三聚氰胺的检测

三聚氰胺(melamine)简称三胺, 学名三氨三嗪, 别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺,分子式:C3N6H6、C3N3(NH2)3 。分子量:126.12,是一种重要的氮杂环有机化工原料三聚氰胺显弱碱性,能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐。在强酸或强碱液中,三聚氰胺发生水解,胺基逐步被羟基取代,生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物。 三聚氰胺与醛反应制成树脂,三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料,防火耐热且有很高的稳定性,用于生产塑料、厨房用具、防火纤维、商业滤膜、胶水和阻燃剂,部分亚洲国家,也被用来制造化肥。 三聚氰胺检测方法汇总 GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺 Spectra-Quad实现三聚氰胺含量在线检测 超高效液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺 反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量 高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺 高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量 高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量 固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺 液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氰胺 液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留 一.ASB亲水色谱柱 (一)实验仪器与条件 Agilent 1100高效液相色谱仪(美国,Agilent公司);二极管阵列检测器(DAD),检测波长240nm,柱温:40℃。 (1)Agela VenusilTM ASB C18(4.6×250mm);缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠;流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min。 (2)Agela VenusilTM ASB C8( 4.6×250mm);流动相:缓冲液:乙腈=85:15;缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0;流速:1.0mL/min; 离子交换固相萃取柱Agela ClearnertTM PCX(北京艾杰尔科技有限公司) (二)实验试剂与样品 宠物饲料样品(农业部饲料供应中心提供);甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供;氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司;三聚氰胺 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司);甲醇为色谱纯,其他均为化学纯。 (三)实验步骤 2.1样品前处理方法 (1) 标准样品配制:取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液,使用时,以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。 (2) 提取:称取饲料样品5g,加入50ml 0.1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL 2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。 (3) 净化(PCX小柱,60mg/3mL) : a) 活化及平衡:3mL甲醇,3mL水 b) 上样:加入提取液3mL c) 淋洗:3mL水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。 d) 洗脱:5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。 e) 浓缩:50℃,氮气吹干,20%甲醇/水定容至2mL,HPLC分析或衍生后GC/MS分析。 二.三聚氰胺LC-MS检测方法 (一)实验试剂: (1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺 酸钠;流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min。 (2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流动相:缓冲液:乙腈=85:15;缓冲 液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0;流速:1.0mL/min; (3)离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰尔科技有限公司 (二)实验样品 宠物饲料样品;甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供;氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司;三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司);甲醇为色谱纯,其他均为化学纯。 (三)实验步骤: 样品前处理方法 (1)标准样品配制:取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm 的标准溶液,使用时,以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。 (2)提取:称取饲料样品5g,加入50ml0.1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。 (3)净化(PCX小柱,60mg/3mL): a)活化及平衡:3mL甲醇,3mL水 b)上样:加入提取液3mL c)淋洗:3mL水;3mL甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。 d)洗脱:5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。 e)浓缩:50℃,氮气吹干,20%甲醇/水定容至2mL,HPLC分析或衍生后GC/MS分析。 三、三聚氰胺HPLC-UV检测方法 (a)色谱柱:VenusilASBC84.6×250mm;标准:FDA方法;流动相:缓冲液:乙腈=85: 15;缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0;流速:1.0mL/min;柱温:40oC;波长:240nm (b)色谱柱:VenusilASB-C184.6×250mm;标准:中国农业部颁标准方法;缓冲液:10mM 柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min;柱温:40℃;波长:240nm 空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296% 四、三聚氰胺LC-MS检测方法 由于FDA公布的HPLC-UV方法中,流动相添加了离子对试剂,因此限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法,三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,不能得到较好的分离定量〔3〕。 基于此问题,艾杰尔科技公司自主开发了新的方法,采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱,不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离。因此方法中流动相不含离子对试剂,可以用于质谱检测。与FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比较,该方法大大降低了最低检测限(MSD:0.5ppm;UV:2ppm),提高了检测灵敏度。 缓冲液:10mM的NH4AC; 流动相:Buffer::ACN=95:5;流速:1.0mL/min;进样量:样品先用70%ACN溶解成约1mg/mL,用ACN稀释成0.1mg/mL,进10uL;柱温:40℃;波长:240nm 阳离子交换柱(PCX) 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物),净化过程一般应选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上,具有阳离子交换和反相吸附两种机理,并具有以下优点: a)可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂),使样品更干净,提高检测的灵敏度。 b)批次重复性好。 c)回收率高,重现性好,即使小柱跑干也可 LC-MS方法优点 (1)检测过程简便:无须添加离子对试剂,三聚氰胺就可得到良好的保留与分离, 避免了配制离子对流动相的复杂过程。 (2)提高了检测的灵敏度:无离子对试剂,可以用于质谱检测器,大大降低了最 低检测限(MSD:0.5ppm;UV:2ppm)。 (3)降低了检测成本:不用离子对试剂,就不再需要买价格较贵的离子对试剂了, 从而降低了检测成本。 (4)延长了色谱柱的使用寿命:避免了使用离子对试剂减少色谱柱寿命的影响。 (5)该方法所使用的色谱柱具有通用性:无论是用FDA方法、中国农业部部颁 标准方法和本公司开发的LC-MS方法,使用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色 谱柱均能得到一个很好的检测结果,从而给客户提供了多种选择空间。 要检测乳与乳制品中的三聚氰胺最准的方法是先用红外光谱仪(振动光谱)对样品 中含有的三聚氢胺的结构进行定性检测后(这种检测是非常规检测,只在极少数情 况下采用),再利用普通显微镜对形态进行观察,这样就可以准确判定其是否含有三聚氰胺。显微镜法检测三聚氰胺的步骤有以下几步: 第一步是从收购的牛奶底部取样; 第二步是把样品用离心机离心3min: 第三步是留下离心后的最后一部分(0.1ml); 第四步用吸管把收取的样品移入到载波片了; 第五步是将载波片放到显微镜下用目镜16倍×物镜10倍观测,这样就可以定 性检测出被检样品是否含有三聚氰胺(最小观测值0.2mg/100ml)。