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不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究.doc

不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究

zan桂 2017-11-18 评分 0 浏览量 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究doc》,可适用于高等教育领域,主题内容包含不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究ValueEngineering譬娜不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究StudyontheSmil符等。

不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究ValueEngineering譬娜不同苦瓜种子可溶性蛋白的研究StudyontheSmilaritiesandDifferencesofDifferentVarietiesofBitterGourdSeedsSolubleProteinComponent聂静NieJing(中电投远达环保工程有限公司,重庆)(CPIYuandaEnvironmentalprotectionEngineeringCo,Ltd,Chongqing,China)摘要:苦瓜(MomordicacharantiaL)具有食用和药用的双重价值而苦瓜种子所含的可溶性蛋白组分(一类统称为苦瓜子核糖体失活蛋白)则具有及其重要而广泛的药用价值,在防治爱滋等病毒感染和治疗恶性肿瘤方面有望戍为一种难得的新型药物为了探知不同品种苦瓜种子可溶性蛋白组分的的异同,为新药原料选择提供理论依据,配合苦瓜种子资源开发,而采用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺电泳法(SDSPAGE),对五个品种苦瓜(鑫源牌长白苦瓜,飞龙一号长白苦瓜,李氏牌长白苦瓜,钰禾牌翠绿苦瓜和渝特牌大青苦瓜)种子的可溶性蛋白组分进行了分析,比较及提取溶弃J的优选研究实验结果表明:实验采用的五个品种或品牌苦瓜种子样品,在可溶性蛋白组成方面品种有一定的特异性,除都含有KD,KD,KD,KD,KD和KD蛋白外,在大青苦瓜与翠绿苦瓜中还存在有一种KD蛋白(其它三种长白苦瓜未见此蛋白)在组分含量方面也具有品种或品牌差异性,几个品牌的长白苦瓜KD与KD的蛋白质含量均较少,但KD和,KD蛋白的含量却比翠绿苦瓜和大青苦瓜高因此,在有关苦瓜种子蛋白研究和新药开发时应重视品种或品牌的选择实验结果还显示:PBS缓冲液的提取对蛋白质的损害最小,可以作为首选提取溶剂乙酸溶液的提取对蛋白质的损害最大,不宜选用氯化钠溶液居中Abstract:Bittergourd(MomordicacharantiaL)havebothedibleandmedicinalvaluesAsolubleproteincomponents(onecategoryofthemreferredasribosomeinactivatingproteinsofMomordicacharantiaL,RIPs)containedinbittergourd'sseedshaveextremelyimportantandextensivemedicinalvalue,InthefightagainstAIDSandotherviralinfectionsandthetreatmentofmalignancy,itisexpectedtobecomeavaluablenewdrugsToexplorethesimilaritiesanddifferencesofdifferentvarietiesofbittergourdseedssolubleproteincomponent,andtoprovideatheoreticalbasisforthechoiceofrawmaterialfornewdrugs,withbittergourdseedsresourcesdevelopment,Thistaskusingsodiumdodecylsulfatepolyacrylamideelectrophoresis(SDSPAGE)toanalyseandcomparethesolubleproteincomponentsoffivevarietiesofbittergourdseed,andstudythedifferentextractants"effectsTheresultsshowed:thefivevarietiesofseedsamplesusingintheexperimenthavespecificspeciesinbittersolubleproteincomposition,allofthemhaveKD,KD,KD,KD,KDhaveKDproteinsbesidesaKDproteinwasfoundinbiggreenhittergourdandgreenbittergourd,butdidn'texistinthethreelongwhitebittergourdsThecomponentcontenthavedifferencewithvarietiesorbrandstooThelongwhitebittergourdshavelessKDandKDproteins,buttheKDandKDproteinsismorethangreenandbiggreenbittergourdsbecauseofthis,whenyoudothestudiesofbittergourdseeds,ordevelopnewmedichines,youmustselectthebrandandvarietiesTheresultsalsoshowed:PBSbufferhavethesmallestdamagetotheproteins,asthepreferredsolventextractionAceticacidhavethegreatestdamageinallthethreekindsextractinonoftheprotein,andshouldnottouseNaCsolutionisinmediacy关键词:苦瓜种子品种可溶性蛋白SDSPAGE提取溶剂比较研究Keywords:BittergourdsseedvarietysolubleproteinSDSPAGE:extractantcomparisonstudy中图分类号:TQ文献标识码:A文章编号:l()O引言苦瓜(MomordicacharantiaL)具有食用和药用的双重价值主要含一些皂苷类和蛋白多肽类苦瓜皂甙降低血糖,苦瓜子甙A,MomordinI抗肿瘤,苦瓜汁具有致突变性,免疫调节及广谱抗菌作用此外还有番茄红素等多种类胡萝卜素,一些糖类化合物,单萜化合物及钙,铁等无机物…近年来,人们已从苦瓜中分离到多种药用成分,其中最具有代作者简介:聂静(一),女,重庆忠县人,学士学位,主要研究方向为烟气脱硫,二氧化碳捕集技术,中药有效部位的提取分离及检测技术,中药新药研究表性的可溶性蛋白质是苦瓜子核糖体失活蛋白(ribosomeinactivatingprotein,RIP),这些蛋白成分具有抗突变,抗肿瘤,抗病毒和抗艾滋病等功能,因而引起了人们广泛的关注研究者先后从苦瓜中分离到多种核糖体失活蛋白,包括苦瓜抑制剂(Momordicacharantiainhibitor,MCI),苦瓜凝集素(Momordicacharantialectin,MCL),一苦瓜素(Momorcharin),B一苦瓜素(Momorcharin),一苦瓜素(",Momoreharin),一苦瓜素(一Momorcharin),MAP(momordicaantiHIVproteinofKD)等其中MCI,MCL,d一苦瓜素,B一苦瓜素等的分子量均在KD左右,是碱性的糖蛋白苦瓜RIP的研究无论在理论上,还是在应用开发上都有重要意步灯,检修用灯以及转弯指示灯等也都是根据驾驶员的不同需要而设计的视野为保证驾驶人员有尽可能宽广的视野,前支柱(A柱),中央支柱(B柱)和后支柱(c柱)的粗细及位置很重要设计上,必须根据驾驶员的眼椭圆范围确定风窗玻璃刮扫面积和部位,并在满足翻车安全保障和前窗振动抑制要求的前提下,以最细的支柱来减小视野死角提供后视野的后视镜也要保证驾驶员有足够的后视范围FIAT公司的MULTIPLA采用的双片可调式后视镜不仅可以使驾驶员看到车后其它车辆的行驶状况,而且也可观察后车胎与路面的接触情况操纵的稳定性制动踏板和手柄的行程和位置,必须满足一般身材人体的需要,踏板力,手柄等也应适应一般人群,因为这些都对制动性能影响较大据报道,美国有的女性司机由于身材矮小为踩上脚踏板而使身体与方向盘的距离小于cm,当气囊膨胀时,脖子常受到伤害此外,车身总质量大小及轴荷分配,整体转动惯量,车身空气动力学特性,车身重心高度和相关部件冈度等也都对操纵稳定性有一定影响参考文献:fIIR'J东明,孙桂林安全人机工程学【M北京:中国劳动出版社,孟少农汽车设计方法论MI北京:机械工业出版社,『ix田柿浩三汽车设计M北京:机械工业出版社,lt宣,李宏光,赵航,等现代汽车安全M】北京:人民交通出版社,】杨妙梁,薛志红汽车安全系统结构与维修【ME京:中国物资出版社,价值工程义由于苦瓜RIP都有很强的核糖体失活功能,可以用作研究rRNA结构与功能的分子探针目前已发现的I一型RIP均为分子量在KD左右的糖蛋白,而在苦瓜中则发现了同样具有核糖体失活功能的一些小分子RIP,如一苦瓜素,最近Parkash等还从苦瓜的种子中分离到一种分子量为KD的小分子RIP秉charantin,对这些小分子RIP的结构与功能的进一步研究必将丰富人们对RIP的作用机制的认识苦瓜中的MAPIs除了具备核糖体失活功能外,还有一些独特的功能,例如破坏DNA拓扑结构的活性和抑制HIv,整合酶的活性等,对这些活性的分子机理的研究有可能为抗病毒和抗肿瘤提供一种新机制在应用开发上,苦瓜RIP具有多方面的用途,并有广阔的应用前景若将苦瓜RIP与单抗偶联后形成"免疫毒素",不仅利于进入肿瘤组织,还可降低由"弹头"引起的副作用,可以准确地导入肿瘤细胞,高效杀伤靶细胞所以这种嵌合蛋白在骨髓移植,自身免疫缺陷及AIDS等疾病的治疗方面都有着广泛而又有很好的开发前景实验材料及仪器设备仪器JAA型电子天平(上海精天电子仪器有限公司),eppendoff型高速冷冻离心机(上海科析试验仪器厂),eppendoff型lmltxlpA微量取液器及枪头(上海科析试验仪器厂),恒温水浴槽(Constanttemperaturewaterbath)(上海科析试验仪器厂),MiniPROTEANCELL型垂直板型电泳槽(BIORAD),PowerPaoBasic电泳仪(BIORAD),UNIVERSALHOOD紫外凝胶分析系统,其他有:冰箱,药匙,称量纸,研钵,玻璃棒,大小烧杯若干,mlml移液管若干,滴管,PH试纸(PH),镊子等药品和试剂SDS(十二烷基磺酸钠J(北京百星高科技术开发有限公司),Acr(丙烯酰胺)(成都科龙化工试剂厂),Bis(亚甲基双丙烯酰胺)(北京鼎国生物技术有限公司),过硫酸铵(成都科龙化工试剂厂),巯基乙醇,甘油(丙三醇),溴酚蓝(上海三爱思试剂有限公司),考马斯亮蓝R一(中国医药集团上海化学试剂公司),甲醇,冰乙酸(成都金山化学试剂有限公司),氯化钠(重庆北碚化学试剂厂),氯化钾(成都科龙化工试剂厂),磷酸二氢钠(重庆北碚化学试剂厂),磷酸二氢钾(重庆北碚化学试剂厂),磷酸氢二钠(重庆北碚化学试剂厂),蛋白质Marker成分PhosphorylaseKD:AlbuminKDGlutamiedehydrogenaseKD,Glyceraldehyde一phosphatedehydrogenaseKDTrypsinogenKD(北京鼎国生物技术有限责任公司)试剂均为AR实验材料品种,产地,商标,性状如下鑫源牌长白苦瓜(产地湖南,重庆科尔星种子公司出品)飞龙一号长白苦瓜(产地蓝山县,飞龙种子公司出品)大青苦瓜(产地湖南,重庆科尔星公司出(产地河北,青县蔬菜育种中心出品)李氏牌长白苦品)翠绿苦瓜瓜(李氏种业公司出品)长白苦瓜籽壳为浅黄褐色,种皮色青绿翠绿苦瓜粒较大,种皮为白色,略发黄,种壳偏黄:大青苦瓜种壳及种皮色均较前两者为白,粒大小近似长白苦瓜均购自重庆南坪农贸市场集市方法与结果试剂配制PBS缓冲液(pH),磷酸盐缓冲液(,too,L,pH),凝胶缓冲液,TEMED,凝胶贮液,过硫酸铵,样品溶解液,电极缓冲液,染色液,脱色液,均按中国药典配制苦瓜种子可溶性蛋白的提取称取不同品种苦瓜种子各g,分别编号为:#鑫源牌长自苦瓜,#飞龙一号长白苦瓜,#大青苦瓜,甜翠绿苦瓜,样李氏长白苦瓜将五个品种苦瓜种子分别加入mlPBS缓中液,在研钵中研磨提取磨碎后置于环境中过夜浸提弃去沉淀,于ffmin离心min,取上清液,于dmin离心min,取上清液,即得粗提液不同品种苦瓜种子可溶性蛋白的分析运用SDSPAGE法测定不同品种苦瓜子蛋白相对分子质量J目,做垂直板型制胶模具及电泳槽进行实验,其过程为:制胶模具一灌胶一模具安装与加样一电泳一染色,脱色,干燥数据采集:将凝胶干燥后,用直尺测量条带中心与电泳起点的距离,见表迁移率计算:m=dm:条带x的迁移率:d:条带X迁移距离(条带x与电泳起点的距离)染料迂移距离(染料与电泳起表样品电泳条带迁移距离点的距离)染料迁移距离mm见表迂移率对分子质量作图标准曲线在半对数坐标纸上以marker分子量与迁移率作图(纵坐标lgMr为蛋白质相对分子质量对数,横坐标m为分子相对迁移率),得到标准曲线lgMr=m,可通过标准曲线计算得出样品中各种蛋白质的相对分子质量Mr当然也可通过比较它和一系列已知Mr的蛋白质在SDS一凝胶电泳时的迁移率就可以了实验结果表明:实验采用的五个品种或品牌苦瓜(鑫源牌长白苦瓜,飞龙一号长白苦瓜,李氏牌长白苦瓜,翠绿苦瓜和大青苦瓜)种子样品,在可溶性蛋白组成方面品种有一定的特异性,除都含有KD,KD,KD,KD,KD和KD蛋白外,在大青苦瓜与翠绿苦瓜中还存在有一种KD蛋白(其它三种长白苦瓜未见此蛋白)在组分含量方面也具有品种或品牌差异性,几个品牌的长白苦瓜KD与KD的蛋白质含量均较少,但KD和KD蛋白的含量却比翠绿苦瓜和大青苦瓜高小结与讨论关于提取时所用缓冲液,前人已有多种方案,如使用PBS缓冲液,乙酸溶液,磷酸盐缓中液及氯化钠溶液等本实验分别使用PBS缓冲液,OmmolL乙酸溶液与氯化钠溶液抽提,进行SDSPAGE电泳对比,几种缓冲液中,以PBS缓冲液的提取效果最好,对蛋白质的损害也最小乙酸溶液的提取效果最差,对蛋白质的损害最大氯化钠溶液居中本次实验提取的苦瓜子可溶性蛋白,分子质量范围较广,有一部分在以往文献中未曾发现报道如KD,KD,KD,KD,KD数种在以后的研究中可以对这些蛋白质的生物活性进行进一步探讨参考文献:】邓向军,徐斌,董英苦瓜化学成分的研究进展fJ】时珍国医国药,,()【~Lh海燕,胡家恕,汪俏梅苦瓜的核糖体蛋白【JJ,细胞生物学杂志,,():傅明辉苦瓜籽蛋白的分离纯化及其抗氧化活性研究J药物生物技术,,():【】王海仁,孙晓阳,王庆华,等苦瓜凝集素的制备及部分性质的研究fJ】生物化学杂志,()王先远,高兰兴苦瓜提取物MAP抗病毒的研究进展JJ氨基酸和生物资源,,():【GiannopolidCN,RiesSKSuperoxidedimutasesIIPurificationandquantativerelationshipwithwatersolubleproteininseedlingJ】PlantPhysio,,:

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