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[doc] 抗HCV国家参考品的研制.doc

[doc] 抗HCV国家参考品的研制.doc

上传者: 鼹鼠麻麻znx 2017-11-11 评分 5 0 145 20 657 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《[doc] 抗HCV国家参考品的研制doc》,可适用于高等教育领域,主题内容包含doc抗HCV国家参考品的研制抗HCV国家参考品的研制中预防医学杂志OO年月第卷第期ChinPvMed,March,VolNo抗HCV国家参考品的研符等。

doc抗HCV国家参考品的研制抗HCV国家参考品的研制中预防医学杂志OO年月第卷第期ChinPvMed,March,VolNo抗HCV国家参考品的研制周诚郡自拍谷金莲张庶民杨振于洋张华远李河民【特邀专着】【摘要】目的建立新的抗HCV国家参考品,促进国产抗HCV试剂的发展方法从全国各地收集供血员及丙型肝炎病人血样多份,应用多种抗HCVEIA试剂筛选,应用免疫印迹及HCVPCR方法进行确证,并会同家单位进行会同标定结果新参考品由o份抗Itt~V阴性样品及份抗HCV阳性样品组成,阳性样品中有单独某一种抗体阳性的样品,有同时含有某两种抗体的样品,也有同时含有种抗体的样品结论新参考品针对试剂存在的问题及发展方向,对研究开发和筛选高质量的丙肝抗原提供了参考数据,并为国产试剂的质量控制提供了标准【美键词】肝炎酶免疫技术免疫印迹法StudyoilNewNationalR曲PaneforAntiHCWZHOUChe,’g”,Zi一,肺一lian,elolNationallnsmutefor如Corardofpharmaceuticand届删Pnxh~’ts,Bering,China【A】删酬TpreparethemwnationalIempandfor一HCVMethylsOO~,erawerecollecteddetectedwithmore:thanantiHCVEIAkitsandcontlm~tusingRIBAandHCVRNAPCR,deresul协wreco~rmedbyboIaResultsThepanelwasmadeupwithtOantiHCVrgaciand()antiHCVi:x~itivesamplesSomepo~,itivesamplescotltain山曲lgkantiHCVOD~orNSorNSa~aibody,F,OtOeofthemcor怕fnI(irdsantiHCV蛆b击糟ConclusionsTheresultsl】wtheactivity且兀dpmltyofHCVNS舢genusedby~mestk:antiHCVELAkitsshouldbeimproved【wo川slHepa~cVirhm加r呲techtfiquesImmunoblotting丙型肝炎病毒抗体酶联免疫试剂(抗tlCVELA)已被广泛用于血源和血液制品的筛查及丙肝病人的诊断,它的质量直接影响到人民用血的安全和病人的治疗,现在国家规定用抗HC’V国家参考品对抗HCVE】A试剂实行批批检定,国家参考品对试剂质量起若非常关键的作用我国的抗HCVE【A试剂近年来虽有了很大的发展,但与国际先进试剂相比仍有差距为促进国产试剂质量提高,我们经过近年的工作,对大量样品进行多次筛选,多种方法反复确证,以及会同国内外近O家丙肝诊断试剂生产单位会同标定,研制了新的抗一HCV国家参考品材料和方法样品来源:我们从甘肃省,四川省,山东省,河南省,湖北省,广东省,辽宁省等近O个省市皿站和医院收集大约coo份献血员和肝炎病人血浆每份样品的总体积在ml以上,全部为原倍人血浆或血清,保存条件为一o以下冰箱内试剂国产抗HCVE【A诊断试剂:国内有文号的抗基金项目:面象”九重点科技攻关基金资助(作者单位:苹药品生物制品检定所北京HCVEIA试剂,约l种国外抗HCVEIA诊断试剂:ORTHOHCVEIA,MUREXHcvEIAHCVRNAPCR试剂:河南华美公司,北京肝炎试剂中心,深圳匹基公司等单位提供确证试剂:美国CHIRON公司的免疫印迹条法(RIBA)试剂(CHIRONRIBAHCVs【A)l方法从各地收集供血员及丙肝病人血样,应用抗HCVE【A试剂初筛,挑选』临界值附近的样品及抗一HCV阴阳性不易确定的样品对所挑选出的样品重新分装小样,用国内和国外抗HCV试剂进行复检,去掉强阳性和强阴性样品对抗HCVELA试剂检测结果不一致的样品用RIB,试剂和HCVAPcR试剂确证,确定候选样品邀请有关单位对候选样品进行会同标定,召开抗HCVEIA试剂研讨会,通报会同标定结果,并组织第二次会同标定新的抗Hcv国家参考品的组成按照年版《中国生物制品规程》要求,新中国预防医学杂志O年月第卷第l期ChinPMd,MarclIO,VolNo批号参考品仍设置抗HCV阴性样品o份,阳性样品o份其合格标准仍为阳性符合率,阴性符合率,总符合率I表l为O份阳性样品的抗体谱及HCVRNA检测结果同时也给出了o份阳性样品用国外第三代主流试剂(ORTHOHCV,和MUREXHCVO)检测的吸光度A值及阴阳性结果该份样品经确证均为抗HCV阳性,样品的挑选是依据能够控制试剂均衡的检出各种HCV抗体的原则阳性样品中有单独某一种抗体阳性的样品,有同时含有某两种抗体的样品,也有同时含有种抗体的样品襄阳性参考品注:”‘表示REIA检测时废抗体带可疑Core区抗体单独阳性有份,NS区抗体单独阳性样品份,NS区抗体单独阳性样品l份无NS单独阳性样品Core及NS抗体均为阳性样品有份,NS及NS均为阳性样品为l份,NS及NS均为阳性样品为份,Core,NS,NS均为阳性样品份,Core,NS,Ns,NS均为阳性样品份总体来看,O份阳性样品中Core区抗体阳性有份占NS区抗体阳性样品份占NS区抗体阳性样品份占NS区抗体阳性有份,占该百分率较接近人群中抗rtCV各种抗体比例,其中NS区抗体的比例略高,这主要是考虑到目前国产试剂对NS区抗体的检出力度不够,因而有意识加强控制力度rthoHCVEL,MUREXHCVEIA试剂检测该o份阳性样品,各有l份检测为阴性OrthoHCVEIA检测P样品为阴性,该样品HCV核心抗体阳性,HCVRNA检测为阳性,国内试剂检测均为阳性,应为阳性样品,这与我们以前所发现的该试剂对单独HCV核心抗体阳性样品容易漏检是一致的|I,MUllL~HCVEn检测P样品为阴性,该样品HcvNS抗体阳性,OrthoHCVEIA检测为阳性,国内试剂检测均为阳性,应为阳性样品份阴性样品均为国产试剂检测A值较高的样品,经Ordvo及Murex检测均为阴性,对国产试剂检测较多出现假阳性结果的样品经ChitonHCVRIBA检测均为阴性同时对部分样品应用两种HCVPCR试剂检测,结果均为阴性(详细结果省略)会同标定及结果分析第一次会同标定结果:为复核我们检测的结果,同时也为了解国产试剂的灵敏度和特异性,我们邀请全国丙肝抗体检测试剂盒生产单位进行了第一次会同标定,共收到份报告,结果见表o份阳性样品检测结果为:家国外试剂阳性符合率均为国产试剂为,,仅有家达到合格标准o份阴性样品检测结果为:家国外试剂阴性符合率均为,国产试剂为,有家试剂达到合格标准总符合率目产试剂为,按照年版《中国生物制品规程》要求,达到要求的国产试剂生产单位仅有家主要原因为阳性检出率较低,为找出国产试剂阳性检出率低的原因,我们对各种试剂检测的抗体谱进行了分析(表)第一次会同标定结果分析:o份阴性样品Oaho及Mtx检测均为阴性,国产试剂检测出现围预防医学杂志’年月第卷第】期ChinPreyMeg,M,a~hvd假阳性为,份,按年版《中国生物制品规程》要求,共有家国产试剂达到要求见表)说明国产试剂的特异性仍需要改进表第一次会同标定结果o份阳性样品经OrthoHCV及fi’Ittrex,检测均有份漏检,其中Orfiao漏检样品(P)经HCVRIBA,检测核心区抗体为,两家不同HCVPCR试剂检测均为阳性Nttrex漏检样品()经HCVRIBA,检测,NS区抗体为,但两家HCVPER试剂检测均为阳性而家国产试剂检测该份样品均为阳性(见表l,)国产试剂检测份阳性样品,漏检样品为,份,按照oA年版《中国生物制品规程》要求,仅有家试剂达到标准,国产试剂漏检原因分析如下:份单独Core区抗体阳性样品除一家较特殊的厂家漏检较多外,其余仅有两家漏检份其余均检测为阳性份单独NS区抗体为阳性的样品国产试剂漏检为份,平均漏检,份份单独NS区抗体为阳性的样品国产试剂除家漏检外其余均为阳性l份NS及NS均为阳性的样品国产试剂漏检为份,平均漏检份份NS及NS阳性的样品目产试剂漏检为,份(见表)可以看出国产试剂对于单独核心抗体样品基本没有漏检,而对于单独NS抗体样品漏检率非常高,对于同时禽有NS和NS及NS和NS的样品也有较高的漏检率这一结果和我们年对于种国产抗HCVEIA试剂的大规模临床考核结论是一致的(结果待发表),即目前的国产试剂对于HCV非结构抗体(NS,NS,NS)检测灵敏度不够,尤其是对于HCVNS抗体容易出现漏检也正是基于临床考核的这一结果,我们才在这一批参考品中有意识的提高了HC’vNS抗体的比例,希望国产试剂提高对HCVNS抗体的检出力度,达到参考品的要求,改进试剂质量表第一次会同标定漏检样品分析第二次会同标定及结果分析根据第一次会同标定的结果,为促进国产抗HCV试剂质量提高,研究改进试剂质量的措施,我们召开了抗HCV试剂研讨会研讨会以后,各生产单位均针对自己产品存在问题进行了分析,研制或更换了HCV抗原,重新优化了试剂组装工艺在此基础上我们组织了第二次会同标定目前共收到l份会『司标定报告,阳性样品符合率大于的单位有家,阴性样品符合率大于的有l家,总符中国预防医学杂志O年月第卷第期ChinPreyNod,MarchVolNo合率大于的有l家计有以上的单位达到国家标准其合格率较第一次会同标定大大提高(见表)表第二次会同标定结果统计讨论我国免疫试剂的国家参考品均是由一定数量的阳性样品和阴性样品所组成,这些样品是从大量样品中根据不同目的筛选出来的,均经过反复确证和逐一论证这些样品作为一个整体用于全面控制试剂的质量,如灵敏度,特异性,可重复性,变异性等等丙型肝炎病毒于年刚刚被发现J,对于它的认识有一个逐渐深入的过程,我国的抗HCVEIA试剂于年问世,为促进它的发展和完善,我们已建立了三代国家参考品J,推动我国的试剂从第一代发展到现在的第三代,其灵敏度和特异性有了很大的进步但在使用过程中仍发现有漏检和非特异现象正如以上所分析的那样,国产试剂漏检的主要是抗HCV非结构区抗体其原因主要是国产试剂所用HCV非结构区抗原,特别是NS区抗原明显弱于国外试剂,而Core区抗原与国外试剂基本一致我们的这批参考品希望在全面提高试剂质量的同时,重点解决国产试剂对HCV非结构抗体检出力弱的问题新国家参考品有以下特点:所有样品均经多种抗HCVEIA试剂检测,并经RIBA,PCR等确证不单独依任何一家抗HCVEIA试剂为标准以达到科学公正所有阳性样品均给出了HCVRIBA试剂检测出的抗HCV抗体谱,便于检查试剂对各种HCV抗体的检出灵敏度,也便于生产单位参考该抗体谱改进试剂样品抗体分布更加合理,比较接近人群中抗HCV各种抗体比例同时根据目前抗一HCVEIA试剂发展趋势及国产试剂存在问题,新批号参考品增加了单独NS抗体阳性样品及以非结构区抗体阳性为主的样品比例阴性样品均为国产试剂检测A值较高的样品,便于控制试剂的特异性本批新国家参考品的所有样品均经过国内外试剂反复检测,并用权威和昂贵的RIBA试剂进行了确证,提供了所有阳性样品的抗体谱,为国内外丙肝诊断试剂生产单位提供了开发和筛选高质量丙肝抗原的参考材料,希望新的国家参考品的应用既能为各生产单位提供有效的质量标准,又能推动国产试剂的质量提高参考文献祁自拍,周诚扬报,等对两种第三代丙肝试剂检测的不同功能区抗体组分研究中华微生物学和免疫学杂志,,():祁自拍,周诚,谷金莲,等丙型肝炎国产诊断试剂与第三代进试剂的临床比较研究中华医学检验杂志,():中国生物制品标准化委员会中国生物制品规程oo年版北京:化学工业出版杜(o祁自柏局诫扬振等第代丙肝试剂国家参考品的研制及初步应用中国生物制品学杂志,()o一lO金窖玉祁自柏周诚等第二代丙型肝炎诊断试剂质控参考品的建立中华医学检验杂志,,():垒窖玉丙型肝炎抗体上sA诊断试剂质控参考品的建立中国生物制品学杂志():Is一【Choal,KeuGweurAJdalIsolationofaeDNAclogderivedbonanonA,IIItflB”hepatitisgentsneScien,~etitanabo~l:(收稿期:)致作者:作者对论文中的数据作统计学处理时,对两组或两组以上数据之间比较差异是否有显着性时,本刊要求用个档次表示,即:差异无显着性,PO差异有显着性,P差异有非常显着性,P本刊鳊辑部

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