血凝和血凝抑制试验
一、血凝原理:
正粘病毒(流感)和副粘病毒(新城疫)病毒等有血凝素,能够使家禽的红细胞凝集。
二、抗体监测原理:
血凝抑制(HI)试验。抗体监测。利用抗体来中和病毒使血凝能力不断下降。
三、凝和不凝的判断。病毒与家禽的(有核)红细胞结合后产生凝集,红细胞带上电荷相互排斥而在一定时间内(大于半小时)不沉淀。一般的细胞则在重力的作用下沉淀下去,是为不凝集。(最后都沉)
四、血凝的判断:以完全不沉为凝集。半沉半凝集不算。(即沉的是不凝,不沉的是凝)
五、血凝试验的作用:1、判断有无病毒。2、疫苗的凝集价。
六、对血细胞要求:SPF鸡血最好,健康未免疫鸡次之,免疫健康鸡最差(大量用),病鸡坚决不用。大量使用的免疫健康鸡血应多洗几遍。
七、采血洗血步骤:
1、取无菌10ml注射器加入5%枸橼酸钠(防凝血)。
2、垂直或水平采血。
3、将血放入离心管,放入离心机中,加另一全是水的起平衡作用的离心管,使离心机从0逐渐加到1500~2000转,10 ~15分钟,停机,取出离心管,用吸管吸取上清液及一层薄薄的白细胞再加生理盐水,再离心,多次离心,(将细胞可能因免疫所致的影响降低)。最后将红细胞配成0.5 ~1%备用。
八、血凝试验:
在96(8×12)孔微量板上以1~2排(8~2×8个)为单位,用微量移液器每孔加50微升生理盐水,在每组的第一孔加50微升待测液体,然后向后倍比稀释,弃去最后一滴于盛废液的容器中。再每孔中加入配好的红细胞悬液50微升,在振荡器上作用2分钟。置室温下,大约30-40分钟时看一下结果。注意设对照。
以彻底不沉为凝集,数数即可。利用此结果进行稀释标准抗原至4个病毒单位(注意体积换算)以备抗体监测之用。抗体监测与血凝试验刚好是反着的。
九、血凝抑制试验:
1、采血制血清:
2、抗体监测步骤:
⑴、在96孔板上每孔加入50微升生理盐水
⑵、在第一孔加入待测血清或卵黄液,倍比稀释弃去最后一滴
⑶、加入4单位的标准抗原或相近品
⑷、各加入50微升配好的红细胞悬液
⑸、振荡2分钟置室温下作用30-40分钟。
从左始,以完全沉淀为准计数,即2的几次方。。同时要做对照。
3、血凝抑制试验结果判断:以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的HI
滴度。2 的4次方以下,抗体水平低,2的5次方到2的十次方可以.小鸡可5或6,但大鸡不行,就是该做苗了。如果数相差大,如2的3次方与2的11次方同在,就有可能是野毒感染了。若出现2的11次方或以上时,说明鸡群已发生新城疫强毒的感染。
普德药业内部资料0311-********
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