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血液分析仪白细胞分类报警阈值的ROC曲线分析.doc

血液分析仪白细胞分类报警阈值的ROC曲线分析

张芳林
2017-10-14 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《血液分析仪白细胞分类报警阈值的ROC曲线分析doc》,可适用于高等教育领域

血液分析仪白细胞分类报警阈值的ROC曲线分析血液分析仪白细胞分类报警阈值的ROC曲线分析验医学年第卷第LaboratoryMedicine,VolNo文章编号:()中图分类号:R文献标识码:A血液分析仪白细胞分类报警阈值的ROC曲线分析邓明凤,王昌富,肖秀林,陈永玲,王柳燕(华中科技大学同济医学院附属荆州医院医学检验部,湖北荆州)摘要:目的应用受试者工作特征(ROC)曲线对CELLDYN血液分析仪白细胞分类结果进行分析,建立本室最佳报警参考阈值方法将例患者静脉血标本以EDTAK抗凝,分别用仪器和显微镜进行白细胞分类,以SPSS统计软件的ROC曲线对种分类参数不同阈值进行分析,选择曲线下面积(AUC)最大者为本实验室报警阈值,并与仪器设置阈值进行比较结果经ROC曲线分析,仪器设置各参数阈值分别为中性粒细胞(N)或,淋巴细胞(L)或,单核细胞(M),嗜酸性粒细胞(E),嗜碱性粒细胞(B)诊断试验整体准确性中等(AUC=)当N或N,L或L,M,E,B时AUC最大(AUC=),诊断试验整体准确性优秀最佳报警阈值对显微镜分类正常或异常标本判别的敏感度,特异度和准确度分别为,和,明显优于仪器设置阈值结论实验室应建立自己的报警阈值,以提高显微镜协同工作的有效性关键词:受试者工作特征曲线白细胞血液分析仪报警阈值AnalysisofbloodcellsdifferentialalarmthresholdvaluesofthebloodanalyzerwithreceiveroperatingcharacteristiccurveDENGMingfeng,WANGChangfu,XAOXiulin,CHENYongling,WANGLiuyanDepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedJingzhouHospital,ton#MedicineCollege,HuazhongScienceandTechnologyUniversity,HubeiJingzhou,ChinaAbstract:bjectiveToevaluatethewhitebloodcelldifferentialresultsofthebloodanalyzerCELLDYNbyreceiveroperatingcharacteristic(ROC)curveandestablishthebestalarmthresholdvalueofourlaboratoryMethodsvenousbloodsamplestreatedwi血dipotassiumethylenediaminetetraaceticacid(EDTAK,)werecollectedThewhitebloodcelldifferentialcountsofeachsampiewasperformedwithboththeinstrumentandmicroscopyROCcurvewasusedtoevaluatethethresholdvaluesofthefivewhitebloodcelldifferentialparametersThethebiggestdifferentialthresholdvalueoftheareaunderthecurve(AUC)waschosenasthelaboratory’sdifferentialalarnlthresholdvalueandwascomparedwiththethresholdsetbythejnstrumentResultsAswasanalyzedbyROCcurve,thethresholdvaluesoftheparameterssetbytheinstrumentwereneutrophil(N)or,lymphocyte(L)or,monocyte(M),eosinophil(E),basophil(B)andwiththesevaluesthegeneralaccuracyofdiagnosiswasmoderateWhenthethresholdvaluesweresetasNorN,LorL,M,E,B,AUCwasthebiggest(AUC=)andthegeneralaccuracyofdiagnosiswasoptimaThesensitivity,specificityandaccuracyoftheoptimalalarmthresholdvalueswere,andinjudgmentofthenorrealandtheabnormalsamplesConclusionsSettingupappropriatealarmthresholdvaluesinthelaboratorycanimprovecooperationefficiencyofinstrumentalandmicroscopicaldeterminationKeywords:ReceiveroperatingcharacteristiccurveWhitebloodcellBloodanalyzerAlarmthresholdvalue全自动血液分析仪是血液常规计数检查的主要仪器,由于电阻检测法,光学检测法及联合检测法等新技术的广泛应用,血液分析仪中白细胞分类计数有了很大的发展,但并不能完全取代显微镜检查J我们应用受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC曲线)对CELLDYN血液分析仪的白细胞分类报警阈值进行分析和临床诊断试验评价,建立本室最佳报警阈值材料和方法一,仪器和材料CELLDYN血液分析仪,原厂配套试剂及TRILEVELWHOLEBLOODREFERENCE作者简介:邓明凤,女,年生,学士,主管技师,主要从事血液学检验工作检验医学年第l卷第期LaboratoryMedicine,VolNoCONTROL全血质控物均为美国Abbott公司生产CX显微镜由日本OLYMPUS公司生产瑞特姬姆萨染液EDTAK硅化抗凝管二,检测对象本院年月,年月住院患者例,男例,女例,年龄,岁,参照仪器设置的白细胞分类报警阈值无报警提示者例,有一至多项报警者例,其中各种急慢性白血病例,综合病例例,各种白血病均参照标准明确诊断J三,方法仪器分析所有病例均采取静脉血,以EDTAK抗凝,CELLDYN血液分析仪经厂家校准,严格按说明书操作,所有样本在采样后h内完成分析显微镜分类所有病例均进行显微镜分类计数个白细胞,计算百分率四,统计学方法参照全国临床检验操作规程白细胞分类计数正常参考值』,对显微镜分类结果进行归类,超过正常值者均判为””(阳性),否则判为””(阴性),仪器分类结果与显微镜分类相符者为真阳性或真阴性,不相符者为假阳性或假阴性,应用SPSS统计软件对仪器法分类数据进行分析处理,得出各种白细胞分类参数的ROC曲线,同时将各项参数分别设置,个阈值点,绘制ROC曲线,计算曲线下面积(areaunderthecurve,AUC),选取AUC值最大者为本室报警阈值,计算报警阈值对显微镜分类正常和异常样本的敏感性,特异性及其他指标,并与仪器设置阈值进行对比结果一,白细胞分类计数方法参照全国临床检验操作规程,全部病例经显微镜分类镜检,例正常,例异常异常样本中,白血病组均检出原始和或幼稚细胞综合组有例中性粒细胞(neutrophil,N)增多或减少,例淋巴细胞(ymphocyte,L)增多,例单核细胞(monocyte,M)增多,例嗜酸性粒细胞增多(eosinophil,E),例检出异型淋巴细胞二,ROC曲线分析仪器法白细胞分类各参数ROC曲线分析,N,L,M,E,嗜碱性粒细胞(basophil,B)独立判别的AUC值分别为,,,,对N,L,M,E,B各设立个阈值点,建立ROC曲线,其中的种阈值ROC曲线如图一特异性注:一一:参考曲线…:N或O,L或O,M,E,BO,ACU=:N或O,LIO或OME,BI,ACU=一一:N或LLO或O,M,E,BI,ACU~一一:N或,L或O,M,EBIACU=图白细胞分类各参数不同阈值时ROC曲线当N或,L或,M,E,B时,AUC值最大(AUC=),选择该点为本室报警阈值最佳报警阈值和仪器设置阈值N或,L或,M,E,B(AUC=)ROC曲线见图注::参考曲线:…:仪器设置阈值,AUC=:最佳阈值,AUC=图白细胞分类各参数最佳阈值和仪器设置阈值ROC曲线三,本室最佳报警阈值与仪器设置阈值对显微镜分类正常和异常样本的临床诊断评价见表检验医学年第卷第期LaboratoryMedicine,VolNo表最佳阈值和仪器设置阈值对显微镜分类正常和异常样本的临床诊断评价讨论CELLDYN血液分析仪采用光学检测法(WBCopticalcount,WOC)进行白细胞分类计数,将患者的血液与一定量的鞘液混合,形成一个极细的液流穿过激光束,每个细胞被激光照射后产生光吸收,光散射,反射荧光,仪器通过检测这些与细胞结构有关的散射光和反射荧光,而将血液中的白细胞分为N,E,B,L和M种类型国外对包括CELLDYN在内的多种五分群血液分析仪与目测分类进行了比较,结果表明仪器法白细胞分类已进入到可与目视显微镜相当的水平,但是仪器法白细胞分类并不能完全替代显微镜观察J年前,我们曾探讨了三分群血液分析仪选择性显微镜检查对白细胞分类的质量保证措施j,许多年来关于血液分析仪显微镜分类的标准亦多有报道,但大多数标准是凭借操作者的经验制定的,由于数据未经分析,有很大的主观性,不同的操作者对仪器控制的标准也不同,尤其对于经验不足的操作者来说,更容易导致误诊和漏诊为保证检验结果的临床使用价值,循证检验医学提出了诊断试验评价标准,评价的指标亦不断完善ROC曲线可以确定诊断试验的最佳临界点阳性或阴性预测值越大,对确诊或排除待查疾病越有把握而敏感性,特异性和似然比能反应诊断试验的真实性,当阳性似然比或阴性似然比时试验的临床性能好采用ROC曲线等分析方法确定最佳诊断界值后,再计算诊断试验的评价指标将更有实际意义因此,我们应用ROC曲线分析了CELLDYN血液分析仪白细胞分类结果,经过ROC曲线判别软件分析,筛选出了最佳敏感性及特异性相结合的报警阈值,AUC值达到,诊断试验整体准确性优秀,明显好于仪器设置的报警阈值(AUC=)最佳报警阈值对显微镜分类正常或异常的样本判别敏感性,特异性和准确性分别为,,,其他各种临床诊断指标结果也明显优于仪器设置的报警阈值,提高了显微镜协同工作的有效性和诊断试验的临床应用价值,也说明了实验室建立自己的报警阈值的必要性结合显微镜分类,我们发现CELLDYN血液分析仪对一些形态不规则的细胞,如大淋巴细胞,杆状核粒细胞,异形淋巴细胞等的分辨率不高,容易划分为M,导致M异常报警率过高,这也证实了仪器法分类计数时形态学观察的重要性虽然大多数报道认为B在仪器分类中的可信度不高,但本组实验表明,当B增高时,应高度警惕慢性粒细胞白血病(CML)或CML相关性疾病在本实验中,虽然获得了本实验室白细胞分类计数的最佳报警阈值,但依然有例治疗后的急性白血病(例L,例L)不能判别,这可能是由于残存的白血病细胞数太少(分别为和O),或者是由于报警信息不仅限于白细胞分类参数所致,有关白血病显微镜镜检标准有待进一步探讨和完善参考文献李顺义应重视血常规检验中的形态学观察J中华医学检验杂志,,:张之南血液病诊断及疗效标准M北京:北京科学出版社,叶应妩,王毓三全国临床检验操作规程M第版南京:东南大学出版社,HarrisN,JouJM,DevotoG,etaPerformanceevaluationoftheADVIAhematologyanalyzer:aninternationalmulticenterclinicaltria『JLabHematol,,:KondoH,AkiyamaT,TatsumiN,etaPerformanceevaluationofthecompletebloodcountandwhitebloodcelldifferentialparametersobtainedusingacelhacFautomatedhematologyanalyzerJLabHematol,,:KendallR,BenoitE,BogiagesJ,etaPerformanceevaluationoftheAbbottCellDynautomatedhematologyanalyzerJLabHematol,,:邓明凤,王昌富,李莉,等选择性显微镜检查对检验医学年第l卷第期LaboratoryMedicine,VolNo仪器法白细胞分类计数的质量保证J实用医学检验杂志,,:熊立凡,王鸿利循证检验医学能为临床医学提供决策和证据J中国实验诊断学,,:(收稿日期:)(本文编辑:范基农)(上接第页)GAACGCATF:SRYRP:一GCCATCTrGCGCCTCTGAT一SRYMGB荧光探针:r(FAM)ATCGTGTGGTCTCGCMGB方法孕妇血浆DNA抽提按QIAampBloodKit试剂盒说明书进行RQPCR总体积:Qiagen公司PCR反应试剂盒混合液trl,引物trl,探针l,模板DNAtrl,加水至l扩增条件:预热Cmin,Cmin,Cs,Clmin个循环扩增产物l做gL琼脂糖凝胶电泳新生儿性别判断标准以出生后的性别为准二,结果RQPCR可检测到早产孕妇血浆游离胎儿DNA且敏感度高结合RQPCR的扩增曲线将扩增产物进行电泳,结果发现经此方法得到的bpSRY基因扩增片段为预期的片段位置将阳性对照总DNA定量后梯度稀释做敏感度试验,有阳性扩增曲线出现的最低量即为此方法可以检测到的最高灵敏度原始DNA模板量分别为mg,mg,lmg,g,trg,g,ng,ng,ng,Pg的条扩增曲线均可见当DNA模板量为g时,得到的扩增曲线最为清晰,即使在Pg时,扩增曲线仍为阳性RQPCR方法测定早产母血中胎儿DNA的临床价值例研究组孕妇胎儿出生后性别判定例孕妇所孕胎儿为男胎,例女胎对其血浆DNA进行RQPCR检测,在怀有男胎的例孕妇中,例有明显扩增曲线,PCR产物电泳出现SRY基因扩增带,大小位于bp处,检出率为()怀有女胎的例孕妇均无明显扩增曲线及阳性扩增带,假阳性率为从本研究的结果来看,RQPCR测定母血中胎儿DNA其特异度,灵敏度,准确率为,见表表例早产孕妇血浆中胎儿DNA的检测结果(例数)三,讨论由于母血浆中游离胎儿DNA含量极微,因此采用敏感有效的DNA提取技术就显得尤为重要本研究中我们用QIAampDNABloodKit替代传统DNA提取方法提取孕妇血浆中的游离胎儿DNA,并加人多聚脱氧腺苷酸(PolydA)以封闭非特异性物质,提高了PCR反应的敏感性我们的研究结果证实孕妇血浆中存在着游离胎儿DNA,应用RQPCR检测早产孕妇血浆中SRY基因发现例孕男胎的早产孕妇中,例有明显的PCR扩增曲线,灵敏度为,高于一般的PCR,这与国外结果相一致J例孕女胎孕妇无一例出现了阳性结果,特异性为,总体的检测准确率为,满足I临床所需在早产孕妇中的SRY基因检测敏感性高于正常孕妇,这可能是早产孕妇中所含胎儿DNA量要高于正常孕妇,这一结论国外学者亦有证实分析例假阴性的原因可能为:()孕妇个体间的差异,即凋亡的胎儿细胞释放入母血的时间在不同个体间存在差异()血浆中胎儿DNA太少,达不到扩增条件所要求的最低模板量()血浆样本未及时处理引起DNA模板降解()DNA抽提操作失误引起提取液纯度不够另外,在对例妊娠女胎孕妇血浆中DNA检测SRY基因时,无一例出现阳性结果,说明此方法特异性高,不会出现误诊的情况,能准确的指导I临床将这种灵敏度更高,特异度更好的检测胎儿游离DNA的方法应用于早产孕妇的检测,将有助于临床对早产孕妇孕期的监测以及研究早产发生的病理生理过程参考文献LoYM,CorbettaN,ChamberlainPF,etaPresenceoffetalDNAinmaternalplasmaandserumJLancet,,:HondaH,MiharuN,OhashiY,etaFetalgenderdeterminationinearlypregnancythroughqualitativeandquantitativeanalysisoffetalDNAinmaternalserumJHumGenet,,I:LeungTN,ZhangJ,L丑uTK,etaMaternalplasmafetalDNAasamarkerforpretermlabourJLancet,,:(收稿日期:)(本文编辑:范基农)

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