实验十二绒毛细胞培养与染色体制备
【目的与要求】
1.了解绒毛细胞培养方法,染色体的制备技术。
2.了解绒毛检测的意义。
【实验原理】
绒毛细胞由受精卵发育分化的滋养层细胞及绒毛间质中的胚外中胚层细胞组成,绒毛细胞与胎儿组织同源,通过绒毛检测,可客观反映胎儿情况。绒毛既可以直接制片进行染色体的观察,也可以经培养制备染色体,进行产前诊断。
【实验用品】
1)绒毛细胞培养基,包括培养基、秋水仙素;EDTA-trypsin;氯化钾溶液
2)常规检测试剂和器材;
3)5-10毫升注射器
【内容与方法】
1)挑选孕6-8周孕妇,询问病史、进行妇科检查,以确定早孕,了解子宫大
小,位置、弯曲情况及胚胎着床情况;
2)拭去宫颈粘液,严密消毒宫颈及宫颈管下段,一般可不用宫颈钳,如子宫
过度前屈或后屈,则有助手用宫颈钳轻拉子宫向下固定。
3)用消毒塑料吸管按子宫的自然弯曲方向,沿着子宫壁轻轻进入子宫腔,直
至有阻力感为止,一般进入子宫颈外口6-10CM(根据妊娠天数及宫颈长度而定)切忌反复进退,以防剥离面大,然后用空针抽吸,同时退出塑料管,大多可吸出少许血液,绒毛枝便夹在其中。
4)在无菌条件下,用含过量双抗的生理盐水反复冲洗绒毛组织2-3次以去除
血液,然后除去并吸净生理盐水。
5)经低倍镜下鉴定为绒毛枝后,用眼科手术剪剪成1-2mm3小枝或小块,移入
25cm2培养瓶中,分散于瓶的一边,于对侧加入含50%血清的培养基,PH为
7.2-7.4,37度培养1-3小时待其贴壁后,即可翻瓶,使组织块泡在培养液
中。
6)每天观察,一般3-7天可见上皮样或成纤维样细胞生长。根据生长情况每
隔5-7天换液一次。一般培养6-20天,待细胞生长旺盛时,按下列程序处理:
①加入秋水仙素0.2-0.4ug/ml让其过夜,约14小时左右。
②将培养液倒入离心管中,加入PBS或生理盐水2-3毫升,洗净血清,加
0.25% EDTA-trypsin消化3-5分钟,培养基终止消化,PBS或生理盐水
洗净瓶壁。
③置离心管中以1500rpm离心10分钟。
④去除上清液,加0.075M氯化钾4毫升吹打,37℃低渗3-5分钟;加3:1
固定剂固定6毫升轻混匀。
⑤1500rpm离心10分钟。
⑥去上清,加固定液6毫升轻混匀,离心去上清,如此反复固定2次。
⑦去固定液,视细胞量加入几滴新鲜固定液轻轻混匀,滴片,每例滴3-5
张。
⑧75℃烤片3小时,自然冷却后,常规G显带处理及进行染色体分析。注意事项:
1)严格无菌操作是培养成功的关键;
2)视细胞分裂旺盛情况加秋水仙素0.2 ug -0.4ug/ml、 4-6小时也可考虑收
获;
3)在用0.25% EDTA-trypsin消化之前尽量将瓶壁血清洗净,更有利于快速消
化;
4)低渗之后每一步均应轻吹打,用力过大可能损失掉较多细胞。
本文档为【细胞实验12 绒毛细胞培养与染色体制备】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
浙公网安备 33021202002483