TORCH病原及其实验室检测进展

nullTORCH病原及其实验室 检测进展 TORCH病原及其实验室 检测进展 温州医学院附属第二医院 郑晓群 TORCH ?TORCH ?　是一组具有胎儿致畸作用病原微生物的英文缩写。 TORCHTORCH弓形体（Toxplasma，Toxo） 其他微生物 (Others) 风疹病毒（Rubella virus，RV） 巨细胞病毒（Cytomegalo virus，CMV） 单纯疱疹病毒（herpes simples virus，HSV） TORCH感染可造成孕妇流产、胎儿畸形，是发病率较高的致畸微生物。 许多国家已将TORCH检测作为孕期常规筛查项目。 TORCH的病原学和致病性 1. 弓形虫( Toxoplasma ) 1. 弓形虫( Toxoplasma ) 分类：弓形虫目前在世界上只有一种，即刚地弓形虫（T.gondii）。是一种专性细胞内寄生的原虫，为人兽共患病。 生活史：分有性生殖和无性生殖。包括5个期：滋养体、包囊、裂殖体、配子体、卵囊。猫科动物是终宿主；人和哺乳动物是中间宿主。 包囊速殖子null滋养体 传染源： 猫及猫科动物为重要传染源，人类通过胎盘垂直传播。 1. 弓形虫( Toxoplasma ) null寄生场所： 中间宿主体内：除红细胞外的各种有核细胞内。 终宿主体内：小肠上皮细胞内。 感染时期： 包囊、假包囊、滋养体及卵囊。null感染方式： 1）先天性感染 经胎盘感染。 2）后天性感染 经口感染 食入含有包囊或假包囊的肉、蛋、奶等制品；食入含有卵囊污染的水、食物等。 经皮肤粘膜感染 经输血或器官移植感染1. 弓形虫( Toxoplasma ) 1. 弓形虫( Toxoplasma ) 妊娠早、中、晚期，胎儿受染率分别为17%、25%和65%。 早、中期感染：除可引起流产外，还可引起胎儿多发性 畸形，如脑积水、小眼、无眼症、先天性白内障、唇腭 裂、先天性心脏病、肛门闭锁及肢体畸形等。 晚期感染：可引早产、围产儿死亡，也可致脑萎缩、脑 积水、智力发育迟缓或癫痫等。 致病性： 弓形虫感染引起的脑膜膨出视网膜脉络膜炎 眼底出现圆形或椭圆形病灶，约1-3个视乳头面积大小，边界清楚，病灶内组织消失。1. 弓形虫( Toxoplasma ) 风疹病毒为披膜病毒科风疹病毒属。 病毒粒子具有多形性，大小为50～85 nm 单股正链 RNA ，并有若干个结构蛋白。病毒核心直径约为30nm。 人是病毒的唯一宿主，不能终身免疫。 双层包膜，表面嵌有具有凝血和溶血活性的刺突。 对乙醚等脂溶剂敏感，不耐热，紫外线。 2. 风疹病毒(Rubella virus) 　2. 风疹病毒(Rubella virus) 　2. 风疹病毒(Rubella virus) 　人是风疹病毒的惟一自然宿主。 病毒进入呼吸道后先在局部粘膜，继而在颈部、颏下和耳后淋巴结增殖，约7d后入血并扩散至全身，引起皮疹(淡红色斑丘疹)，疹期3 d，病毒通过呼吸道分泌物排出体外。2. 风疹病毒(Rubella virus) 　2. 风疹病毒(Rubella virus) 　主要通过飞沫传播。人群普遍对风疹病毒易感，以儿童最多见。 风疹病毒还可发生垂直传播，导致先天性风疹综合征，亦可导致流产或死胎等。2. 风疹病毒(Rubella virus) 　2. 风疹病毒(Rubella virus) 　妊娠初期，母体血液中的病毒可通过胎盘感染胎儿，常导致白内障、小眼球症、重听、心脏病和小头症等先天性异常。 妊娠第一 个月感染风疹，CRS的发生率达50％，第二个月为30％，第三个月为20％，第四个月为5％。 风疹病毒感染后机体能获得牢固的免疫力(特异性IgG抗体)。致病性与免疫性3. 巨细胞病毒（CMV）3. 巨细胞病毒（CMV） 1956年Smith等首先用组织培养方法分离出病毒。 由于感染的细胞肿大并具有巨大的核内包涵体故而命名巨细胞病毒。3. 巨细胞病毒（CMV）3. 巨细胞病毒（CMV） 巨细胞病毒属疱疹病毒科乙组疱疹亚科。 病毒的直径约200 nm，是最大的动物病毒之一。 病毒衣壳是由162个质粒组成的正20面体。 核酸是双链DNA。 　3. 巨细胞病毒（CMV）3. 巨细胞病毒（CMV） CMV具有典型的疱疹病毒的形态结构。 病毒感染的宿主和细胞范围狭窄，种属特异性高：即人CMV只能感染人，细胞培养时也只能在人的成纤维细胞中增殖。生物学性状3. 巨细胞病毒（CMV）3. 巨细胞病毒（CMV） 复制周期长，增殖缓慢，初次分离 有时需1个月才能出现局灶病变。 特点是细胞变圆、膨胀、核变大、 形成巨大细胞，核内出现周围绕有 一轮“晕”的大型嗜酸性包涵体。3. 巨细胞病毒（CMV）3. 巨细胞病毒（CMV） 潜伏部位：唾液腺、乳腺、肾脏、白细胞及其他腺体，长期或间歇地从尿、唾液、泪液、乳汁、精液、宫颈及阴道分泌物排出病毒。 传染源：患者及无症状的隐性感染者。 传播途径：人与人之间的密切接触，通过口-口或手-口传播。此外还可通过输血和器官移植等多种途径传播。 3. 巨细胞病毒（CMV）3. 巨细胞病毒（CMV）CMV在人群中的感染极为普遍，初次感染大多在2岁以下，通常呈隐性感染，少数人有临床症状 。 60%～90%成人有CMV抗体，可长期带病毒。 孕妇一旦感染，可通过血液、胎盘屏障、羊水等感染胎儿，致胚胎发育异常，造成流产、死胎、早产、先天畸形及出生后持续感染等一系列严重后果。 4.单纯疱疹病毒( Herpes simples virus)单纯疱疹病毒属疱疹病毒科，直径150～200nm，为双链DNA结构，神经节潜伏感染，根据其抗原性的不同分为Ⅰ型和Ⅱ型。 I型病毒多侵袭腰以上部位，引起如口唇疱疹、疱疹性湿疹、口腔炎、角膜结膜炎等病症； II型病毒多感染腰以下部位，引起生殖器疱疹，它主要通过性生活传播，并可能与宫颈癌有关。 4.单纯疱疹病毒( Herpes simples virus)4.单纯疱疹病毒( Herpes simples virus) 单纯疱疹病毒在人群中广泛存在，人是唯一的宿主。 传染源：患者及无症状单纯疱疹病毒携带者是传染源。 （病毒常存在于疱疹病灶或健康人唾液中） 传播途径：主要通过直接密切接触和两性接触传播。 4.单纯疱疹病毒( Herpes simples virus)4.单纯疱疹病毒( Herpes simples virus)4.单纯疱疹病毒( Herpes simples virus)妊娠初8周受染：可发生流产及先天畸形如小脑、先天性无脑、脑积水等多器官畸形。 晚期感染HSV：胎儿可见有小头、小眼球、视网膜脉络膜炎、大脑半球萎缩、发育迟缓、智力障碍、严重病例可致死亡。 致病性5. 其他微生物(others) 5. 其他微生物(others) 柯萨奇病毒 　梅毒螺旋体 　微小病毒 　乙型肝炎病毒等 乙肝病毒经胎盘垂直传给胎儿，可引起婴幼儿非致命性传染性肝炎。 妊娠期发生急性微小病毒B19感染后，超过95 %的胎儿在胎龄12 周内出现并发症如水肿，甚至死亡等。TORCH与优生优育关系TORCH与优生优育关系TORCH感染的临床诊断TORCH感染的临床诊断TORCH常规检验项目TORCH常规检验项目TORCH检验目的TORCH检验目的TORCH检验方法TORCH检验方法ELISA 化学发光法 Western Blot 基因诊断 组织细胞培养 ELISA ELISA 测特异的IgG和IgM 间接法和捕获法 特异IgG抗体亲和力 （Avidity）的测定 null 特异IgG抗体亲和力 特异IgG抗体亲和力 基本原理: 机体感染病原体后,初次免疫应答后产生的抗体,通常为低亲合力( 有功能的亲和力),经过数周或数月后,经过亲和力成熟的过程,其与抗原的互补更好, 而成为高亲合力抗体。 特异IgG抗体亲和力 特异IgG抗体亲和力 在免疫测定中，临床标本中加入尿素或其他变性剂，则可测出可经受及不能经受尿素等变性剂作用的抗体，不能经受的则为低亲合力抗体，则反映为急性或近期感染。 特异IgG抗体亲和力测定的意义 特异IgG抗体亲和力测定的意义可排除患者前4-5个月内发生的感染，其 对第一个月的特异IgM和IgG均阳性的妊娠妇女尤其有用，如果此时特异IgG为高亲合力,则说明为孕前感染，怀孕前感染对胎儿影响不大。母婴成对样本IgG和IgM蛋白印迹（Western Blot，WB) 母婴成对样本IgG和IgM蛋白印迹（Western Blot，WB) 母婴成对样本蛋白印迹可能对在常规方法测定IgA和/或IgM抗体为阴性但其母亲在孕期有确定的或急性获得性感染的新生儿的感染的诊断最有用。Western Blot Western Blot 母婴成对样本IgG和IgM蛋白印迹（Western Blot，WB) 母婴成对样本IgG和IgM蛋白印迹（Western Blot，WB) IgG可通过胎盘由母体至胎儿。 IgA和IgM不能，但在出生过程中却可能发生，来 自母体的IgA和IgM持续时间短，只有数天。 对母体和婴儿血清进行蛋白印迹检测,可出现 不同的条带，其原因可能对病原体的免疫应答 在胎儿和母体间不一样。 使用IgA WB最不敏感，联合IgG和IgM的WB 最敏感。母婴成对样本IgG和IgM蛋白印迹（Western Blot，WB) 母婴成对样本IgG和IgM蛋白印迹（Western Blot，WB) 出生后几天的血清标本，WB阴性结果有可能 为假阴性，因为有可能出生后几周内都不出 现阳性结果。 WB应与其他方法如ELISA测IgA和IgM联合应 用。单个方法很难对先天性感染做出诊断。 关键是对婴儿进行仔细的重复检测来确定是 否感染。基因诊断基因诊断测定样本：血液、羊水、尿液、脑脊液等。 PCR测定病原体核酸是测定特定病原体急性感 染的最直接的证据。 采用羊水进行PCR测定是较常规检测方法敏感、快速和更安全的方法。TORCH检验的应用及结果解释TORCH检验的应用及结果解释 目前尚不能依靠单个的方法来明确诊断 检测 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 是： 1.使用高质量的IgM、IgA、IgG特异抗体检测 试剂； 2.使用高质量的特异IgG亲合力实验 3.联合血清学实验、培养和PCR检验可大大提 高诊断效率。null几个有关风疹检测的例子几个有关风疹检测的例子nullHSV检测的结果解释HSV检测的结果解释建议的TORCH ELISA测定的报告和解释建议的TORCH ELISA测定的报告和解释null谢谢大家E-mail: zhengxiaoqun@gmail.com