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siRNA和质粒转染有何区别

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siRNA和质粒转染有何区别请问各位:siRNA和质粒转染有何区别, 我最近在做siRNA使某个基因沉默,用的是santa的商业合成的siRNA,我导师想让我做质粒转染,我不知道这两者有何区别,目的不都是沉默某个基因表达吗, 请各位指教 一、 转染是一种实验手段,就是把核酸转移进入细胞,sRNAi是把小RNA转染进入细胞,通常说的转染是将质粒转移进入细胞,只不过两者目的不同,sRNAi目的是沉默基因,通常说的转染是表达蛋白。 二、 你可以直接转入合成的sRNAi片段,其实最初的sRNAi技术就是这么做的。但是这样的效率不高,且不够...

siRNA和质粒转染有何区别
请问各位:siRNA和质粒转染有何区别, 我最近在做siRNA使某个基因沉默,用的是santa的商业合成的siRNA,我导师想让我做质粒转染,我不知道这两者有何区别,目的不都是沉默某个基因表达吗, 请各位指教 一、 转染是一种实验手段,就是把核酸转移进入细胞,sRNAi是把小RNA转染进入细胞,通常说的转染是将质粒转移进入细胞,只不过两者目的不同,sRNAi目的是沉默基因,通常说的转染是表达蛋白。 二、 你可以直接转入合成的sRNAi片段,其实最初的sRNAi技术就是这么做的。但是这样的效率不高,且不够稳定。重复性差。条件苛刻,也就是不容易做好。 2、将sRNAi片段插入适当的质粒基因组中,让质粒将它带入靶细胞,因为质粒可以自行复制,入细胞后可以复制、表达自己基因组中的基因(包括插入的sRNAi),这样就可以使细胞内的sRNAi片段多起来,达到发挥作用的浓度。(虽然这个浓度不 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 很高,但这种方式肯定比直接转染sRNAi片段多,且有效。) 3、将你的sRNAi连上质粒基因组后转进去表达(利用的这个质粒叫:载体),是长久还是瞬时,这要取决于质粒(载体)。严格的说除了立逆转录病毒载体,其他的都是瞬时的表达,细胞传代后均有可能消失。当做也不排除有较稳定的(在选择压力下,比如新霉素抗性等,或者营养依赖,选择等)。 4、利用质粒进行sRNAi,因为质粒上可能有标记,便于检测你的效果。 三 商业合成的siRNA是用化学 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 直接合成的,通常就是一对大概23bp的双链RNA,它可以在细胞内诱导接连成小RNA 即我们常说的沉默RNA,用于直接沉默目的基因的转录体,迅速高效但是沉默时间是瞬时的,而用质粒载体时,需要构建表达载体,载体上选择合适的启动子,报告基因 和有效的沉默序列是必要的。表达载体一般能在细胞内或体内稳定存留一段时间。可以稳定表达沉默片段,从而达到沉默基因的目的。 四、 一个是RNA一个是DNA, sirna的 功能是有一定时限的,不可能长时间 时限沉默功能,而质粒转然之后 只要不出现质粒丢失现象是可以长时间实现功能的,另外 他们两个的转染试剂可能也不同,一般 siRNA有专门的 特异性转染试剂,目的是为了实现更高的转染效率 五、 用siRNA 就只能做到瞬时干扰掉靶基因, 没做一次实验都要干扰一次 但是不能保证你每次的干扰效率都比较好 所以就做后续的实验就比较麻烦,而用shRNA 也就是构建到载体中的siRNA就可以用来构建稳定株 做后续实验也会方便稳定些 并且做的实验的范围就会更广些,比如用来包装病毒然后做动物实验啊 等等 这就要根据你的后续实验需要了
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分类:企业经营
上传时间:2017-09-02
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