染料木黄酮, 拟雌内酯及槲皮素对孕烷X 受体介导的CYP3A4 转录的调节作用（可编辑）

染料木黄酮, 拟雌内酯及槲皮素对孕烷X 受体介导的CYP3A4 转录的调节作用（可编辑） 中 国 药 理 学 与 毒 理 学 杂 志 2 0 0 4 年 6 月 ; 1 8 ( 3 ) : 2 1 9 - 2 2 3 C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l 2 0 0 4 J u n ; 1 8 ( 3 ) : 2 1 9 - 2 2 3 ? ? 2 1 9 染 料 木 黄 酮 、 拟 雌 内 酯 及 槲 皮 素 对 孕 烷 X受 体 介 导 的 C Y P 3 A 4 转 录 的 调 节 作 用 ? 孙 剑 寒 , 郑 一 凡 , 祝 慧 娟 , 朱 心 强 ( 浙 江 大 学 医 学 院 卫 生 毒 理 学 教 研 室 , 浙 江 杭 州 3 1 0 0 0 6 ) 摘 要 : 目 的 研 究 植 物 雌 激 素 中 的 染 料 木 黄 酮 的植 物 雌 激 素 可 能 会 引 起 碘 缺 乏 、 生 殖 毒 性 等 。 所 ( G S T ) 、 拟 雌 内 酯 ( C O M ) 及 槲 皮 素 ( Q U ) 能 否 通 过 活 化 以 , 其 在 体 内 的 代 谢 及 可 能 引 起 的 对 其 他 伴 随 进 入 体内 的 药 物 或 其 他 化 学 物 的 影 响 需 要 进 一 步 研 究 。 人 孕 烷 X 受 体 ( P X R ) 诱 导 C Y P 3 A 4 的 转 录 表 达 。 方 法 用 依 赖 的 瞬 时 转 染 报 告 基 因 试 验 检 测 种 植 物 目 前 对 植 物 雌 激 素 的 研 究 主 要 着 重 于 与 雌 激 素 受 体 P X R 3 雌 激 素 的 诱 导 作 用 。 结 果 , 和 均 能 通 结 合 后 引 起 的 雌 激 素 样 作 用 ( 高 剂 量 时 ) 和 雌 激 素 拮 G S T C O M Q U 过 活 化 诱 导 细 胞 基 因 的 转 录 表 抗 作 用 ( 低 剂 量 时 ) , 但 全 面 阐 述 作 用 机 制 及 对 人 体 P X R H e p G C Y P 3 A 4 2 达 , 最 大 诱 导 倍 数 ( 相 对 于 用 浓 度 为 的 处 带 来 的 影 响 还 有 待 深 入 。 0 . 1 % D M S O 孕 烷 受 体 ( , ) , 又 称 甾 理 的 细 胞 ) 在 本 实 验 中 分 别 为 ( ) , X p r e g n a n e X r e c e p t o r P X R 1 1 . 9 7 P < 0 . 0 1 2 . 9 8 体 激 素 和 外 源 化 学 物 受 体 ( ( ) 和 ( ) 。 结 论 , 和 s t e r o i d a n d x e n o b i o t i c r e ? P < 0 . 0 1 3 . 2 8 P < 0 . 0 1 G S T C O M , ) , 为 最 近 发 现 的 外 源 化 学 物 主 要 代 谢 酶 Q U 均 能 诱 导 C Y P 3 A 4 的 转 录 表 达 , 其 作 用 机 制 通 过 c e p t o r S X R 的 转 录 活 化 因 子 , 是 转 录 调 节 的 关 活 化 P X R 。 G S T , C O M 和 Q U 的 摄 入 可 能 影 响 其 他 C Y P 3 A 4 C Y P 3 A 4 [ 3 ~ 5 ] 键 因 子 。 而 C Y P 3 A 4 的 底 物 非 常 广 泛 , 包 括 C Y P 3 A 4 底 物 尤 其 是 药 物 在 体 内 的 代 谢 。 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] 关键 词 : 受 体 , 孕 烷 ; 细 胞 色 素 ; 报 告 基 因 5 0 % 以 上 临 床 常 用 药 物 、 部 分 食 物 、 胆 汁 酸 及 X P 4 5 0 试 验 ; 染 料 木 黄 酮 ; 拟 雌 内 酯 ; 槲 皮 素 部 分 内 源 性 甾 体 激 素 , 所 以 P X R 的 活 化 和 C Y P 3 A 4 的 诱 导 将 产 生 复 杂 的 药 物 和 其 他 化 合 物 之 间 的 相 互 作 用 , 最 终 影 响 药 物 代 谢 转 化 , 改 变 疗 效 甚 至 引 起 严 中 图 分 类 号 : R 9 6 6 重 的 药 物 不 良 反 应 。 最 近 报 道 一 些 内 分 泌 干 扰 物 , 文 献 标 识 码 : A [ 9 ~ 1 1 ] 如 硫 丹 、 氯 丹 、 双 酚 等 可 通 过 活 化 诱 文 章 编 号 : 1 0 0 0 ? 3 0 0 2 ( 2 0 0 4 ) 0 3 ? 0 2 1 9 ? 0 5 ? ? A P X R α 导 C Y P 3 A 4 的 转 录 表 达 , 表 明 摄 入 环 境 激 素 可 能 引 植 物 雌 激 素 主 要 包 括 异 黄 酮 类 ( ) 、 木 起 某 些 药 物 和 其 他 C Y P 3 A 4 底 物 的 代 谢 改 变 。 本 文 i s o f l a v o n e s 通 过 瞬 时 共 转 染 含 人 序 列 质 粒 和 含 反 酚 素 类 ( ) 、 香 豆 素 类 ( ) 和 黄 酮 类 P X R C Y P 3 A 4 l i g n a n s c o u m e s t a n s [ ] 1 应 元 件 报 告 基 因 质 粒 的 报 告 基 因 试 验 , 观 察 了 种 ( ) 等 , 存 在 于 数 百 种 植 物 中 , 其 中 许 多 是 人 3 f l a v o n e s 典 型 的 植 物 雌 激 素 染 料 木 黄 酮 ( , ) 、 拟 雌 们 常 用 的 植 物 性 食 物 如 大 豆 及 其 制 品 , 与 人 类 关 系 g e n i s t e i n G S T 内 酯 ( c o u m e s t r o l , C O M ) 和 槲 皮 素 ( q u e r c e t i n , Q U ) 对 十 分 密 切 。 目 前 , 已 有 大 量 实 验 研 究 和 流 行 病 学 调 P X R 依 赖 的 C Y P 3 A 4 的 转 录 调 节 作 用 。 查 资 料 表 明 , 植 物 雌 激 素 在 改 善 更 年 期 综 合 征 、 预 防 骨 质 疏 松 和 心 血 管 系 统 疾 病 , 以 及 乳 癌 、 子 宫 内 膜 癌 、 前 列 腺 癌 等 激 素 依 赖 肿 瘤 等 方 面 有 一 定 的 作 1 材 料 和 方 法 [ 2 ] 用 。 因 此 , 各 种 植 物 雌 激 素 正 日 益 受 到 人 们 的 青 材 料 1 . 1 睐 , 被 广 泛 用 于 药 品 、 食 品 和 保 健 品 的 开 发 。 但 过 量 细 胞 及 其 培 养 试 剂 1 . 1 . 1 人 肝 肿 瘤 细 胞 株 , 由 浙 江 大 学 传 染 病 研 H e p G 2 收 稿 日 期 : 接 受 日 期 : 2 0 0 3 ? 0 7 ? 2 3 2 0 0 3 ? 1 0 ? 1 0 究 所 提 供 ; 无 酚 红 ( D M E M D u l b e c c o ′ s M o d i f i e d E a g l e ′ s 作 者 简 介 : 孙 剑 寒 ( ) , 女 , 浙 江 省 峡 州 市 人 , 在 读 1 9 7 7 - M e d i u m ) 细 胞 培 养 基 干 粉 , 购 自 H y c l o n e 公 司 ; 丙 酮 酸 硕士 , 研 究 方 向 为 药 物 毒 理 学 ; 朱 心 强 ( ) , 男 , 浙 江 省 1 9 5 7 - 钠 购 自 上 海 生 工 ; 活 性 炭 为 公 司 产 品 ; 葡 聚 糖 武 义 县 人 , 医 学 博 士 , 教 授 , 主 要 研 究 方 向 为 生 殖 毒 理 学 。 S i g m a ? 悬 液 为 瑞 典 公 司 产 品 ; 联 系 作 者 E ? m a i l : t o x i c @ z j u . e d u . c n T 7 0 P h a r m a c i aF i n e C h e m i c a l s? ? C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l 2 0 0 4 J u n ; 1 8 ( 4 ) 2 2 0 胎 牛 血 清 为 杭 州 四 季 青 产 品 。 后 将 脂 质 体 质 粒 复 合 物 轻 轻 加 于 孔 内 。 m i n ? 2 4 质 粒 及 其 扩 增 试 剂 待 测 物 处 理 1 . 1 . 2 1 . 2 . 3 t k ? ( C Y P 3 A 4 ) 3 ? L u c 报 告 基 因 质 粒 和 人 P C M X ? 转 染 4 ~ 6 h 后 吸 弃 原 培 养 液 , 加 入 含 待 测 化 合 表 达 质 粒 由 博 士 惠 赠 ( 物 的 新 的 培 养 液 , 继 续 培 育 后 , 先 h S X R R o n a l d M . E v a n s H o w a r d D M E M 1 2 ~ 4 8 h , ) ; 半 乳 糖 苷 酶 表 达 质 用 每 孔 用 洗 涤 细 胞 , 再 用 裂 解 缓 H u g h e s M e d i c a l I n s t i t u t e U S A ? 0 . 5 m L P B S 1 5 0 L β μ 粒 ( C M V ? ? g a l a c t o s i d a s e p l a s m i d , p C M V ? G a l , 作 为 转 冲 液 ( 公 司 ) 裂 解 细 胞 。 P r o m e g a β β 染对 照 ) 由 教 授 惠 赠 ( M c D o n n e l l D e p a r t m e n t o f P h a r ? 1 . 2 . 4 荧 光 素 酶 和 ? 半 乳 糖 苷 酶 活 性 测 定 β , m a c o l o g y a n d C a n c e r B i o l o g y D u k e U n i v e r s i t y M e d i c a l 荧 光 素 酶 活 性 测 定 : 在 2 0 L 细 胞 裂 解 液 ( 做 适 μ C e n t e r , U S A ) ; D H 感 受 态 细 菌 由 本 实 验 室 自 行 制 当 稀 释 ) 中 加 入 荧 光 素 酶 测 试 底 物 ( 1 0 0 L l u c i f e r i n 5 α μ 2 + 备 ; 购 自 公 司 ; 内 切 Q I A p r e p S p i n M i n i p r e p K i t Q i a g e n 和 , 公 司 ) , 用 液 闪 记 数 仪 ( 未 C o A ? A T P ? M g P r o m e g a 酶( , , , 等 ) 购 自 大 连 宝 X b a R H i n d E c o R B a m H 关闭 耦 合 循 环 ) 进 行 光 子 测 定 , 每 分 钟 荧 光 光 子 数 ? ? ? ? 1 / 2 生 物 工 程 有 限 公 司 。 为 : ( 待 测 物 裂 解 液 - 未 转 染 细 胞 裂 解 液 ) 。 ? G a l β 1 . 1 . 3 转 染 和 检 测 试 剂 活 性 测 定 : 9 6 孔 板 每 孔 加 入 5 0 L 裂 解 产 物 和 5 0 L μ μ T M 脂 质 体 ( , L i p o f e c t a m i n 2 0 0 0 I n v i t r o g e nC o r p o r a ? ? G a l 测 试 缓 冲 液 , 反 应 3 0 m i n 后 用 终 止 液 终 止 ( 同 β t i o n , C a t : 1 1 6 6 8 ? 0 2 7 ) ; 荧 光 素 酶 ( f i r e f l y l u c i f e r a s e ) 测 试 时 进 行 标 准 曲 线 制 备 ) , 用 酶 标 仪 在 处 ? G a l 4 2 0 n m β 系 统 ( P r o m e g a 公 司 , C a t : E 4 0 3 0 ) ; ? G a l 测 试 系 统 测 定 样 品 的 吸 光 值 。 每 孔 荧 光 素 酶 相 对 活 性 值 为 每 β ( 公 司 , : ) 。 P r o m e g a C a t E 2 0 0 0 分 钟 荧 光 光 子 数 ? ? G a l 活 性 值 , 然 后 与 溶 剂 β 待 测 化 学 物 1 . 1 . 4 ( 0 . 1 % D M S O ) 对 照 的 荧 光 素 酶 相 对 活 性 值 比 较 , 计 利 福 平 ( r i f a m p i c i n , R I F , M r 8 2 3 . 0 ) , 为 已 知 的 算 测 定 管 相 对 活 性 值 与 之 相 比 的 倍 数 ( 统 计 分 析 时 诱 导 物 , 购 自 公 司 。 ( ) , C Y P 3 A 4 S e r v a Q U M r 3 3 8 . 3 溶 剂 对 照 的 诱 导 倍 数 为 ) 。 每 次 实 验 每 一 种 处 理 、 1 ( ) , ( ) 及 二 甲 亚 砜 C O M M r 2 6 8 . 2 G S T M r 2 7 0 . 2 每 一 个 剂 量 水 平 、 每 一 个 处 理 时 间 都 有 个 平 行 样 3 ( d i m e t h y l s u l f o x i d e , D M S O ) 均 购 自 S i g m a 公 司 。 各 待 品 孔 , 并 重 复 3 ~ 6 次 。 测 化 合 物 使 用 时 先 溶 于 , 然 后 用 含 胎 牛 D M S O 1 0 % 数 据 用 表 示 , 分 析 用 检 验 进 行 统 计 。 1 . 3 x ? s t ? 血 清 的 无 酚 红 稀 释 至 所 需 浓 度 , 的 终 D M E M D M S O 浓 度 控 制 在 0 . 1 % 及 以 下 。 结 果 2 主 要 设 备 1 . 1 . 5 不 同 剂 量 植 物 雌 激 素 对 的 诱 导 作 用 低 温 高 速 离 心 机 ( 公 司 ) ; 紫 外 分 光 光 度 2 . 1 C Y P 3 A 4 H e r a e u s G S T , C O M 和 Q U 作 用 2 4 h 均 能 活 化 P X R 诱 导 计 ( S m a r t S p e c 3 0 0 0 ) ; 酶 标 仪 ( M I C R O P L A T E R E A D E R C Y P 3 A 4 基 因 的 转 录 表 达 ( 表 1 ) 。 G S T 除 了 在 0 . 1 M o d e l 5 5 0 , B i o ? R a d ) ; 液 闪 记 数 仪 ( L S 6 5 0 0 M u l t i ? P u r ? - 1 ? 浓 度 对 无 诱 导 作 用 外 , 在 , 公 司 ) 。 m o l L C Y P 3 A 4 1 ~ 5 0 p o s e S c i n t i l l a t i o n C o u n t e r B e c k m a n μ - 1 ? 时 , 呈 现 出 明 显 的 剂 量 依 赖 关 系 , 最 高 诱 导 方 法 m o l L 1 . 2 μ 倍 数 为 倍 , 出 现 在 本 实 验 最 高 浓 度 ? 1 . 2 . 1 细 胞 接 种 6 . 8 2 5 0 m o l μ - 1 - 1 细 胞 用 含 胎 牛 血 清 的 无 酚 红 时 。 在 ? 就 有 诱 导 作 用 ( 数 据 H e p G 1 0 % D M E M L C O M 0 . 5 m o l L 2 μ - 1 未 列 出 ) , 在 ? 有 明 显 的 诱 导 作 用 , 但 浓 度 高 糖 培 养 液 培 养 。 胎 牛 血 清 预 先 经 活 性 炭 1 m o l L 5 % ? μ - 1 在 1 0 m o l ? L 或 以 上 时 诱 导 作 用 反 而 不 明 显 。 Q U 葡 聚 糖 悬 液 处 理 以 去 除 甾 体 激 素 。 细 胞 0 . 5 % T 7 0 μ - 1 5 - 1 只 有 在 1 0 m o l ? L 时 能 明 显 增 强 P X R 介 导 的 接种 于 2 4 孔 培 养 板 , 接 种 时 密 度 为 2 × 1 0 L , 每 μ 孔 , 培 养 ( , ) 。 C Y P 3 A 4 转 录 ( 3 . 2 8 倍 ) , 在 其 他 浓 度 时 无 明 显 诱 导 0 . 5 m L 1 6 ~ 2 4 h 3 7 ? 5 % C O 2 作 用 , 说 明 其 诱 导 作 用 的 剂 量 范 围 比 较 窄 。 三 种 植 转 染 1 . 2 . 2 物雌 激 素 在 本 实 验 中 的 诱 导 能 力 均 超 过 了 典 型 的 待 细 胞 长 至 8 5 % ~ 9 5 % 汇 合 时 用 脂 质 体 将 3 种 质 粒 同 时 转 染 细 胞 。 种 质 粒 的 比 例 为 : ( ) 诱 导 剂 利 福 平 ( 倍 ) 。 3 t k ? C Y P 3 A 4 C Y P 3 A 4 2 . 2 0 孔 , 孔 , 2 . 2 不 同 处 理 时 间 下 植 物 雌 激 素 对 C Y P 3 A 4 的 诱 3 ? L u c 4 5 0 n g / P C M X ? h S X R 1 5 0 n g / p C M V ? G a l β 1 6 0 n g / 孔 。 用 5 0 L 无 血 清 D M E M 稀 释 后 与 脂 质 体 导 作 用 μ 选 择 , 和 在 剂 量 反 应 研 究 中 诱 导 ( 2 g / 孔 , 用 5 0 L 无 血 清 D M E M 稀 释 ) 混 合 , 5 ~ 2 0 G S T C O M Q U ? μ μ中 国 药 理 学 与 毒 理 学 杂 志 2 0 0 4 年 6 月 ; 1 8 ( 3 ) ? ? 2 2 1 ( ) , ( ) , T a b 1 . G e n i s t e i n G S T c o u m e s t r o l C O M T a b 2 . T i m e ? d e p e n d e n t a c t i v a t i o n o f P X R ? m e d i a t e d ( ) ( ) , q u e r c e t i n Q U a n d r i f a m p i c i n R I F s t i m u l a t e h u m a n t r a n s c r i p t i o n o f C Y P 3 A 4 b y G S T C O M a n d Q U ( ) p r e g n a n e X r e c e p t o r P X R ? m e d i a t e d t r a n s c r i p t i o n o f F o l d l u c i f e r a s e a c i t i v t y D r u g / C Y P 3 A 4 a t d i f f e r e n t d o s e s f o r 2 4 h - 1 ? m o l L μ 1 2 2 4 4 8 ( h ) - 1 ? n F o l d l u c i f e r a s e a c i t i v t y D r u g / m o l L μ ? ? ? ? ? ? G S T 1 0 2 . 1 7 ? 0 . 4 9 3 . 0 8 ? 0 . 5 2 7 . 1 5 ? 1 . 1 0 G S T 0 . 1 5 1 . 0 5 ? 0 . 1 5 ? ? ? ? ? ? 5 0 2 . 4 6 ? 0 . 6 7 6 . 8 2 ? 1 . 8 3 1 1 . 9 7 ? 4 . 0 9 ? ? 1 6 2 . 0 5 ? 0 . 3 6 ? ? ? ? C O M 1 2 . 3 1 ? 1 . 5 6 1 . 8 4 ? 0 . 6 4 2 . 9 8 ? 1 . 0 1 1 0 6 3 . 0 8 ? 0 . 5 2 ? ? ? ? ? ? 5 0 6 6 . 8 2 ? 1 . 8 3 Q U 1 0 2 . 3 8 ? 0 . 6 4 3 . 2 8 ? 0 . 5 7 1 . 1 5 ? 0 . 2 7 ? ? C O M 0 . 1 5 0 . 6 9 ? 0 . 1 7 x ? s , n = 6 . P < 0 . 0 1 , c o m p a r e d w i t h D M S O t r e a t e d c e l l s . ? ? ? 1 6 2 . 9 8 ? 1 . 0 1 [ 6 ] 胞 C Y P 3 A 4 诱 导 试 验 有 很 好 的 相 关 性 。 所 以 , P X R 1 0 4 0 . 4 2 ? 0 . 0 8 报 告 基 因 试 验 可 以 在 基 因 转 录 水 平 验 证 化 合 物 对 5 0 6 0 . 8 5 ? 0 . 2 0 的 调 节 作 用 。 本 研 究 首 先 对 种 质 粒 同 时 转 C Y P 3 A 4 3 Q U 0 . 1 6 1 . 0 4 ? 0 . 1 2 染 是 否 成 功 进 行 验 证 , 结 果 及 其 分 析 如 下 : 转 染 了 3 ? 1 6 1 . 1 9 ? 0 . 1 8 种 质 粒 但 未 用 待 测 物 处 理 的 细 胞 裂 解 液 分 析 结 果 : 当 ? ? 1 0 6 3 . 2 8 ? 0 . 5 7 加 入 底 物 反 应 一 段 时 间 后 , 肉 眼 可 见 有 黄 色 出 ? G a l β 5 0 5 0 . 9 6 ? 0 . 3 2 现 , 与 标 准 品 出 现 的 现 象 一 致 , 用 酶 标 仪 进 行 测 ? G a l β R I F 1 3 1 . 4 1 ? 0 . 1 7 定 , 其 读 数 明 显 高 于 本 底 值 ( 未 用 质 粒 转 染 的 细 胞 裂 ? ? 1 0 6 2 . 2 0 ? 0 . 6 1 解 液 ) , 说 明 已 转 染 成 功 。 当 用 液 闪 仪 p C M V ? G a l ? β 5 0 6 1 . 6 4 ? 0 . 7 6 对 稀 释 倍 转 染 了 种 质 粒 的 细 胞 裂 解 液 进 行 6 3 C P M ( ) ( ) T h e r e p o r t e r p l a s m i d t k ? C Y P 3 A 4 3 ? L u c 4 5 0 n g a n d t h e P C M X ? 测 定 时 , 读 数 为 3 3 8 0 ~ 2 0 1 4 7 1 3 , 而 用 p C M V ? G a l 、 报 β h S X R e x p r e s s i o n p l a s m i d ( 1 5 0 n g ) w e r e c o t r a n s f e c t e d w i t h p C M V T M 告 基 因 质 粒 载 体 p G L ( C Y P 3 A 4 ) 和 P C M X ? h S X R 3 种 质 ( ) ? G a l c o n t r o l p l a s m i d 1 6 0 n g b y L i p o f e c t a m i n 2 0 0 0 r e a g e n t i n t o β 粒 转 染 的 细 胞 裂 解 液 , 未 处 理 细 胞 裂 解 液 及 空 白 对 照 H e p G c e l l s . L u c i f e r a s e a c t i v i t y w a s n o r m a l i z e d t o ? g a l a c t o s i d a s e 2 β a c t i v i t y a n d t h e n c a l c u l a t e d a s f o l d l u c i f e r a s e a c t i v i t y w i t h 1 ? f o l d ( 裂 解 缓 冲 液 ) 的 读 数 为 , 可 见 ( ) 6 0 ~ 1 4 0 t k ? C Y P 3 A 4 3 ? ? ? b a s a l ( t r e a t e d w i t h 0 . 1 % D M S O ) a c t i v i t y . x ? s . P < 0 . 0 1 , ? L u c 质 粒 转 染 成 功 。 在 转 染 t k ? ( C Y P 3 A 4 ) 3 ? L u c 和 ? c o m p a r e d w i t h 0 . 1 % D M S O t r e a t e d c e l l s ( t h e l u c i f e r a s e a c t i v i t y o f 两 种 质 粒 的 基 础 上 , 对 不 加 ) p C M V ? G a l P C M X ? h S X R 0 . 1 % D M S O t r e a t e d c e l l s a s 1 . β 和 加 的 结 果 进 行 多 次 实 验 对 比 发 现 , 荧 P C M X ? h S X R 光 素 酶 活 性 值 后 者 读 数 约 为 前 者 的 2 倍 , 这 一 方 面 说 能 力 较 高 的 浓 度 作 为 时 间 ? 反 应 试 验 时 的 剂 量 , G S T - 1 - 1 明 转 染 成 功 , 另 一 方 面 说 明 细 胞 ( , ? ) , ( ? ) , ( P C M X ? h S X R H e p G 1 0 5 0 m o l L C O M 1 m o l L Q U 1 0 2 μ μ - 1 自 身 尚 能 表 达 一 定 量 的 , 这 与 有 关 文 献 的 报 道 一 ? ) 分 别 处 理 细 胞 , 和 后 进 P X R m o l L H e p G 1 2 2 4 4 8 h 2 μ - 1 致 。 综 合 以 上 结 果 , 认 为 3 种 质 粒 共 转 染 成 功 。在 此 行酶 活 性 测 定 , 结 果 见 表 。 ( ? ) 和 2 G S T 1 0 m o l L μ - 1 基 础 上 , 进 行 典 型 植 物 雌 激 素 G S T , C O M 和 Q U 对 ( ? ) 在 时 均 能 增 强 G S T 5 0 m o l L 1 2 ~ 4 8 h C Y P 3 A 4 μ 的 诱 导 作 用 的 研 究 。 结 果 发 现 , 上 述 种 植 C Y P 3 A 4 3 表 达 , 在 达 到 最 大 , 分 别 为 处 理 细 4 8 h 0 . 1 % D M S O - 1 物 雌 激 素 均 能 增 强 介 导 的 的 转 录 , 其 中 P X R C Y P 3 A 4 胞 的 7 . 1 5 倍 和 1 1 . 9 7 倍 。 C O M ( 1 m o l ? L ) 在 1 2 ~ μ G S T 表 现 出 明 确 的 剂 量 ? 效 应 关 系 。 C O M 和 Q U 的 诱 亦 均 能 诱 导 转 录 表 达 , 在 时 达 最 4 8 h C Y P 3 A 4 2 4 h 导 范 围 较 窄 , 的 诱 导 作 用 出 现 在 ? C O M 0 . 5 ~ 1 m o l 大 为 处 理 细 胞 的 倍 。 ( ? 0 . 1 % D M S O 2 . 9 8 Q U 1 0 m o l μ μ - 1 - 1 - 1 , 则 在 ? 的 诱 导 作 用 最 强 , 剂 量 过 低 L Q U 1 0 m o l L ) 在 时 没 有 显 示 明 显 的 诱 导 作 用 , 在 时 L 4 8 h 2 4 h μ 或 过 高 均 无 明 显 的 诱 导 作 用 。 从 诱 导 的 时 间 效 应 看 , 的 诱 导 效 果 较 好 ( 倍 ) 。 3 . 2 8 具 有 明 显 的 时 间 效 应 关 系 , 的 诱 导 作 用 最 G S T ? 4 8 h 强 , 而 和 的 诱 导 作 用 在 最 强 , 后 则 C O M Q U 2 4 h 4 8 h 3 讨 论 不 明 显 。 有 研 究 证 实 报 告 基 因 试 验 与 人 原 代 肝 细 P X R C Y P 3 A 4 是 人 体 内 最 主 要 的 代 谢 酶 类 , 其 底 物? ? C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l 2 0 0 4 J u n ; 1 8 ( 4 ) 2 2 2 [ ] 1 2 , , ) , 非 常 广 泛 , 包 括 超 过 一 半 以 上 的 常 用 药 物 、 许 多 m a c o g e n e t i c s S c h o o l o f P h a r m a c y U n i v e r s i t y o f P i t t s b u r g h U S A ( D r O l i v e r B U R K D r . M a r g a r e t e F i s c h e r ? B o s c h ? I n s t i t u t e o f C l i n i c a l 食 物 和 环 境 化 学 物 , 以 及 胆 汁 酸 和 甾 体 激 素 等 内 源 P h a r m a c o l o g y , G e r m a n y ) , 浙 江 大 学 医 学 院 分 子 生 物 电 磁 学 研 性 化 合 物 。 因 此 , 了 解 药 物 和 其 他 化 合 物 对 C Y P 3 A 4 究 室 的 许 正 平 教 授 和 胡 华 军 研 究 生 提 供 质 粒 并 对 本 研 究 的 的 诱 导 或 抑 制 作 用 并 探 讨 其 分 子 机 制 将 有 助 于 预 测 指 导 和 帮 助 。 的 变 化 及 可 能 造 成 的 对 底 物 的 影 C Y P 3 A 4 C Y P 3 A 4 响 , 可 为 指 导 临 床 合 理 用 药 , 减 轻 或 避 免 药 物 不 良 反 参 考 文 献 : 4 应提 供 科 学 依 据 。 本 研 究 结 果 表 明 , 植 物 雌 激 素 在 一 定 条 件 下 可 以 通 过 活 化 P X R 诱 导 C Y P 3 A 4 的 转 录 [ 1 ] K o n g L N , Z u o P P . R e s e a r c h p r o g r e s s o f p h y t o e s t r o g e n [ J ] . 表 达 , 进 而 可 能 影 响 某 些 药 物 、 食 物 或 其 他 化 合 物 的 J R e p r o d M e d ( 生 殖 医 学 杂 志 ) , 2 0 0 3 , 1 2 ( 1 ) : 4 6 - 5 3 . [ ] 代谢 转 化 。 由 于 人 们 接 触 植 物 雌 激 素 的 机 会 很 多 , 2 C a s s i d y A . P o t e n t i a l r i s k s a n d b e n e f i t s o f p h y t o e s t r o g e n ? r i c h d i e t s [ J ] . I n t J V i t a m N u t r R e s , 2 0 0 3 , 7 3 ( 2 ) : 1 2 0 - 1 2 6 . 摄 入 的 剂 量 范 围 比 较 广 , 文 献 报 道 摄 入 大 量 富 含 植 [ ] , , , , 3 W a t k i n s R E W i s e l y G B M o o r e L B C o l l i n s J L L a m b e r t 物 雌 激 素 的 大 豆 食 品 后 , 人 血 清 植 物 雌 激 素 水 平 可 M H , W i l l i a m s S P , e t a l . T h e h u m a n n u c l e a r x e n o b i o t i c r e ? - 1 达 1 m o l ? L 以 上 , 其 活 性 甚 至 可 以 超 过 内 源 性 雌 μ : c e p t o r P X R s t r u c t u r a l d e t e r m i n a n t s o f d i r e c t e d p r o m i s c u i t y [ ] 1 3 激 素 。 因 此 , 当 大 量 摄 入 富 含 植 物 雌 激 素 的 食 物 [ ] , , ( ) : J . S c i e n c e 2 0 0 1 2 9 2 5 5 2 5 2 3 2 9 - 2 3 3 3 . 后 , 很 可 能 会 影 响 各 种 伴 随 服 用 的 需 经 代 C Y P 3 A 4 [ 4 ] B l u m b e r g B , S a b b a g h W J r , J u g u i l o n H , B o l a d o J J r , v a n 谢 或 代 谢 活 化 药 物 如 羟 基 甲 基 戊 二 酸 单 酰 辅 ? ? ? β β , , , M e t e r C M O n g E S e t a l . S X R a n o v e l s t e r o i d a n d x e n o ? 酶 A ( H M G ? C o A ) 还 原 酶 抑 制 剂 、 H I V 蛋 白 酶 抑 制 剂 、 b i o t i c ? s e n s i n g n u c l e a r r e c e p t o r [ J ] . G e n e s D e v , 1 9 9 8 , 1 2 甾 体 避 孕 药 等 药 物 的 药 效 , 引 起 药 效 减 低 或 毒 副 作 ( ) : 2 0 3 1 9 5 - 3 2 0 5 . 用 增 加 , 这 应 该 引 起 人 们 的 足 够 重 视 。 本 研 究 结 果 [ 5 ] S u n J H , Z h u X Q . P r o g r e s s e s a n d a p p l i c a t i o n o f t h e r e ? 还提 示 , 植 物 雌 激 素 预 防 激 素 依 赖 肿 瘤 的 机 制 除 了 s e a r c h e s o n t h e c o r r e l a t i o n b e t w e e n p r e g n a n e X r e c e p t o r a n d [ ] ( 中 国 药 理 学 与 毒 C Y P 3 A J . C h i n J P h a r m a c o l T o x i c o l 通 过 与 雌 激 素 受 体 结 合 , 竞 争 性 拮 抗 内 源 性 雌 激 素 理 学 杂 志 ) , 2 0 0 3 , 1 7 ( 3 ) : 2 3 5 - 2 4 0 . 的 作 用 外 , 可 能 还 与 其 通 过 活 化 P X R , 诱 导 C Y P 3 A 4 , [ ] , , , , , , 6 L u o G C u n n i n g h a m M K i m S B u r n T L i n J S i n z M 加 速 内 源 性 激 素 的 代 谢 , 降 低 其 血 液 和 组 织 中 的 激 e t a l . C Y P 3 A 4 i n d u c t i o n b y d r u g s : c o r r e l a t i o n b e t w e e n a 素 水 平 有 关 , 这 有 待 进 一 步 研 究 证 实 。 此 外 , 植 物 雌 p r e g n a n e X r e c e p t o r g e n e a s s a y a n d C Y P 3 A 4 e x p r e s s i o n i n 激 素 活 化 将 会 导 致 其 他 调 节 基 因 的 改 变 , P X R P X R h u m a n h e p a t o c y t e s [ J ] . D r u g M e t a b D i s p o s , 2 0 0 2 , 3 0 ( 7 ) : 如 相 酶 中 的 C Y P 2 C , C Y P 2 B ; 相 酶 中 的 G S T 、 ? ? 7 9 5 - 8 0 4 . 葡 萄 糖 醛 酸 基 转 移 酶 ( ) 等 ; 转 运 子 中 的 多 U D P ? U G T [ ] , , 7 H o P C S a v i l l e D J W a n w i m o l r u k S . I n h i b i t i o n o f h u m a n 重 耐 药 基 因 ( ) 、 多 重 耐 药 蛋 白 ( ) 和 M D R 1 M R P 2 C Y P 3 A 4 a c t i v i t y b y g r a p e f r u i t f l a v o n o i d s , f u r a n o c o u m a r i n s [ ] 1 4 、 有 机 阴 离 子 转 运 多 肽 ( ) 等 。 以 上 多 M R P 3 O A T P 2 [ ] , , a n d r e l a t e d c o m p o u n d s J . J P h a r m P h a r m S c i 2 0 0 1 4 个基 因 的 改 变 也 会 导 致 药 物 和 其 他 化 合 物 体 内 代 ( 3 ) : 2 1 7 - 2 2 7 . [ ] , , , , 谢 、 转 运 、 排 泄 等 多 方 面 的 改 变 。 8 X i e W R a d o m i n s k a ? P a n d y a A S h i Y S i m o n C M N e l s o n M C , O n g E S , e t a l . A n e s s e n t i a l r o l e f o r n u c l e a r r e c e p t o r s 用 瞬 时 转 染 报 告 基 因 试 验 检 测 转 录 C Y P 3 A 4 S X R / P X R i n d e t o x i f i c a t i o n o f c h o l e s t a t i c b i l e a c i d s [ J ] . 水 平 的 改 变 具 有 高 效 、 敏 感 等 特 点 , 是 快 速 筛 检 , , ( ) : P r o c N a t l A c a d S c i U S A 2 0 0 1 9 8 6 3 3 7 5 - 3 3 8 0 . 诱 导 物 的 理 想 方 法 , 但 要 全 面 阐 述 酶 的 诱 导 C Y P 3 A 4 [ 9 ] C o u m o u l X , D i r y M , B a r o u k i R . P X R ? d e p e n d e n t i n d u c t i o n 或抑 制 , 还 应 在 蛋 白 表 达 水 平 和 酶 活 性 水 平 进 行 鉴 o f h u m a n C Y P 3 A 4 g e n e e x p r e s s i o n b y o r g a n o c h l o r i n e p e s t i ? 定 。 此 外 , 体 外 试 验 结 果 向 体 内 外 推 也 需 非 常 慎 重 , c i d e s [ J ] . B i o c h e m P h a r m a c o l ,2 0 0 2 , 6 4 ( 1 0 ) : 1 5 1 3 - “ 人 化 小 鼠 ” 模 型 ( ) , 是 体 内 筛 h u m a n i z e d m o u s e m o d e l 1 5 1 9 . [ ] 1 5 检 诱 导 物 的 理 想 模 型 。 本 实 验 的 筛 选 C Y P 3 A 4 [ 1 0 ] T a k e s h i t a A , K o i b u c h i N , O k a J , T a g u c h i M , S h i s h i b a Y , 结 果 , 可 作 为 今 后 进 一 步 深 入 研 究 植 物 雌 激 素 与 O z a w a Y . B i s p h e n o l ? A , a n e n v i r o n m e n t a l e s t r o g e n , a c t i ? P X R 及 C Y P 3 A 4 的 相 互 关 系 的 基 础 。 , v a t e s t h e h u m a n o r p h a n n u c l e a r r e c e p t o r s t e r o i d a n d x e n o ? b i o t i c r e c e p t o r ? m e d i a t e d t r a n s c r i p t i o n [ J ] . E u r J E n ? 致 谢 衷 心 感 谢 ( , , ( ) : D r . R o n a l d M . E V A N S H o w a r d H u g h e s M e d i ? d o c r i n o l 2 0 0 1 1 4 5 4 5 1 3 - 5 1 7 . c a l I n s t i t u t e , U S A ) , D r . W e n X I E 和 D r Y i n M U ( C e n t e r f o r P h a r ? [ 1 1