇阀应定期打开（每周二次，每次 20min），（逆时针旋转 2~3 圈）以便冷凝在油雾滤清器中的油 回流到真空泵。开机关机前都应关闭。 LC/MSD 快速参考指南 G6410A QQQ 系列 G6410A 现场操作培训-封面.pdf G6410A 现场操作培训1-硬件概述及原理.pdf G6410A 现场操作培训2-开机软件概述关机.pdf G6410A 现场操作培训3-调谐.pdf G6410A 现场操作培训4-方法编辑.pdf G6410A 现场操作培训5-数据分析-提取质谱图及背景扣除.pdf G6410A 现场操作培训6-数据分析-创建定量批处理和方法.pdf G6410A 现场操作培训7-创建校正曲线.pdf G6410A 现场操作培训8-故障排除与日常维护.pdf 附录-G6410A QQQ Quick Reference Guide.pdf