miR-122在Ⅲ期肝癌细胞中的表达及其与血清肿瘤标志物AFP水平的关系

miR-122在Ⅲ期肝细胞癌中的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达及其与血清肿瘤标志物 AFP水平的关系 [摘要] 目的探讨miR-122在Ⅲ期肝细胞癌表达水平及其与血清肿瘤标志物AFP水平的关系。方法用荧光定量PCR分别检测24例Ⅲ期肝细胞癌患者肝癌组织中miR-122的表达水平,电化学发光免疫分析法检测Ⅲ期肝癌患者术前血清AFP水平,分析miR-122的表达水平与血清AFP的关系。结果肝癌细胞中miR-122表达水平是癌旁组织的(30.84±22.56)%,血清AFP水平范围为38~1523μg /L,均值为(782±446)μg /L,miR-122在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异与血清AFP水平相关。结论miR-122在肝癌细胞的表达水平下降,这种下降与血清AFP水平增高程度呈现正相关关系。 [关键词] 肝细胞癌;miR-122;表达;甲胎蛋白; [中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1 Expression of miR-122 in stage Ⅲhepatocellular carcinoma cells and its correlations with the levels of tumor marker AFP in serum [Abstract] Objective To investigate and analyze the expression of miR-122 in stage Ⅲhepatocellular carcinoma cells and its correlations with the levels of tumor marker AFP in serum. Methods The quantitative reverse transcription –PCR were used to detect the expression of miR-122 in 24 cases of primary stage Ⅲhepatocarcinoma,and electrochemical immunoassay was used to detect the levels of AFP in serum before operation. Results The expression of miR-122 in hepatocarcinoma was (30.84±22.56)% of liver tissues,the range of serum AFP level was 38 ~ 1523μg / L, the mean of serum AFP level was (782 ± 446) μg / L, the low expression of miR-122 in stage Ⅲliver cancer was positively correlated with serum AFP level of the patients.Conclusion Downregulation of miR-122 in hepatocarcinoma was positively correlated with the increase of serum AFP level. [Key Words] Hepatocellular carcinoma; miR-122; Expression; AFP 0 引言 miRNA (microRNA)是一类广泛存在于真核生物长度为21~25nt 的非蛋白质编码小RNA。它们能以序列特异性方式调节基因表达,在细胞发育、凋亡、代谢方面都起着不容忽视的作用,从而受到广泛关注[1]。miRNA通过与靶基因mRNA碱基配对引导RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex, RISC)降解mRNA或抑制mRNA的翻译,从而在转录后水平调控蛋白表达。miRNA参与从早期发育到细胞分化、凋亡等生命过程的各个过程,随着对miRNA 研究的深入,在各种人类肿瘤中陆续检测到miRNA表达水平的变化,而且在不同类型肿瘤中有不同组合的miRNA异常表达谱,提示肿瘤miRNA表达谱具有组织特异性;多个miRNA与肿瘤的发生、病理分级、临床分期及预后、转归等相关[2-4]。 miR-122是肝组织中特异性MicroRNA,长度为22个核苷酸,在正常肝细胞中表达,而在肝癌细胞中表达水平下调,有研究表明miR-122 的表达与肝炎病毒复制及肝癌形成存在相关性[5]。本文通过对miR-122在Ⅲ期肝细胞癌患者的肿瘤细胞中的表达情况进行研究,探讨其与血清甲胎蛋白(alpha-feto protein, AFP)的关系。 1资料与方法 1.1组织标本肝癌组织标本均来自我院手术患者,分别取自肿瘤中央部位及癌旁配对肝组织,标本液氮速冻后保存备用,同时进行病理检查,所有病例均经病理学证实为Ⅲ期原发性肝癌。.癌与癌旁配对标本共24例,其中男15例,女9例,年龄42~69岁,病理证实均为肝细胞癌,高中分化20例,低分化4例。 1.2miR-122表达的qRT-PCR(quantitative reverse transcription –PCR)检测Trizol提取肝癌组织和癌旁正常组织的mRNA,M-MLV逆转录酶进行逆转录,逆转录引物为5’GTCGTATCCAGTGCAGG GTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACAAAC3’;RT-PCR的引物为: 5’GCCGTGGAGTGTGACAATGCT3’,5’GTGCAGGGTCCGAGGT3’,内参基因采用U6 RNA。试剂采用FastStart DNA Master SYBR Green Ⅰ试剂盒, PCR条件为95℃15 S,60℃30 S,进行40个循环。相对定量 计算公式 六西格玛计算公式下载结构力学静力计算公式下载重复性计算公式下载六西格玛计算公式下载年假计算公式 : 肿瘤组织miR-122相对表达量=2-△△Ct,其中-△△Ct =(Ct1-Ct2)-(Ct3-Ct4),Ct1为癌旁组织miR-122的Ct值,Ct2为癌旁组织U6 RNA的Ct值,Ct3为肿瘤组织miR-122的Ct值,Ct4为肿瘤组织U6 RNA的Ct值。 1.3患者血清AFP的检测手术患者术前抽取空腹静脉血约5mL,离心分离血清,在2小时内采用电化学发光免疫分析仪检测,由我院同位素室进行,正常参考值:AFP 0 ~8.1μg /L。 1.4统计学分析实验数据用均数± 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差表示,采用Pearson直线相关分析,以P<0.05为有统计学差异,采用SPSS 14.0统计软件进行。 2结果 2.1 miR-122表达的qRT-PCR检测肿瘤组织miR-122相对表达量=2(Ct1-Ct2)/2(Ct3-Ct4),Ct1为癌旁组织miR-122的Ct值,平均值为2 3.22±1.68, Ct2为癌旁组织U6 RNA的Ct值,平均值为18.64±1.36;Ct3为肿瘤组织miR-122的Ct值,平均值为25.10±1.84,Ct4为肿瘤组织U6 RNA的Ct值,平均值为18.42±1.56。△△Ct的平均值为2.10±1.14,肿瘤组织中miR-122的量为癌旁正常组织的(30.84±22.56)%。图1示一例标本miR-122的qRT-PCR检测结果。在20例高中分化肝癌中,miR122在肿瘤组织中是癌旁组织的(3 4.17±22.68)%;而在4例低分化肝癌中,miR-122在肿瘤中组织中的表达更低,仅为癌旁组织的(14.19± 5.01)%,与高中分化的肝癌比较有统计学意义(P=0.02)。 图1 一例标本miR-122的qRT-PCR检测结果 2.2血清AFP水平24例患者血清AFP水平均不同程度的升高,血清AFP水平范围为38~1523μg /L,均值为(759±463)μg /L。在20例高中分化肝癌中,血清AFP水平均值为(738±501)μg /L;在4例低分化肝癌中,血清AFP水平均值为(794±256)μg /L,与高中分化的肝癌比较无统计学意义(P=0.76)。 2.3 miR-122表达与血清AFP水平的关系分析miR-122在肝癌组织和癌旁组织相对表达量(△△Ct值)与患者血清肿瘤标志物AFP水平数值的特点,发现miR-122表达下调的趋势与AFP升高的水平有所联系,即miR-122表达下调的患者,血清中AFP水平相应较高(图2)。进一步进行Pearson直线相关分析后, 发现△△Ct与血清AFP水平呈正相关(r=0.9170,P<0.01)。 图2 miR-122在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异与血清肿瘤标志物AFP水平 的相关性分析散点图 3 讨论 近年来,miRNA在肿瘤发生和发展中的作用成为生物医学领域的研究热点,研究发现miRNA的表达失衡与多种肿瘤的发生密切相关,miR-122是肝脏中特异性高表达的MicroRNA,但在肝癌细胞中表达水平则明显下调[5]。miR-122表达水平下调能够促进肿瘤的转移和进展,使其恶性特征更为明显,恢复肝癌细胞的miR-122表达可以逆转癌细胞的上皮样特征,使其生长、侵袭、转移以及克隆形成能力明显下降,甚至可以降低其促血管生长的活性[6]。Fornari等最近的研究表明,miR-122能影响p53蛋白的稳定性和转录活性,进而调节细胞周期蛋白Cyclin G1的表达,最终来降低癌细胞的侵袭性[7]。尽管如此,但miR-122表达下调在肝癌发生过程中属于伴随事件还是一个潜在的生物标志,还尚无定论。 目前临床上常用的肝癌诊断肿瘤标志物是AFP。然而,AFP的敏感度和特异度并不十分理想,在妊娠妇女、急慢性肝炎、生殖腺肿瘤和胃肠道肿瘤等人群中AFP亦可能升高,部分肝癌患者AFP并不升高,呈AFP阴性,AFP的水平与 肿瘤恶性程度也没有直接相关性[8],本研究也显示不同分化程度的肿瘤的AFP 水平没有差异性。肝癌细胞miR-122的表达水平显著下调,肝癌细胞中miR-122表达水平是癌旁组织的(30.84±22.56)%,在低分化肝癌中表达更低,结果与文献中报道结果相一致[9],且高中分化肝癌与低分化肝癌相比,miR-122水平的降低有差异性(P=0.02)。对miR-122在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异与血清肿瘤标志物AFP水平进行相关性分析,发现miR-122在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异与血清AFP水平正相关,即miR-122下调的程度与血清AFP水平增高程度呈现正相关关系。不同分化程度的肿瘤的血清AFP水平没有差异性,肿瘤组织中miR-122水平的降低有差异性,而miR-122在肿瘤组织中水平的降低与血清AFP水平正相关,这提示miR-122可能是肝癌更敏感的肿瘤标志物。但由于样本量较少,还需要进一步的研究。 最近我国学者利用包括miR-122在内的7个血浆microRNA建立了一个诊断模型,该检测方法对小于2cm的肝癌诊断准确率接近90%,效果优于AFP[10]。可以推测miR-122在原发性肝癌组织表达下调可能直接或间接地参与了AFP基因的表达调控,这种下调早于血清AFP水平出现变化,因此miR-122有可能成为新的肝癌早期诊断和肿瘤标志物,对寻找特异性及敏感性均较好的早期诊断标志及肿瘤标志物对原发性肝癌的诊断和治疗意义重大。 [参考文献] 1Esteller M. 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