郑州大学第五附属医院
科室管理诊疗
规范
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文件
文件编号:ZDWFY-WSW
责任部门:检验科微生物室
1. 项目名称：粪便细菌的培养
2.标本采集与运送
2. 1标本采集
2.1.1标本采集尽可能在发病早期和使用抗菌药物治疗之前。在不同的时间采集2-3个标本可以提高致病菌的分辨率。
2．1.2自然排便采集标本时，取有脓血，粘液，组织碎片部分的粪便1-3克。液状粪便则取絮状物，一般取1-3毫升，直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检
2.1.3直肠拭子采集粪便标本，适用于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围洗净，用无菌盐水，保存液或增菌液湿润的棉拭子插入肛门，成人约4-5厘米，儿童约2-3厘米，与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转，必须将拭子之于适当的运送培养基内送检。
2.1.4容器应是清洁，带盖，光口的，送检的标本中不能加防腐剂。
2.2标本运送
2.2.1粪便标本应尽快送检，室温条件下不能超过2小时。如不能及时送检可加入ph7.0的磷酸盐甘油或转运培养基，但不宜超过24小时。
2.2.2直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检，转运时间不宜超过2小时。
2.2.3高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。
2.2.4直肠活检标本用粪便容器送检，内盛少量无菌水以防止沉淀。
2.3标本保存
不能及时培养的标本通常4-6℃保存，培养艰难梭菌的标本应保存在-20℃以下。用缓冲盐甘油溶液保存沙门氏菌和志贺氏菌的标本，保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2（100mg/L）.
3.标本镜检
粪便标本直接镜检找到大量多核白细胞，提示侵袭性致病菌感染。如果肠道菌群紊乱，革兰染色结果可以提示是酵母菌还是葡萄球菌感染。粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。因此，粪便标本一般不做直接涂片检查，只有检查霍乱弧菌以及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查。
3.1Loeffler氏亚甲兰湿片法
选择粪便标本有粘液的部分用于检查。用竹签将一滴亚甲兰染液与等量便均匀涂于载玻片上。盖上盖玻片2-3分钟，高倍镜下观察。如见到大量WBCS提示侵袭性致病菌感染，观察到大量单核细胞则与沙门氏菌感染有关。
3.2.革兰氏染色
制备一张薄的粪便涂片，采用常规革兰氏染色方法。镜下观察是否有大量WBCS，成丛的革兰氏阳性球菌，酵母菌。镜检如见革兰阳性杆菌，无荚膜，大多形成卵圆形芽孢位于菌体一端，提示艰难梭菌感染。
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科室管理诊疗规范文件
文件编号:ZDWFY-WSW
责任部门:检验科微生物室
3.3水样粪便的标本，采用悬滴暗视野镜检，如发现细菌呈穿梭状极活泼运动，则考虑为弧菌感染。加入01群霍乱弧菌诊断多价血清或0139血清，显微镜下观察若运动停止则为制动试验阳性，应立即与当地卫生防疫部门联系，并做好患者消毒隔离工作。
4细菌培养及培养基的选择。
4.1腹泻病原菌常规检查。
腹泻病原菌种类繁多，实验室不可能对所有可能引起腹泻的病原菌都进行培养。为保证获得较高的检出率。可以对患者进行病原菌常规培养，包括沙门氏菌，志贺氏菌，气单胞菌，临单胞菌，弧菌，也包括引起菌群失调的金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌和酵母菌。
4.2培养基选择。
4.2.1沙门氏菌接种XLD,MAC，平板。
4 2.2志贺氏菌接种XLD,MAC，平板。
4 2.3气单胞菌接种XLD,MAC，血平板。
4.2.4临单胞菌接种XLD,MAC，血平板。
4.2.5弧菌接种碱性蛋白胨水增菌，35℃培养6－12h后，传代到TCBS平板上培养。
4.2.6铜绿假单胞菌接种XLD,MAC，血平板。
4.2.7金黄色葡萄球菌接种高盐甘露醇平板和血平板。
4.2.8EHECO157先接种XLD,MAC,平板，35℃培养18－24h后，挑选乳糖阳性菌再转种SMA平板。
以上接种平板均置35℃培养18－24h。
5.培养物鉴定
粪便标本操作
流程
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（沙门菌与志贺菌属检查）
粪便或肛试子
分离培养 增菌培养
SS琼脂平板 麦康凯或中国蓝∕ 亚硒酸盐增菌培养基 GN增菌培养基
伊红美蓝琼脂平板 (适于沙门菌属) （适于志贺氏菌属）
SS及麦康凯琼脂平板分离
三糖或双糖培养基
血清学鉴定 生化反应鉴定 药物敏感性试验
报告
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编写人
修改内容及修改人
批准人
生效日期
郑州铁路中心医院
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责任部门：检验科微生物室
1. 项目名称：尿液培养细菌学检查
2. 标本采集和运送
2.1容器：
2.1.1由不与尿液成分发生反应的多性材料制成；
2.1.2洁净，无菌，加盖，密封，防渗漏；
2.1.3不含防腐剂和抑菌剂，一次性使用；
2.1.4容积应＞50ml，开口直径应＞4ml,具有较宽的底部，盒盖易于开启。
2.2标本采集方法
注意尽量采集晨尿标本，应保证尿液在膀胱内停留4h以上。
2.2.1清洁中段尿 是最常用获得尿培养标本的方法。留取标本时应注意：
2.2.1.1睡前应少量饮水，以免稀释尿液
2.2.1.2女性病人用手分开大阴唇，男性病人翻上包皮，用肥皂将会阴部仔细清洗，然后以清水冲洗尿道口周围。
2.2.1.3前段尿排去，将中断尿约10－20ml直接排入专用的无菌容器中。
2.2.2耻骨上膀胱穿刺法
严格按无菌操作。使用注射器直接从耻骨上经皮出穿入膀胱，吸取尿液。该方法是评估膀胱内细菌感染的“金指标”。
2.2.3直接导尿法
按常规方法局部消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液，可将减少尿液标本污染，准确地反应膀胱感染情况。但因导尿管的使用，可引入下尿道细菌，导致继发感染，应慎重使用。
2.2.4小儿收集包对于无自控能力的小儿可应用收集包收集尿液，该装置由于很难避免部菌群污染尿液而产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时有意义。如果检验结果为阳性应结合临床进行分析，必要时可使用其他方法如耻骨上膀胱穿刺或导尿法进行复检。
2.2.5其他方法
收集特定部位的尿标本可以通过侵入的方式如膀胱镜或手术中进行采集。
2.3标本运送 标本采集后应及时送检，2h内进行接种，否则应置4－8℃冰箱保存，冷藏保存标本时间不得超过8小时。
3．实验室检查
3.1标本的验收
3.1.1工作人员应首先检查化验单所提供的信息，信息应包括：标本收集时间，标本收集方式，病人是否已经使用抗生素等。对信息不全者应设法与临床医师取得联系，在没有获得可靠信息之前，任何标本都不能随意丢弃。
编写人
修改内容及修改人
批准人
生效日期
郑州大学第五附属医院
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文件编号:ZDWFY-WSW
责任部门：检验科微生物室
1. 项目名称：皮肤，软组织感染实验室检查
2. 标本采集和运送
2.1组织块 标本采集：尽量多采集组织，若有可能，保存于－70℃，以备进一步研究。
定量培养时，取2×1㎝,约500㎎组织。
标本运送：置无菌容器或厌氧运送系统。标本量少时，加几滴生理盐水保温（某些军团菌可能被盐抑制），室温下15分钟内，最长不超过24小时送达实验室。运送中标本应在室温下保持湿润，以保证厌氧菌存活。
2.2 脓肿 标本采集：抽吸前先用生理盐水擦去表面分泌物，以避免污染。闭合性脓肿抽吸脓肿壁，无菌置入厌氧运送系统；开放性伤口尽量抽吸深部脓液运送。标本最好每天采集一次，每次采集＞1ml。
标本运送：脓液或厌氧运送系统，室温下2小时内，最长不超过24小时送达实验室。
2.3 抽吸液体 包括腹水，胸水，羊水，胆汁，关节液，心包积液等。
标本采集：消毒皮肤，经皮抽吸或手术中采集标本。细菌，酵母菌培养注入学培养瓶或无菌容器或厌氧运送系统。羊水及后穹窿穿刺液置厌氧运送系统。标本采集量为细菌≥1ml,真菌≥10ml，分枝杆菌≥10ml。
标本运送：室温下15分钟内，最长不超过24小时送达实验室。真菌培养若不能立即运送，应于4℃，24小时内送达实验室。
2.4 拭子 标本采集：若必须使用拭子采集，以无菌生理盐水擦去表面分泌物，避免污染。用拭子深入伤口，在新生组织边缘用力擦拭，并采集两份，分别作培养和革兰染色。
标本运送：拭子室温下2小时内，最长不超过24小时送达实验室。
3. 实验室检查
3.1肉眼观察
3.1.1颜色 脓液颜色从黄绿色到棕红色各不相同。红色通常因为混有血液或血红蛋白所致；原发性阿米巴肝脓肿抽出物为凝胶状，暗棕色到黄棕色；术后或创伤性（烧伤）脓液因铜绿甲单胞菌感染产生的绿脓菌素而呈绿色。
3.1.2性状 脓液可呈稀薄至粘稠状。颈部窦道脓液应寻找“硫磺”颗粒，为丝状伊氏放线菌菌落，提示颈颜面放线菌病；各种颜色小颗粒（白色，黑色，红色或棕色）提示足分枝菌病，肉芽瘤；彩色颗粒与丝状细菌或真菌菌丝体有关。结核“冷脓肿”炎症症象少，呈干酪状。
3.1.3气味 恶臭气味是厌氧感染或需氧－厌氧混合感染最大特征，这种特征性气味加上革兰染色应立即报告临床医师，以利于经验性选择合适的抗菌药物和确定是否需做厌氧培养。
3.2显微镜检查
郑州大学第五附属医院
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文件编号:ZDWFY-WSW
责任部门:检验科微生物室
3.1.2 根据标本采集时间，所用容器确定标本是否合格。
3.1.3 对不合格的标本注明原因，退回，并做记录。
3.2 培养基选择和标本接种 根据标本来源和临床诊断选择合适的培养基和培养条件。
3.2.1 尿定量培养：倾注平板法：首先将无菌生理盐水9.9ml于大试管中加0.1ml被检尿液，混匀，使成100倍稀释。取1ml加入直径9cm灭菌平皿内，同时加入以融化并冷至50℃培养基，与尿混匀。待凝固后置35℃，生成菌落数乘以100即相当于每ml中菌数。
3.2.2 平板接种法：取尿样5ml滴注平板培养基上，用接种环涂抹，待干后置35℃培养过夜，计数生成的菌落数，乘以200，求出每ml菌数。
3.2.3 一般培养：将收集标本的容器轻轻选中混匀，无菌微量加样器取尿液0.01ml接种于血平板和麦康凯平板，35℃培养18～24小时。
3.2.4 特殊培养：对怀疑有苛氧菌感染者应加种一块巧克力平板，置5％CO2环境中培养48小时。
3.2.5 经18～24小时培养无细菌生长者，应将所有培养基继续培养24小时。
3.3 结果观察和结果解释
3.3.1 菌落计数：将平板菌落数乘以10 （CFU／ml）。
3.3.2 一般解释标准：单种细菌菌落数＞105CFU／ml可能为感染；＜104 CFU／ml可能为污染，在两者之间需要根据病人的临床表现进行评估。
3.3.3 不同来源标本结果解释见下表。
标本来源 菌落数CFU／ml 结果解释及实验室处理
清洁中段尿 ﹤5×10(4) 无明确意义，仅报告菌落数及革兰染色
特征，并注明是纯培养或是混合菌生长
5－10×10(4) 纯培养有意义，需进行鉴定和药敏；
混合菌生长无明显意义仅做革兰染色镜检，
﹥10（5） 纯培养或混合菌生长某一种菌落数≥10(5)者有意义需进行鉴定和药敏。
导尿 ＞10 3种菌以内都有意义需进行鉴定和药敏
耻骨上膀胱穿刺 任意数目 所有细菌都有意义需做鉴定和药敏
注：清洁中断尿和导尿的标本中有4种以上微生物生长均报告标本污染。需重新送检。
郑州大学第五附属医院
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文件编号:ZDWFY-WSW
责任部门:检验科微生物室
1.项目名称：皮肤、软组织感染实验室检查
1． 标本采集和运送
2.1 组织块 标本采集：尽量多采集组织，若有可能，保存于－70℃ ，6以备进一步研究。定量培养时，取2×1cm，约500mg组织。
标本运送：置无菌容器或厌氧运送系统。标本量少时，加几滴生理盐水保温（某些军团菌可能被盐抑制），室温下15分钟内，最长不超过24小时送达实验室。运送中标本应在室温下保持湿润，以保证厌氧菌存活。
2.2 脓肿 标本采集：抽吸前先用生理盐水擦去表面分泌物，以避免污染。闭合性脓肿抽吸脓肿壁，无菌置入厌氧运送系统；开放性伤口尽量抽吸深部脓液运送。标本最好每天采集一次，每次采集＞1ml。
标本运送：脓液或厌氧运送系统，室温下2小时内，最长不超过24小时送达实验室。
2.3 抽吸液体 包括腹水，胸水，羊水，胆汁，关节液，心包积液等。
标本采集：消毒皮肤，经皮抽吸或手术中采集标本。细菌，酵母菌培养注入血培养或无菌容器或厌氧运送系统。羊水及后穹隆穿刺液置厌氧运送系统。标本采集量为细菌＞1ml，真菌＞10ml，分枝杆菌＞10ml。
标本运送：室温下15分钟内，最长不超过24小时送达实验室。真菌培养若不能立即送运，应于4℃，24小时内送达实验室。
2.4 拭子 标本采集：若必须使用拭子采集，以无菌生理盐水擦去表面分泌物，避免污染。用拭子深入伤口，在新生组织边缘用力擦拭，外采集两份，分别作培养和革兰染色。
标本运送：拭子室温下2小时内，最长不超过24小时送达实验室。
3. 实验室检查
3.1 肉眼检查
3.1.1 颜色 脓液颜色从黄绿色到棕红色各部相同。红色通常因混有血液或血红蛋白所致；原发性阿米巴肝脓肿抽出物为凝胶状，暗棕色到黄棕色；术后或创伤性（烧伤）脓液因铜绿甲单胞菌感染产生的绿脓菌素而呈绿色。
3.1.2 性状 脓液可呈稀薄至粘稠状。颈部窦道脓液应寻找“硫磺”颗粒，为丝状伊氏放线菌菌落，提示颈颜面放线菌病；各种颜色小颗粒（白色，黑色，红色或棕色）提示足分枝菌病，肉芽瘤；彩色颗粒与丝状细菌或真菌菌体有关。结核“冷脓肿”炎症症象少，呈干略状。
3.1.3 气味 恶臭气味是厌氧感染或需氧—厌氧混合感染最大特征，这种特征性气味加上革兰染色应立即报告临床医师，以利于经验性选择合适的抗菌药物和确定是否需做厌氧培养。
3.2 显微镜检查
浙公网安备 33021202002483