中国汉族健康男性细胞色素P450酶2C19遗传多态性对艾司西酞普兰在人体内代谢的影响

CbinJ ClinPharmacoI 33 V01．23No．1Jan．2007(SerialNo．105) 中国汉族健康男性细胞色挪。酶2C19遗传猕陛圆 对艾司西酞普兰在人体内代谢的影响 Relationshipbetweenpolymorphism pharmacokineticsofescitalopramin 杨琴，司天梅，舒 良 (北京大学精神卫生研究所，北京100083) YANGQin，SITian—mei， SHULiang (InstituteofMentalHealth，PekingU- niversity，Bering100083，China) 收稿日期：2005—06—03 修回日期：2006—07—14 作者简介：杨琴(1979一)，女，硕士研究生，主 要从事精神药理学研究 通讯作者：司天梅，研究员 Tel：(olo)82801948 E—mail：si．tian—mei@163．com ofcytochromeP4502C19and Chinesehealthyvolunteers 摘要：目的评价中国汉族健康男性志愿者细胞色素P450(CYP450)2C19遗 传多态性对艾司西酞普兰(抗抑郁症和惊恐障碍药)在人体内代谢的影响。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 16名志愿者单次口服艾司西酞普兰后，用PCR一测序法测定其 CYP2C19基因的基因型，即野生基因型(木1／。1)含有1个突变基因组({ 1／木2或木1／{3)及含有2个突变基因组(％2／％2，}3／％3或木2／宰3)。 用高效液相色谱一荧光检测法测定其血药浓度。比较艾司西酞普兰在 CYP2C19不同基因型代谢的差异。结果随突变基因数目增多，血浆艾司 西酞普兰AUC显著升高(P<0．01)，CLs显著降低(P<0．01)。CLs、AUC。一。 及AUC。一。的差异在3组间表现出基因剂量效应倾向。结论CYP2C19遗 传多态性是影响艾司西酞普兰药物代谢的重要因素。 关键词：艾司西酞普兰；药代动力学；细胞色素P4502C19；多态性；高效液相 色谱一荧光 中图分类号：R969．1；R319；R971．43文献标识码：A 文章编号：1001—6821(2007)01—0033—04 Abstract：ObjectiveToevaluatetherelationshipbetweencytochrome P4502C19genotypeandpharmacokineticsofeseitalopraminhealthy youngChinesemalesubjects．MethodsAsingledoseofescitalopram wasadministeredtosixteenvolunteers．Genotypesofthesesubjectswere determinedbyPCR—basedsequencing．Theplasmaconcentrationsofes— citalopramweredeterminedbyhigh——performanceliquidchromatograph (HPLC)withfluorescent—detection．Thepharmaeokineticparameters wereobservedamongthreegroups：widetype(genotypeis木1／木1)， genotypeswithonemutantgene(genotypesare木1／水2and：l：1／半3) andgenotypeswithtwomutantgene(genotypesare：lc2／：l：2，木3／木3 and水2／木3、．ResultsTheareaundertheplasmaconcentrationver- SUStimecurve(AUC)ofescitalopramincreasedwiththenumberofmu- tantgenes(P<0．01)．Theclearance(CL。)ofescitalopramdecreased withthenumberofmutantgenes(P<0．01)．ThedifferenceaboutAUC， CL。representedatendencyofeffectinthegenedosagebetweendifferent genotypes．ConclusionThestudyprovidedevidencethatgeneticpoly- morphismofCYP2C19hadveryimportantcontributiontothepharmaco— kineticsofescitalopram． Keywords：escitalopram；pharmacokinetics；CYP4502C19；polymor- phism；HPLC—fluorescent 万方数据 中国临床药理学杂志 第23卷第1期2007年1月(总第105期) 西酞普兰(escitalopram)是选择性5一羟色胺再摄 取抑制剂(selectiveserotoninreuptakeinhibitor，SS— RI)，而艾司西酞普兰是西酞普兰(citalopram)外消旋 盐s一对映异构体(S—enantiomers)⋯。HyttelJ等嵋。 研究发现，西酞普兰的药理活性主要由其S一对映异 构体实现，R一异构体几乎没有作用。2001年，此药 首次在瑞典和瑞士被许可上市；现已在欧盟和美国上 市，主要用于治疗抑郁症和惊恐障碍；其正在申请进 入我国市场。研究显示uj，艾司西酞普兰呈线性药代 动力学特征，其主要通过肝脏代谢，经去甲基化和双 去甲基化作用，产生2个无临床效应的代谢产物，即S 一去甲基西酞普兰(S—DCT)和S一双去甲基西酞普 兰(S—DDCT)。代谢艾司西酞普兰的肝药酶主要为 CYP2C19。CYP3A4和CYP2D6也参与了其代谢，但 影响程度较小¨。3J。本研究旨在了解中国汉族健康 男性志愿者单次口服艾．司西酞普兰后体内药代动力 学特征及与受试者CYP2C19基因多态性之间的关 系，为临床合理化用药提供依据。 材料、对象与方法 1受试者选择 16名中国汉族男性健康志愿者，年龄：18—45 岁，体质量指数在19—29kg·m一，受试者经筛查，均 身体健康；在受试前2周，未服任何药物。均签署知 情同意书。经本单位伦理委员会批准。 2药品、试剂及仪器 艾司西酞普兰(商品名：来士普)，规格：每片5，10 mg，批号：2008353，1009695，为丹麦灵北制药公司生 产。片剂装在不透明胶囊内，每个胶囊内装研究药物 2片，以保证盲态(10mg组，20mg组分别为每片5，10 mg)。 DNA抽提纯化试剂盒，由上海华舜生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 有限 公司提供；PCR反应的Taq酶、10×缓冲液、dNTP、 DNA片段长度 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 物，由北京鼎国生物技术发展公司 提供；PCR引物，由北京奥科生物技术有限 责任 安全质量包保责任状安全管理目标责任状8安全事故责任追究制幼儿园安全责任状占有损害赔偿请求权 公司 合成。 高效液相色谱仪，日本岛津公司产品。 3血 样本 保单样本pdf木马病毒样本下载上虞风机样本下载直线导轨样本下载电脑病毒样本下载 采集 用随机双盲试验。16名受试者经禁食12h后， 早晨8：00空腹单次口服艾司西酞普兰药物(10mg及 20mg剂量组，各8人，入组随机)。 在服药前即刻及服药后1，2，3，4，6，8，12，16，24， 30，48，72，96，120和144h抽取静脉血各5mL，于肝 素抗凝的离心管中，经2000r·min。1离心10min，取 其血浆，保存于一20℃冰箱中，直至分析。 4基因组DNA提取 在给药前即刻，取外周静脉血3mL，置于EDTA 抗凝管中，一20℃保存，用基因组DNA抽提纯化试剂 盒提取基因组DNA；定量后分装，一20℃保存。 5基因型检测 用PCR一测序方法，测定被试CYP2C19基因型。 5．1 cYP2C19：l=2突变位点 PCR扩增引物如下。 上游：5’一TCATCTITllG棚’CTCTFGTCAGAA一37 下游：5’一CAAGCATI"ACTCCTrGACCTGTI"一3 7 反应条件95℃预变性5min；95oC变性30S， 54℃退火40S，72℃延伸30S，共40个循环；72。C 后延伸10min。CYP2C19珠2测序引物如下。 57一CAAGCATYACTCCTTGACCTGTT一3 5．2 CYP2C19丰3突变位点 扩增引物如下。上游：5’一ATGCATGCCAAACTC唧一37 下游：57一AAGACTCCAAAGTGCCTGGA一3 7 反应条件95℃预变性5min；95℃变性30S， 59℃退火40S，72℃延伸30S，共35个循环；72℃ 后延伸10min。CYP2C19木3测序引物如下。 57一TGCTITr^AGGGAATTCATAGG一3’ 测序工作由北京华大中生科技发展有限公司完 成。 6药代动力学分析 用高效液相色谱一荧光检测法测定血药浓度。 HypersilC18柱(5斗m，200mm×4．6mm，大连依利特 EC2000色谱数据处理工作站)；流量：1mL·min～； 激发波长：250nm，发射波长：310nm；艾司西酞普兰 最低检测浓度为1ng·mL～；方法回收率和精密度 均符合要求。 7统计学处理 用31：97程序按二室模型计算药代动力学参数。 t。。和c。。用实测值，AUC。～。用梯形法计算，用SPSS 10．0软件分析，不同基因型组间药代参数的比较用秩 和检验。代谢产物S—DCT及S—DDCT在一些样本 中检测不到，故未纳入分析。 结果 1 基因型 由于CYP2C19术2和CYP2C19术3几乎可以解释 东方人群细胞色素P450同功酶2C19慢代谢型中 万方数据 Chind ClinPharmacoI 35 V01．23No．1Jan．2007(SerialNo．105) 100％的遗传缺陷HJ。故本研究根据其是否携带 CYP2C19；I：2和CYP2C19水3等位基因，将受试者分 为3组：携带2个野生等位基因(wide—type)者(基因 型木1／半1)；携带1个正常基因和1个突变基因者 (基因型冰1／水2或木1／木3)；携带2个突变等位基 因者(基因型：}：2／球2，米3／：l：3或术2／木3)。 16名受试者中，野生基因型组(术1／术1)4人；含 有1个突变基因组(其中：术1／术2为6人，木1／木3 为1人)7人；含有2个突变基因组(其中：：l=2／米2为 2人，半2／术3为3人)5人。未发现基因型为术3／木3 的个体。 细胞色素P450同功酶2C19在人群中，代谢5一 美芬妥因的能力不同，这是由CYP2C19不同基因型 决定的。根据研究提示，快代谢型(extensivemetaboli- zers，EM)基因型为：l：1／：l=1，：l=1／术2或木1／：Ic3；慢 代谢型(poormetabolizers，PM)基因型为：l：2／术2，术 3／串3或：}：2／术3。 2血药浓度一时间曲线 将艾司西酞普兰10，20mg时的血药浓度用剂量 进行校正为单位剂量浓度：¨g·(L·mg)～。剂量校 正后，野生基因型组、含1个突变基因的基因型组及 ·含2个突变基因的基因型组平均血药浓度一时间曲 线见图。 3药代动力学参数 将艾司西酞普兰10，20mg时的药代动力学参数 C。。、AUC¨、AUC。一。分别校正为单位剂量(即1mg 剂量)的G。。[单位：“g·(L·mg)。1]、AUC。一。[单位： Ixg·h·(L·mg)。1][51。CYP2C193个基因型组受 试者的艾司西酞普兰药代动力学数据见表。如表显 示，含有1个突变基因组艾司西酞普兰的CL。、t。。、单 位剂量的C一、和AUC¨及AUC。一。位于野生基因型 组及含有2个突变基因组之间秩和检验结果显示，艾 司西酞普兰的单位剂量AUC¨及AUC。一。、CLs在野 生基因型组与含有1个突变基因组与含有2个突变 基因组之间差异有非常显著性(P<0．01)；V／F。在野 生基因型组与含有1个突变基因组之间差异有显著 性(P<0．05)；t∽。在含有1个突变基因组与含有2个 突变基因组之问差异有非常显著性(P<0．01)。t。。、 单位剂量C。。，在3组无统计学差异(P>0．05)。 0 12 24 3648 6072 84 96108120132144 t／h Figure．Meanconcentration—timecurvesofescitalopramindifferent CYP2C19genotypes(meB／l士SD) Table．PharmacokineticparametersofescitalopramindifferentCYP2C19genotypesaftersingledoseofescitalopram mean士SD；Wide—typesubject：女1／$1genotype；Subjectwith1 mumntgene：{1／}2and$1／}3genotypes；Subjectwith2mutantgene：$2／}2and} 2／}3genotypes；}1／{1genotypecomparewith}1／}2and％1／}3genotypes，+P<0．05，’+P<0．01；}1／}2and}1／}3genotypescompare with}2／}2and女2／％3genotypes．△△P<0．01 讨 论 艾司西酞普兰是目前选择性最强的SSR!类药 物帕J。体外研究表明一J，CYP2C19、CYP3A4和 CYP2D63个细胞色素P450同功酶共同参与了艾司 西酞普兰向其初级代谢产物S—DCT的转化，然后 CYP2D6单独参与了S—DCT转化为次级代谢产物．s —DDCT的过程。GutierrezMM等¨。研究发现， CYP3A4抑制剂利托那韦(fitonavir)与艾司西酞普兰 合用，并不影响艾司西酞普兰的代谢。YuBN等Ho研 究发现，CYP2C19慢代谢者的西酞普兰代谢明显较快 代谢组慢；合用CYP3A4抑制剂醋竹桃霉素后，对 CYP2C19快代谢者的西酞普兰代谢无影响，而对慢代 谢者有抑制。HerrlinK等¨圳研究显示，CYP2C19慢 代谢者血浆艾司西酞普兰水平明显升高，而CYP2D6 慢代谢者中未发现此现象；CYP2D6慢代谢者|s—DCT 2 1 O I_^∞争1)．矗II，Ⅱ。一_昌首Q。目。u 万方数据 36 中国临床药理学杂志 第23卷第1期2007年1月(总第105期) 代谢减慢。据此推测，代谢艾司西酞普兰的酶主要是 CYP2C19；而CYP3A4和CYP2D6所起作用较小。故 本研究主要探讨CYP2C19基因型对艾司西酞普兰代 谢的影响。 研究显示H1，亚洲人中CYP2C19的PM发生率高 达13％～23％，远高于高加索人群(2％一5％)；而 CYP2C19木2和木32种突变可解释，大于99％东方 人弱代谢者的等位基因以及约88％白种人弱代谢者 的等位基因。在本研究16例样本中，水2等位基因频 率为40．6％，木3等位基因频率为12．5％，由于样本 量较小，不能代表整个人群的基因型频率的分布，但 可以看出突变等位基因的比例是偏高的。 已有研究证实0113，CYP2C19酶活性的基因剂量 效应，即酶对药物代谢的能力，随等位基因的不同组 合，而呈现出一定的规律性，表现为野生基因型者 (木1／木1)>含1个突变基因的基因型者(木1／水2 或木1／术3)>含2个突变基因的基因型者(木2／水 2、：l：3／木3或：l：2／：lc3)的变化趋势。YUBN等一。研 究提示，CYP2C19在西酞普兰的代谢过程中的基因剂 量效应，研究中发现，含有1个突变基因组艾司西酞 普兰的CL小t。。、C。。、AUC位于野生基因型组及含有 2个突变基因组之间。单位剂量AUC与CL。，野生基 因型与含有1个突变基因组比较、含有1个突变基因 组与含有2个突变基因组比较，均有非常显著性差 异。 本研究结果提示，CYP2C19遗传多态性是影响艾 司西酞普兰代谢的重要因素。艾司西酞普兰代谢在 CYP2C19野生基因型组、含1个突变基因的基因型组 及含2个突变基因的基因型组之间表现出一定的基 因剂量效应倾向。考虑到疗效、药物不良反应与药代 动力学的密切关系，了解CYP2C19遗传多态性对艾 司西酞普兰药物代谢的影响，将有助于指导临床个体 化用药。 参考文献： [1]SogaardB，MengelH，RaoN，eta1．Tthepharmacokineticsofescitalo— pramafteroralandintravenousadministrationofsingleandmultipledo- sestohealthysubjects[J]．JClinPhatmaxml，2005：45：1400—1406． [2]HyttelJ，BogesoKP，PerregaardJ，eta1．Thepharmacologicaleffectof citalopramresidesinthe(S)一(+)一enantiomer[J]．JNeural TransmGenSect，1992；88：157—160． [3]SanchezC，BrennumL．TheS—enantiomerofcitalopram(Lu26— 054)isahighlyselectiveandpotentserotoninreuptakeinhibitor[J]． BiolPsychiatry，2000；47：885． [4]deMoraisSM，WilkinsonGR，BlaisdellJ，eta1．Themajorgenetic defectresponsibleforthepolymorphismofS—mephenytoinmetabolism inhumans[J]．JBiolChem，1994；269：15419—15422． [5]陈丽霞，王志纲，王传跃，等．抑郁症患者细胞色素P4502C19基因 型对阿米替林血药浓度及其去甲基代谢的影响[J]．中国神经精神 疾病杂志，2005；31：33—36． [6]HyttelJ．Pharmacologicalcharacterizationofselectivesemtoninre- uptakeinhibitor(SSRIs)[J]．IntClinPsychotyarmacol，1994；9 (Suppl．1)：S19一$26． [7]VanMohkeLL，GreenblattDJ，GiancarloGM，eta1．Escitalopram(S —-citalopram)anditsmetabolitesinvitro：Cytochromesmediatingbio·- transformation，inhibitoryeffects，andcomparisontoR—citalopram [J]．Dr昭MetabDispos，2001；29：1102—1109． [8]GutierrezMM，RosenbergJ，AbramowitzW．AnevaluationofthePO— tenfialforpharmacokineticinteractionbetweenescitalopramandthecy— tochromeP4503A4inhibitorritonavir[J]．ClinTher，2003；25： 1200—1210． [9]YuBN，ChenGL，HeN，eta1．Pharmacokineticsofcitalopraminre- lationtogeneticpolyraorphismofCYP2C19[J]．DrugMetabDispos， 2003；31：1255—1259． [10]HerrlinK，Yasui—FumkoriN，TybringG，eta1．Metabolismofeita- lopramenantiomeminCYP2C19／CYP2D6phenotypedpanelsof healthySwedes[J]．研JClinPharmacol，2003；56：415—421． [11]周宏灏．遗传药理学[M]．北京：科学出版社，2001：3—122． 万方数据 中国汉族健康男性细胞色素P450酶2C19遗传多态性对艾司西 酞普兰在人体内代谢的影响 作者： 杨琴， 司天梅， 舒良， YANG Qin， SI Tian-mei， SHU Liang 作者单位： 北京大学,精神卫生研究所,北京,100083 刊名： 中国临床药理学杂志 英文刊名： THE CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACOLOGY 年，卷(期)： 2007,23(1) 被引用次数： 2次 参考文献(11条) 1.Yu BN;Chen GL;He N Pharmacokinetics of citalopram in relation to genetic polymaorphism of CYP2C19 2003 2.Gutierrez MM;Rosenberg J;Abramowitz W An evaluation of the potential for pharmacokinetic interaction between escitalopram and the cytochrome P450 3A4 inhibitor ritonavir[外文期刊] 2003(4) 3.Von Moltke LL;Greenblatt DJ;Giancarlo GM Escitalopram (S-citalopram) and its metabolites in vitro:Cytochromes mediating biotransformation,inhibitory effects,and comparison to R-citalopram[外文 期刊] 2001(8) 4.Hyttel J Pharmacological characterization of selective serotonin reuptake inhibitor (SSRIs) 1994(z1) 5.陈丽霞;王志纲;王传跃 抑郁症患者细胞色素P4502C19基因型对阿米替林血药浓度及其去甲基代谢的影响[期刊论 文]-中国神经精神疾病杂志 2005(1) 6.de Morais SM;Wilkinson GR;Blaisdell J The major genetic defect responsible for the polymorphism of S-mephenytoin metabolism in humans 1994 7.周宏灏 遗传药理学 2001 8.Herrlin K;Yasui -Furukori N;Tybring G Metabolism of citalopram enantiomers in CYP2C19/CYP2D6 phenotyped panels of healthy Swedes[外文期刊] 2003 9.Sanchez C;Brennum L The S-enantiomer of citalopram (Lu 26 -054) is a highly selective and potent serotonin reuptake inhibitor 2000 10.Hyttel J;Bogeso KP;Perregaard J The pharmacological effect of citalopram resides in the (S)-(+)- enantiomer 1992 11.Sogaard B;Mengel H;Rao N Tthe pharmacokineties of escitalopram after oral and intravenous administration of single and multiple doses to healthy subjects 2005 引证文献(2条) 1.张志贤.常福厚 细胞色素P450 2C19基因多态性研究进展[期刊论文]-中国公共卫生 2010(3) 2.司天梅.邱健文.刘薏.孙丽丽.苏允爱.郭春梅.张鸿燕.舒良 健康人单次口服不同剂量依地普仑片的药动学[期刊 论文]-中国新药杂志 2008(9) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zglcylxzz200701009.aspx