小鼠切牙发育初始阶段中的氟斑牙的致病机制的可能性分析.doc

小鼠切牙发育初始阶段中的氟斑牙的致病机制的可能性 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 .doc 小鼠切牙发育初始阶段中的氟斑牙的致病 机制的可能性分析 -->小鼠切牙发育初始阶段中的氟斑牙的致病机制的可能性分析 摘要:目的 通过观察慢性氟中毒作用下小鼠切牙成釉细胞形态学变 化,探讨氟斑牙的形成机制。方法 建立小鼠氟斑牙动物模型,在不同 时期肉眼观察成活小鼠切牙颜色及釉质表面变化,45 d后处死动 物,HE染色,光镜观察小鼠切牙成釉细胞各个时期的细胞形态学变 化。结果 随着小鼠日常饮用水中氟化钠浓度的增加和时间的延长, 小鼠切牙氟斑牙症状加重;成釉细胞出现扭曲变形、正常的高柱状形 态丧失、胞内出现空泡及大小不等的黑色颗粒、托姆斯突被异位物 质压迫等细胞形态学改变突出。结论 氟对小鼠切牙的毒性效应在 其发育初始阶段即已产生影响,并与时间和剂量有密切关系。从小鼠 切牙发育初始阶段研究氟斑牙的致病机制可能会有所启示。 关键词:氟 成釉细胞 牙 ABSTRACT:Objective To investigate changes in ameloblasts of incisor under chronic fluorine poisoning.Methods The mice dental fluorosis model orphologic changes in every stage ofmouse incisor ice eloblasts of their incisor fluorideand time morphological changes in the mice incisor gradually aggravated and the ameloblast distorted and lost itsnormal column contour, and vacuoles and black granules of various sizes appeared. The Thomas process aterial.Conclusion The toxic effect of fluorine on mouse incisor begins to shoent, e and dose. The fluorosis mechanism ent. KEY eloblast; tooth 氟斑牙是牙齿在形成矿化过程中,机体持续摄取过多的氟而造成的牙 釉质矿化和发育异常,其致病机制尚不清楚。以往的研究主要集中在 釉基质形成后矿化过程中,而对成釉细胞发育初期氟的毒性效应研究 甚少。有研究发现牙齿发育过程中过量氟使成釉细胞受到损害,影响 其结构和功能[1]。本实验通过建立氟斑牙动物模型,观察不同时期小 鼠切牙的损害程度和成釉细胞形态改变,以及氟对釉基质形成的影响, 探讨氟斑牙致病机制。 1 材料和方法 1.1 实验动物分组 选用健康雄性昆明小鼠18只(第四军医大学实 验动物中心提供),体重20~25 g,随机分为空白对照组、低氟组和高氟 组,每组6只。常规饲料成分比为:小麦20、大米23、玉米14、豆饼17、鱼粉10、麦麸12、鸡蛋2、多种维生素1、石粉0.5、磷酸钙0.5。日常饮用分别为:去离子水、去离子水配制50 mg?L-1和100 mg?L-1氟化钠溶液。小鼠每日饮水量4~6 g。 1.2 实验方法 给药方法:每组小鼠隔离喂养,自动饮食。对照组,饮用去离子水;低氟组饮用50 mg?L-1氟化钠溶液;高氟组饮用100 mg?L-1氟化钠溶液。各组均饲以常规饲料。观察方法:动物饲养期间,在15,30,45 d时肉眼观察并 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 活体动物的上下切牙。观察及分级方法参照文献[2]将切牙氟斑牙分为4级。?:正常鼠牙釉质,橘黄或棕黄色,半透明;?:牙表面细小规则的棕、白色相间横纹;?:不规则棕、白色相间横纹,棕色横纹部分中断消失,其间距(白色带)增宽而不规则;?:大部分棕色横纹消失,整个牙面呈白粉笔样,常伴牙缘缺损。4位检查者分别独立肉眼观察后记录,其结果经Kappa检验。 1.3 病理标本制备 喂养45d后,处死动物,仔细解剖分离下切牙,40 g?L-1甲醛固定24 h,100g?L-1EDTA脱钙3周,脱水透明,石蜡包埋,进行下切牙唇舌向切片,切片厚5μm。常规透明脱水,HE染色,光镜下观察。 2 结 果 2.1 肉眼观察 实验期内无动物死亡,4位检查者各自独立对18只小鼠,共计64颗上下切牙检查记录后,经Kappa检验,具有一致性(Kappa值=0.82)。低氟组与高氟组在喂养30 d后,动物上、下切牙大部分出现?级,?级氟斑牙。45 d后,低氟组有6颗切牙、高氟组20颗切牙出现?级氟斑牙。对照组釉质桔黄或棕黄色,半透明,有光泽,无缺损。对45 d时3个浓度的结果进行有序分组 资料 新概念英语资料下载李居明饿命改运学pdf成本会计期末资料社会工作导论资料工程结算所需资料清单 线性趋势检验,P2.2 光镜观察 对照组:?增殖分化期:小鼠切牙唇侧基底部末端成釉器细胞紧密排列成团,细胞椭圆形,密集、无规则排列,核深染,核大胞浆少,可见到核分裂相。?分泌前期:随着向切端侧移行,内釉上皮细胞逐渐面向星网状层整齐排列,呈柱状,高度逐渐增加,内釉上皮细胞与星网状层细胞之间出现一层扁平状中间层细胞。?分泌期:成釉细胞呈高柱状整齐排列,细胞核位于远心端;成釉细胞牙本质侧出现托姆斯突,进行釉质蛋白的合成,并通过托姆斯突分泌;成釉细胞与成牙本质细胞间可见红染的釉基质,均匀排列整齐,呈现晶体状(图1);随着釉基质分泌减少直至釉质成熟,成釉细胞高度逐渐降低。高氟组:从分泌前期开始出现变化,细胞有丝分裂相明显减少,一些细胞内含较大的黑色颗粒。分泌期内釉上皮细胞排列不整齐,扭曲变形,细胞间隙增宽,正常的柱状形态丧失 -->;胞浆内出现空泡、大小不均的黑色颗粒;托姆斯突不规则,在部分内釉上皮细胞甚至完全缺失,部分区域托姆斯突被侧向异位物质压迫,在细胞下形成囊泡;釉基质易断裂,不均匀,形状不规则(图2)。分泌期向釉基质矿化的过渡期,细胞远端部分出现大空泡和黑色颗粒,托姆斯突变为不规则的多形性。这种形态学变化持续到釉质成熟期,直至细胞高度降低,变为矮柱状。低氟组:氟中毒引起的细胞变化较高氟组不明显,但仍可见部分细胞扭曲变形。 3 讨 论 本实验采用岳林[3]复制氟斑牙动物模型的方法,给予小鼠50 mg?L-1、100 mg?L-1氟化钠溶液日常饮用,45 d后形成典型的氟斑牙模型。小鼠切牙在一生中持续不断地产生新的牙釉质,该模型在同一颗切牙上可以同时观察到成釉细胞的分裂、增殖、分化、成熟,直到牙齿萌出阶段为止的牙齿发育的全过程,因此已成为牙齿发育研究和牙齿生物矿化研究非常理想的动物模型[4]。在牙齿发育期间摄入过量氟能够导致氟斑牙的发生。学者们对氟斑牙的形成机制进行了广泛的研究,推测其可能的机制,有氟可影响体内钙平衡和蛋白基质生物的合成及分泌;对基质蛋白及蛋白酶的直接作用和对成釉细胞和羟基磷灰石晶体的影响等。在这些机制中,偏重认为氟中毒时成熟釉质中蛋白清除延迟,釉原蛋白的保留导致矿化不良和釉质缺损[1]。Bronckerse等[5]通过人牙胚培养研究发现,培养液中氟浓度为25 mg?L-1时,分泌期成釉细胞变矮,极性消失,托姆斯突不规则,甚至消失。侯铁舟等[6]观察到培养液中氟浓度10 mg?L-1时,成釉细胞分化较对照组晚,排列紧密与中间层细胞分界不清,认为氟抑制了成釉细胞的分化及其分泌功能。张建国[7]等在对高氟区意外死亡婴幼儿恒牙胚研究中观察到成釉细胞的胞浆中出现空泡。本实验观察到,慢性氟中毒作用下小鼠切牙成釉细胞各个时期的形态发生改变,有细胞扭曲变形、特征性的细胞内黑色颗粒、空泡、托姆斯突不规则及被异位物质压迫。这些形态变化的出现有可能影响釉基质的分泌矿化。因此认为,氟对小鼠切牙的毒性效应在其发育初始阶段即已产生影响,从小鼠切牙发育初始阶段研究氟斑牙的致病机制可能会有所突破。