环境控制－崔强1

Slide 1 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 微生物实验室质量控制 主讲人： 崔强 2007年8月 E-mail: cui.qiang@sspc.com.cn Slide 2 of 100 微生物实验室质量控制 z 环境维护 z 合适的消毒方式 z 原料、介质的污染控制 z 制备工艺控制 z 灭/除菌工艺 防止和消除微生物污染的措施 简要回顾 Slide 3 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 目的 z 熟悉专业术语. z 介绍洁净级别的划分方法. z 总述洁净区环境控制与评价的原则. z 建立完整的环境控制 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 . z 实例分析 Ê环境监控有助于动态审查相关SOP的执行情况 z 生物安全柜的使用 Slide 4 of 100 相关术语（一） z 洁净区(室) Ê悬浮粒子，粒径 z 洁净度或洁净级别 SA RA H E P A F I L T E R S 水平单向流 SA RARA HEPA F I LTERS 竖直单向流 z 菌落单位 z 单向流 Slide 5 of 100 相关术语 (二) z 动态洁净室 Ê空态洁净室，静态洁净室 z 无菌生产工艺 z 产品接触区 z 趋势分析 混和流 RA HEPA HEPA HEPA SA RA乱流 Slide 6 of 100 洁净室(区)洁净级别的划分（一） z 级区的划分 Ê通用 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 FED 209 E，现已为ISO 14644所替代 Ê划分依据为空气悬浮粒子水平 Ê 计算 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 z 医药用洁净环境的控制要求 Ê注重洁净环境中的微生物水平 0821.010 . D N nC ⎟⎠ ⎞⎜⎝ ⎛×= Slide 7 of 100 洁净室(区)洁净级别的划分（二） z 相关法规及推荐标准 Ê 国标 GB 50073-2001《洁净厂房设计 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 》 Ê 国家 GMP 《药品生产质量管理规范》 Ê 美国 FDA的CGMP Ê 欧盟 GMP附录1 Ê 世界标准化组织的 ISO/TC 209中的 ISO 14644和 ISO 14698系列 Slide 8 of 100 ISO 14644中的洁净级别划分表 2930008320000352000009 2930083200035200008 2930832003520007 29383203520010200023700010000006 29832352010200237001000005 8335210202370100004 83510223710003 410241002 2101 5μm1μm0.5μm0.3μm0.2μm0.1μm 每立方米中大于或等于特定粒径的微粒数ISO 级别 Slide 9 of 100 ISO 14644中对无菌工艺药品用洁净室的要求 无菌灌装工艺的 支持区，包括配 料区 不适用单向流或混和流8 （≥0.5μm） 对无菌灌装工艺 区起直接支持作 用的其它工艺区 不适用单向流或混和流7 （≥0.5μm） 无菌灌装工艺区> 0.2单向流5 （≥0.5μm） 举例平均气流速度 m/s 气流流型空气洁净等级 （ISO级别） 动态 Slide 10 of 100 洁净区环境控制与评价原则 (一) z 实行全面监控 Ê 空气洁净度、表面微生物、人员卫生状况 Ê 分析和评价环境净化设施总体运行状况的两个指标 Ê 表面微生物监测的重要性 Ê 人员卫生状况考查 z 实行动态监控 Slide 11 of 100 无菌工艺产品的无菌保证 PersonnelEnvironment 工艺验证 人员原料环境 无菌检验 Slide 12 of 100 洁净区环境控制与评价原则 (二) z 定期进行再验证 Ê 再验证的频率 ISO 洁净室等级名称 Ê 再验证项目 Ê 提供文件支持 Slide 13 of 100 洁净区环境控制与评价原则 (三) z 定期进行趋势分析 z 及时处理异常或超标结果 Ê异常结果分类 Ê调查内容 Ê纠偏措施 Ê风险评估 Ê文件存档 Slide 14 of 100 趋势分析 – 环境受控 z 利用趋势分析来评价环境是否受控时应关注以下几个方面 Ê 环境控制限度的可靠性 Ê 数据是否连续三次超出警戒限度 Ê 监测结果是否随季节变化而出现有规律的波动或跳跃 Ê 对于1个或几个明显低于或高于大多数监测值的数据， 可作为异常值（outliers）处理 Slide 15 of 100 洁净区环境控制与评价原则 (四) z 制定和实施系统的环境监测方案 Ê 监控项目 Ê 取样位置和计划 Ê 现场监测方法和结果记录 Ê 微生物鉴别 Ê 偏差调查与纠偏措施 Ê 人员培训 更衣培训 Slide 16 of 100 趋势分析图 – 示例1 Trend Analysis of Airborne Particulates dynamically in Aseptic Filling Room during 2002 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000 1 9 17 25 33 41 49 57 65 73 81 89 97 105 113 121 129 137 145 153 161 169 177 185 193 201 209 Batch A irb or ne P ar tic ul at es (p ar tic le s/ ft3 ) Average Value Action Level Alert Level Slide 17 of 100 趋势分析图 – 示例2 Trend Analysis of Airborne Microbes dynamically in Oil Purification Area during 2002 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Month A irb or ne M ic ro be s (C FU /m 3 ) Average Value Action Level Alert Level Slide 18 of 100 取样计划 z 原则 z 环境监控的相对重要性 Ê 人员活动增加导致人员接触产品的风险增加 Ê 环境监控资料对批产品放行的重要性 z 取样计划的调整 z 常规取样频率 Slide 19 of 100 USP 29 无菌灌封生产环境监测建议取样频率 每班生产时均监测100级的邻近支持区 每周1次无菌工艺的其它非产品接触性 支持区（100000级或更低） 每周2次可能接触产品/容器的区域 每周2次其它100000级支持区 每班生产时均监测100级或更高级别区域 取样频率监测区域 Slide 20 of 100 取样点、取样量及监测结果的计算与评价(一) z 确立阶段 z 动态条件下最低取样点数的一般要求 NL = A/(NC)0.5NL = A0.5 FS 209 EISO 14644-1 NL : 最少采样点；A：洁净室或洁净区面积； NC : 英制级别 Slide 21 of 100 取样点、取样量及监测结果的计算与评价(二) 洁净区（室）空气悬浮粒子、浮游菌及沉降菌的最少取样点数 1340160≥400~<1000 62080≥200~<400 31040≥100~<200 2416≥40~<100 228≥20~<40 224≥10~<20 222~3<10 10000010000100 洁净级别面积 m2 Slide 22 of 100 取样点、取样量及监测结果的计算与评价(三) 空气洁净度测试取样位置示例 Slide 23 of 100 取样点、取样量及监测结果的计算与评价(四) 空气悬浮粒子、空气浮游菌、空气沉降菌监测 z 取样点的布置要求及最低取样量 一个区域内最少取样5次，采样点数目不得少于2 个，每点取样次数可多于1次，每次取样量不得 低于2.83L 空气悬浮粒子 100级区内不得少于14皿，10000和100000级区内 不得少于2皿 空气沉降菌 每点采样1次，10000级或更高级别内取样量不得 低于500L/次，100000级或更低级别取样量不得 低于100L/次 空气浮游菌 要求项目 Slide 24 of 100 取样点、取样量及监测结果的计算与评价(五) 空气悬浮粒子、空气浮游菌、空气沉降菌监测 z 监测结果计算与评价 Ê空气悬浮粒子（每个采样点的平均粒子浓度，UCL值） UCL = M + t ×SE 95%置信上限的t分布系数 1.92.02.12.42.96.3T 7-965432采样点数（L） Ê空气浮游菌、空气沉降菌 Slide 25 of 100 取样点、取样量及监测结果的计算与评价(六) z 表面微生物监测 Ê 取样点数的确定 Ê 三类表面及相应的微生物限度 Ê 取样位置、取样面积、取样时间 Ê 结果评价 Slide 26 of 100 取样点、取样量及监测结果的计算与评价(七) z 人员卫生状况监测 Ê 监测频率、部位 Ê 取样面积、取样时间 Ê 结果评价 Slide 27 of 100 警戒限度和纠偏限度(一) （针对于微生物水平） z 警戒限度 Ê 用以指示环境中的微生物水平是否有偏离正常水平的可能性 Ê 如超过，至少应予以调查 z 纠偏限度 Ê 一旦超出，表示环境中微生物污染水平已严重偏离正常水平， 对产品质量造成高度的污染风险 Ê 必须立即采取纠偏措施 Slide 28 of 100 警戒限度和纠偏限度(二) z 制定依据 Ê 警戒限以正常监测数据为基础，并赋与一定的安全系数 Ê 纠偏限度可设为警戒限的2倍，但不得高于参照性标准 z 定期复查 Ê 在规定周期内对限度的可行性进行复查 Ê 使用趋势分析的方法调查环境变化趋势，并采取相应措施 Ê 限度可以提高，也可以降低 Slide 29 of 100 国际上推荐使用的统计学方法 z 临界值法（Cut-off Value Approach） Ê 对一个时期内所有数据以柱状图模式给出，5%-1%原则 Ê 取最近100个采样数据，以第95区间和第99区间作为警戒限 度和纠偏限度 z 正态分布法（Normal Distribution Approach） Ê 警戒限度＝平均值 + 2σ Ê 纠偏限度＝平均值 + 3σ Ê 适用于计数值较高的情形 Slide 30 of 100 纠偏限度的可靠性检查 z 当一个时期内的数据符合指数分布或非正态分布时 Ê 利用这些数据进行统计学分析 数据计算值 ＝ 4.6 × （平均菌落数） Ê 如果计算值高于限度设定值，则 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 纠偏限度的设置不可靠， 需要重新审核 z 当一个时期内的数据符合正态分布时 Ê 利用这些数据进行统计学分析 数据计算值 ＝ 2.33σ＋（平均菌落数） Ê 如果计算值高于限度设定值，则说明纠偏限度的设置不可靠， 需要重新审核 Slide 31 of 100 控制标准 - 1 15≤1,000≤60,000≤10,500,000300,000级 10≤500≤20,000≤3,500,000100,000级 3≤100≤2,000≤350,00010,000级 1≤50≤3,500100级 沉降菌（CFU/皿） (Ф90mm×0.5小时) 浮游菌 （CFU/m3） ≥5μm≥0.5μm 微生物最大允许数尘粒最大允许数/立方米洁净级别 中国GMP（1998年版）医药工业洁净环境控制标准 Slide 32 of 100 控制标准 - 2 --(c)--(c)20,0003,500,000D(a) 3,520,000820,0003,500,00 0 2,000350,000C(a) 352,0007352,000支持2,000350,00013,500B(a) 3,52053,520关键13,50013,500A(a) ≥0.5μm≥0.5μm≥5μm≥0.5μ m ≥5μm≥0.5μm粒径 动态级 别 动态区域动态静态(b) ISO 14644-1美国FDA 2004欧盟GMP附录一（2003） 医药工业洁净室最大允许空气悬浮粒子数(个/立方米) Slide 33 of 100 控制标准 - 3 ---< 100M6.5100,000 20105 (一般表面) 10 (地板) < 20M5.510,000 533 (包括地板)< 3M3.5100 操作服手套SI制惯用 人员卫生 (CFU/接触碟*)设施表面微生物 (CFU/接触碟*) 浮游菌 (CFU/m3) 级别 USP29 <1116> 医药工业洁净室建议最大允许的微生物含量(动态) Slide 34 of 100 控制标准 - 4 --50100200D --2550100C ≤ 55510B < 1< 1<1<1A 手套(五指)表面 (CFU/手套) 表面微生物 CFU/接触碟 (25cm2)* 空气沉降菌 (Ф90mm×4小时) 浮游菌 CFU/m3 洁净级别 欧盟GMP 附录1. (2003) 医药工业洁净室建议最大允许的微生物含量 Slide 35 of 100 控制标准 - 4 欧盟GMP 附录1. 修改稿 (2005年9月) 中与洁净室控制相关的重要变化 9 粒径≥0.5μm的粒子数为1/m3的含义 9 进行级区划分时，A级区每个采样点的最小取样体积 9 对于A级区，应使用空气悬浮粒子连续监测系统或频繁采样监测系统 9 培养基灌封实验的合格标准 9 轧盖前的冻干剂西林瓶应始终置于A级区环境下 Slide 36 of 100 控制标准 - 5 501003,520,0008 100,000 510352,0007 10,000 3735,2006 1,000 113,5205100 空气沉降菌 (CFU/4hr. Φ90mm) 空气浮游菌 (CFU/m3) 空气悬浮粒子水平 (≥0.5μm 粒子 /m3) ISO级别 洁净级别 ≥0.5μm 粒子/ft3 FDA 无菌工艺药品 CGMP 工业指南 (2004年9月) Slide 37 of 100 监测方法 z 选择原则 Ê 保证所获得的结果具有准确性和重现性，以 确保被监测区域的环境状况处于受控状态 Slide 38 of 100 空气悬浮粒子监测 Ê监测设备 ¾ 光散射式空气粒子计数器 ¾ 监测时间通常在操作开始前、进行中及结束后三个阶段 ¾ FDA和EC已经期望整个无菌操作过程始终处于连续监测状态 Ê注意事项 ¾ 严格按说明书操作 ¾ 事先确认洁净室（区）通风系统运行平稳后，方可进行取样 ¾ 取样口的放置方向 ¾ 取样量 Slide 39 of 100 空气悬浮粒子监测 z 关键区内空气悬浮粒子取样点位置选择 Ê FDA指南 ¾ 在已灭菌产品、容器和密封件暴露、污染风险最大点进行测试 ¾ 距操作点1英尺范围内 ¾ 对操作带来产品粉尘的处理 Slide 40 of 100 空气悬浮粒子监测 z 常见便携式空气悬浮粒子计数器 PMS公司产品 MET ONE公司产品 Slide 41 of 100 空气悬浮粒子在线定点连续监测系统 z 连续监测系统示意图(一) Slide 42 of 100 空气悬浮粒子在线定点连续监测系统 z 实时监测系统示意图(二) Slide 43 of 100 空气悬浮粒子在线定点连续监测系统 ¾ 实时监测系统功能 z 连续测量各点的洁净度、温度、相对湿度、压差、TOC等参数， 使整个生产过程中的每一时刻都得到监测； z 在同一采样点进行连续的监测，有助于确立基线，从而进一步建 立警戒限和纠偏限； z 监测到的数据在时间和空间上都具有固定性，数据之间有可比性 和参考性，可以在各参数间建立起相互的联系，并对系统运行进 行长期趋势分析； z 方便地记录和整理数据，避免了繁杂的劳动，减少错误出现。 Slide 44 of 100 空气悬浮粒子在线定点连续监测系统 z 实时监测系统用遥控粒子计数器 Slide 45 of 100 空气悬浮粒子在线定点连续监测系统 z 实时监测系统的验收测试FAT SAT Factory Acceptance Test Site Acceptance Test HATS Hardware Acceptance Tests SATS System Acceptance Tests HATS Hardware Acceptance Tests SATS System Acceptance Tests Installation Qualification (IQ) Operational Qualification (IQ) Factory Acceptance Tests GAMP cGMP Slide 46 of 100 空气悬浮粒子在线定点连续监测系统 实时监测系统的安装确认项目举例 ¾ 系统示意图 ¾ 系统组件清单 ¾ 计算机、显示器、打印机、操作系统版本检查 ¾ 数据采集、处理、报警信息提供用软件检查 ¾ 协议转换模块确认 ¾ 继电器模块用协议转换模块确认 ¾ 报警灯用继电器触点模块确认 ¾ 远程悬浮粒子计数器和供电箱检查 ¾ 报警灯系统检查 ¾ 真空泵系统检查 Slide 47 of 100 空气悬浮粒子在线定点连续监测系统 实时监测系统的运行确认项目举例 ¾ 用户进入控制检查 ¾ 特定图形界面、数值列表和趋势图功能检查 ¾ 审计追踪功能检查 ¾ 出现报警状态时的系统响应功能检查 ¾ 协议转换模块确认 ¾ 报告形成功能检查 Slide 48 of 100 空气微生物监测 z 沉降菌测试 ¾属于被动式取样法，对空气环境破坏小 ¾放置时间 ¾取样方法 z 浮游菌测试 ¾ 取样原理 ¾ 各种取样方法的优缺点 Slide 49 of 100 空气微生物监测 z 常见空气浮游菌取样器 Slide 50 of 100 空气微生物监测 z 常见空气浮游菌取样器 Slide 51 of 100 空气微生物监测 z 常见空气浮游菌取样器 表面空气取样器 （ Surface Air Sampler ） Slide 52 of 100 空气微生物监测 z 压缩气体取样器（针对于氮气、压缩空气） Millipore 微生物采样设备 PMS 微粒采样设备 Slide 53 of 100 表面微生物监测和人员卫生监测 z 表面微生物监测和人员卫生监测 Ê接触碟取样 ¾ 适用于平整的规则性表面 ¾ 取样方法 ¾ 属于定量检测方法 Ê拭子取样 ¾ 适用于不规则表面 ¾ 取样方法 ¾ 属于定量检测方法 Slide 54 of 100 培养基及培养条件（一） z 培养基和培养条件必须具有广谱性 Ê 全能型培养基 TSA或NA Ê 专用于酵母菌和霉菌分离生长的特定培养基 Ê 表面监测用培养基中的添加剂 z 厌氧微生物监测 Ê 取决于生产工艺 Ê 审查无菌检查试验阳性结果 Ê 初始性评价 Slide 55 of 100 提示：微生物的分类知识 ¾ 按细菌对氧气的需求程度可划分为 Ê 专性好氧菌 Ê 兼性厌氧菌 Ê 微好氧菌 Ê 耐氧菌 Ê 厌氧菌 ¾ 厌氧菌的特征 Ê 分子氧对其有毒。 Ê 即使短期接触空气， 也会抑制其生长或致死。 Ê 比如梭菌属和双歧杆 菌属微生物。 Slide 56 of 100 培养基及培养条件（二） z 培养基质量控制 z 培养温度和培养时间 Ê多数专家建议，可定为30-35℃下培养48-72小时 Slide 57 of 100 无菌检查用隔离系统的环境监控（一） 特点及主要优点 Ê无菌隔离系统在不同区域之间提 供了有效隔离，并维持其内部环 境达到无菌状态 Ê可以只针对工作区进行清洁消毒 Ê可将人员和有菌环境隔离在工作 区之外 Slide 58 of 100 无菌检查用隔离系统的环境监控（二） z 专用监测方案 Ê监测系统的工作性能，并及时发现系统是否存在故障 z 法规及指南性文件 Ê欧盟GMP、USP、ISO/TC 209、PIC的相关检查指南 Slide 59 of 100 环境微生物的鉴别 z 目的 Ê 积累数据，用于偏差调查和趋势分析 Ê 提供动态评价的依据 z 鉴别程度 Ê 视生产工艺而定 Ê 视检出污染微生物的区域而定 Slide 60 of 100 提示：实验室微生物鉴别常用方法 (一) 微生物表型鉴别方法 z 微生物分离 z 初步筛选 z 表型鉴别 Ê碳源利用和生化反应（Biolog，API，Vitek） Ê脂肪酸分析（MIDI Sherlock） Ê质谱法（MALDI TOF） Slide 61 of 100 提示：实验室微生物鉴别常用方法 (一) 微生物遗传型鉴别方法 z 核糖核酸分型 Ribotyping（Dupont RiboPrinter, BAX） z 重复序列聚合酶链反应 rep-PCR z 核糖体RNA碱基序列分析 ÊABI，MicroSeq 16S rRNA Gene Sequencing bacterial identification system ÊABI，MicroSeq D2 LSU rDNA fungal identification system Slide 62 of 100 FDA指南中对微生物鉴别的要求 z 遗传型方法比传统的生化型/表现型技术更为准确和精确 z 遗传型鉴别方法尤其适用于出现不合格结果后的调查 z 传统的生化/表现型技术适用于分离菌的常规鉴别 Slide 63 of 100 微生物表型鉴别常用设备 LEICA 显微镜 生物安全柜 Slide 64 of 100 监测方法确认 z 目的 Ê 证明监测方法的合理性及监测数据的可靠性 z 确认手段 Ê 回顾性验证/确认 ¾回顾历史数据，并对这些监测数据的重现性予以评价 Ê 挑战性试验 ¾证明监测方法的回收率，作为回顾性验证/确认的支持性 资料 Slide 65 of 100 监测方法确认 z 确认及再确认 Ê 在确认阶段，需对培养基、培养时间、培养温度、取样 用具及监测方法进行评估 Ê 一旦培养基、接触碟、拭子的供应商发生变更，或者监 测方法发生变更，必须进行相应的再确认，以保证新方 法等效或优于现行方法 Slide 66 of 100 人员培训和更衣(一) z 人员是环境控制区内的主要微生物污染源 Ê 只有身体健康者方可进入环境控制区 z 受训范围应包括工作于环境控制区内的所有人员 Ê 包括生产操作人员、环境监测人员、现场维修人员 z 培训内容 Ê GMP培训 Ê 无菌工艺的基本原理 Ê 生产和操作程序与产品污染的相关性 Ê 基础知识培训 Slide 67 of 100 人员培训和更衣(二) z 基本无菌操作技术 Ê 严格执行更衣规范 Ê 只能用无菌器具与无菌物料相接触 Ê 所有活动慢而轻 Ê 人员身体应始终置于层流区之外 Ê 任何操作方式不得影响产品的无菌性 Slide 68 of 100 人员培训和更衣(二) z 控制好操作人员的微生物污染是环境控制方案的最重要内容之一 z 无菌更衣及无菌操作规程同样适用于微生物实验室的无菌检查人 员和微生物限度检查人员 Slide 69 of 100 动态下的无菌灌装工艺微生物学评价 (一) z 培养基灌装试验 Ê 按照产品的实际生产条件进行无菌模拟生产 ¾生产人员、生产步骤和所有物料都应与正常生产时相一致 ¾模拟实际生产时的一些特殊操作以及曾发生过的异常情况 ¾为增加安全范围，还可将可能会出现的条件组合在一起进行试验 Ê 确认无需针对每个产品，但必须对每一条生产线进行确认 ¾对同一条生产线上所用的容器的几何形状以及不同的灌装速度等 因素适当组合，最好采用极端条件 Slide 70 of 100 动态下的无菌灌装工艺微生物学评价 (二) z 培养基灌装试验合格，则表明该生产线在当时可进行类似产品的 生产 Ê从生产环节上分析可能的最差条件 Ê其它相关因素同样不可忽略 Slide 71 of 100 动态下的无菌灌装工艺微生物学评价 (三) z 有关培养基灌装验证的补充内容 9 生产和维修人员每年至少一次 9 FDA (>5000瓶)，PIC（>3000瓶） 9 FDA (20-35℃，目标值±2.5℃；或两个温度 下各培养7天，以低温开始)，PIC (20-25℃下 14天，或20-25℃下7天，然后30-35℃下7天） 9 分为培养前和培养后 Ê 人员参与频率 Ê 最低灌装数量 Ê 培养条件 Ê 破损瓶的处理 Slide 72 of 100 动态下的无菌灌装工艺微生物学评价 (四) FDA指南（2004版）标准 1. 灌封量<5000瓶时，若有1瓶污染，需彻底调查，并重新验证。 2. 灌封量≥5000瓶时，若有1瓶污染，视调查结果决定是否需要重 新验证；若有两瓶污染，必须重新验证，同时进行彻底调查。 欧盟通用标准 1. 计算公式：实际污染率 = (95%置信限值)/(灌封容器数) × 100% 2. 置信限值计算见后页幻灯片 Slide 73 of 100 动态下的无菌灌装工艺微生物学评价 (五) 污染瓶数与95%置信限值间的关系 16.9615.7114.4313.1511.8410.519.157.756.34.743 95% 置信 限值 109876543210污染瓶数 Slide 74 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 小结 z 文中所列举的数据不是绝对的或标准，仅供参考 z 取样方式和数据评价不当，会导致结果有较大差异，或者存在潜 在的微生物污染 z 趋势分析的意义 Ê有助于判断微生物污染状况是否出现上升趋势，以及环境中是 否存在“危险性微生物” Ê如监测数据持续偏离正常状态，说明环境中和/或人员卫生状况 方面一定存在重大偏差 z 偏差调查与记录 Slide 75 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 实例分析 Slide 76 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 实例 Ⅰ z 环境监控有助于动态审查相关SOP的执行情况 Ê 无菌灌封生产环境监控过程中发现 ¾多位操作者的手套表面微生物严重超标 ¾部分设施表面检出少量相同污染微生物 Slide 77 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 实例 Ⅰ z 检验过程调查 z 清洁消毒过程调查 z 洁净室各项物理参数调查 z 人员受训状态调查 z 以上各项调查数据中未发现任何异常 Slide 78 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 实例 Ⅰ ? 进一步的调查揭示…… Slide 79 of 100 医药工业洁净室(区)的环境控制与评价 实例 Ⅰ z 灭菌工艺调查 Ê 灭菌工艺参数达到验证要求 Ê 手套和无菌服的灭菌装载方式未按相应SOP规定执行， 实际操作过程与验证要求明显不符 Ê 导致手套和操作服灭菌不彻底，从而检出污染微生物 Ê 由于人员活动，此微生物进一步污染了临近设施 Slide 80 of 100 补充： HVAC系统示意图 摘自《药品生产验证指南 (2003) 》 Slide 81 of 100 洁净室(区)性能测试要求 (一) z 规定性测试 Ê 空气洁净度测试 Ê 静压差测试 Ê 风速或风量测试 Slide 82 of 100 洁净室(区)性能测试要求 (二) z 选择性测试 Ê 过滤器检漏 Ê 气流流型 Ê 自净时间 Ê污染泄漏 Ê 温度 Ê 相对湿度 Ê 噪声 Ê 照度 Slide 83 of 100 HVAC系统的确认 z 测试项目 - Ⅰ Ê 换气次数（过滤器洁净状态和模拟非洁净态） Ê 压差（过滤器洁净状态和模拟非洁净态） Ê 静态下的气流路线（房间-房间和关键区-非关键区） Ê 温度、湿度 Ê 高效过滤器完整性 Ê 微生物学监测 Ê 必要时，确认区域性熏蒸的去除微生物污染能力 Slide 84 of 100 HVAC系统的确认 z 测试项目 - Ⅱ Ê 关键参数记录控制用设备的准确性 Ê 从操作状态恢复到静态条件所需的自净时间 Ê 进气与排气速度及系统平衡 Ê 控制系统功能 Ê 断电报警和重启动措施的检查 z 不同状态下的初始性确认 Ê 静态 Static condition （HVAC系统运行，工艺设备到位但不运行， 无人） Ê动态 Dynamic condition （HVAC系统运行，工艺设备运行，全部 人员到岗工作） Slide 85 of 100 Utilities系统的确认 z 公用工程系统可分为工艺系统与工艺辅助系统 Ê 工艺系统 9直接接触产品 9所接触的材料最终成为产品的组成部分或盛装容器 9有可能直接影响产品的质量 Ê工艺辅助系统 9不接触产品或最终产品组成部分的材料 9没有特定级别要求的建筑系统 9属于生产工艺间接使用所需 Ê 区别不是绝对的。例如，压缩空气。 Utilities系统的确认 是关键工艺系统工艺真空 否非关键工艺辅助系统冷冻水 否非关键工艺辅助系统加热╱冷却介质 否非关键工艺辅助系统溶剂回收 否非关键工艺辅助系统废水处理 否非关键工艺辅助系统自来水（非工艺用水） 否非关键工艺辅助系统呼吸用空气 否非关键工艺辅助系统设备用空气 是关键工艺系统氮气和其它工艺气体 是关键工艺系统洁净蒸汽 是关键工艺系统工艺用水（PW、WFI） 需要验证重要性类型系统 Slide 87 of 100 过滤器检漏（一） z 设备 气溶胶发生器 DOP（邻苯二甲酸二辛酯） PAO（聚α-烯烃） Slide 88 of 100 过滤器检漏（二） z 工作示意图 压缩气体 PAO发生器 PAO 气溶胶光度计 Slide 89 of 100 过滤器检漏（三） z 效率与穿透率 K＝（1 -α）× 100% K，高效过滤器穿透率 ，% α，高效过滤器效率， % z 穿透率合格标准 高效过滤器穿透率 亚高效过滤器穿透率 < 0.01 % < 5.00 % Slide 90 of 100 补充： 生物安全柜的使用 z 背景 Ⅱ级或Ⅲ级BSC，着正压 服，双开门灭菌器，空气 过滤 在3级水平上，增加气锁 出入口淋浴和污染物品特 殊处理程序 最高防护实验室 – 4级生物安全水平 4 级 BSC和/或其它必须设备在2级水平上，增加特殊 防护服，控制人员进入和 气流方向 防护实验室 – 3级 生物安全水平 3 级 开放实验台，并用BSC防 护可能生成的气溶胶 GMT，防护服，生物危害 标志 基础实验室 – 2级 生物安全水平 2 级 开放实验台普通微生物学操作技术规 范（GMT） 基础实验室 – 1级 生物安全水平 1 级 安全设施实验室操作要求生物安全水平危险度 等级 Slide 91 of 100 补充： 生物安全柜的使用 生物危害警告标志 一级生物安全 实验室 二级生物安全 实验室 Slide 92 of 100 补充： 生物安全柜的使用 生物安全柜的作用 z 生物安全柜的设计目的 Ê保护操作者、实验对象和实验室环境免受污染 z 污染物的类型 Ê气溶胶和溅出物 z 生物安全柜的改进 z 超净工作台不属于生物安全柜 Slide 93 of 100 补充： 生物安全柜的使用 Ⅰ级生物安全柜 侧视图 室内空气 潜在污染空气 过滤后洁净空气 z Ⅰ级生物安全柜 Ê 优点：为人员和环境提供 Ê 不足：无法有效保护实验对象 AA，，前开口前开口 BB，，窗口窗口 CC，，排风过滤器排风过滤器 DD，，压力排风系统压力排风系统 Slide 94 of 100 补充： 生物安全柜的使用 Slide 95 of 100 补充： 生物安全柜的使用 生物安全柜的确认 z 确认频率 Ê 安装时及使用一定时间后 z 生物安全柜的防护效果评估 Ê 安全柜的完整性 Ê HEPA过滤器完整性 Ê 向下气流速度 Ê 正面气流速度 Ê 负压/换气次数 Ê 烟雾试验 Ê 警报及互锁系统测试 Ê 漏电性（可选） Ê 光照度（可选） Ê 噪声与振动性（可选） Slide 96 of 100 补充： 生物安全柜的使用 生物安全柜的现场必测项目 z 规范要求 Ê GB 50346-2004 生物安全实验室建筑技术规范 照度6 噪声5 工作区洁净度4 工作窗口气流平均速度3 工作窗口气流流向2 垂直气流平均速度1 项目序号 Slide 97 of 100 补充： 生物安全柜的使用 生物安全柜的其它性能要求 ‹柜体防泄漏 ‹振动 ‹交叉污染防护 ‹集液槽泄漏 Slide 98 of 100 补充： 生物安全柜的使用 生物安全柜的正确使用 Ê 柜体位置 Ê 正确操作 Ê 物品放置 Ê 减少明火使用 Ê 清洁和消毒 Ê 制定完善的操作规程 z 需注意以下事项 Slide 99 of 100 补充： 生物安全柜的使用 清除生物安全柜的污染 z 操作区外表面 Ê适当的消毒方法及紫外线照射 z 内部管道与排风过滤器 Ê使用熏蒸法 Ê熏蒸剂的选择 Ê熏蒸浓度与时间 Ê频率 Slide 100 of 100 生物安全柜的有关规范 z 国际规范 ÊNSF 49:2002 Class II (laminar flow) Biosafety Cabinetry ÊBS EN12469: 2000 Biotechnology - Performance criteria for microbiological safety cabinets z 中华人民共和国医药行业标准 ÊYY0569-2005 生物安全柜