关闭

关闭

封号提示

内容

首页 【doc】细菌鞭毛镀银染色法的创新.doc

【doc】细菌鞭毛镀银染色法的创新.doc

【doc】细菌鞭毛镀银染色法的创新.doc

上传者: 恋上肯德基 2017-11-11 评分 5 0 219 30 995 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《【doc】细菌鞭毛镀银染色法的创新doc》,可适用于高等教育领域,主题内容包含【doc】细菌鞭毛镀银染色法的创新细菌鞭毛镀银染色法的创新中华微生物学和免疫学杂志(x年月第卷第l期chnJMiemhioJanu,VI细菌鞭毛镀银符等。

【doc】细菌鞭毛镀银染色法的创新细菌鞭毛镀银染色法的创新中华微生物学和免疫学杂志(x年月第卷第l期chnJMiemhioJanu,VI细菌鞭毛镀银染色法的创新谷海瀛【摘要】目的发明一种新的细菌鞭毛镀银染色方法方法染色媒染剂由A,B种溶液组成,A液是酸化的FeCI溶液,B液是古有甲醛的丹宁酸溶液A,B液混台后,微加热,染馀片s,洗净涂片后镀银染色共有属种株细菌每株菌都进扎固体培养和液体培养进行鞭毛染色,并采用West氏评分法对鞭毛染色质量进行评价结果鞭毛形态及其在菌体的位置极易观察株细菌获得良好的鞭毛染色质量血琼脂平板培养平均每株菌获得分,肉扬培养获得分与些昕杆菌株不同,株非发酵菌血琼脂平板培养鞭毛染色均获得分,而株肠杆菌肉汤培养鞭毛染色获得分以上一些弧苗科细菌鞭毛位置分布因这种培养方法的不同而有差异:并发现l株非群霍乱弧菌有单侧毛和亚扳端毛结论这种鞭毛染色方法操作简单,快速,试剂稳定,重复性好由于可靠性好,可以作为常规方法:非发酵菌适台于固体培养进行鞭毛染色获得最佳效果,液体培养对于一些昕杆菌鞭毛染色更为适合【关键词】细菌鞭毛镀银染色媒染剂培养基A商v盯pIa血lgme~odforstainingnagalaHm}~ngClinicalLaboratoD”lXT~trtmerdH~anProvincia!Po~pb”„sHospitaHaikouPR珊m(E删:clinmierobinf佣mj【AbsObjectiveTodevelopeatewtechniqueforbacterialnaastainingMelhodsReagentAacichzedferriccHofidesalutim~andBI,tannicacidcontainingfoiTflalin瓜mixtureofAandBw拼heatedsh~alystiletip~eEecoveredwiththecooLingmixtureforseeWashedgentlywithdistilledwatertie锄eawerestainedwithsilversolutionslr~nsofgeneraspeciesWeIl~denmostratedforflagellaEachclIh】删smcubetodintoatubeofflagellablothmediumandontoasheepbdagar(SBA)plateMstainedsllleat~wt~TeratedbyW聊smethodResdtsTheflagellaandtheirpositiononthebacteriawereeastiydiseemedunderthemicroscopestraittsoforganismgxowing叭SBAplatesandinbrothmediumhadthehighlymtingswiththeiil~flJlofandeachratingofcultLlofnonfermentativeredsgrownonSBAwoshighlyscoredchfierentfromthatofculturesofemembacteriagrownina髓abrothmediumwithmtingCOleaboveAslsomenofmroraceae,flagenararraJlgementmaydifferwiththetwokit,dsofincubationmediasinglelatemlflagellumandsubtennirmflagellumweredemortsh~atedinsuainfVchoemenonOCtlI璐ssimpleandfastmethodwiththestablemordantgoodinreb出h竹stechniqueovemon~laittratallthediflibinflagellastainingandsocallbel】sedasaroutinemethodNmffermentativebacilligxowingon蛐hdmediumandentea~bacteriagrov,ingltlnaabthweremolesuitableforflagellastainingIKey,a,ord~lBac~faFlagellaStirel”stainMordantC,hare细菌侧毛作为细菌分类主要依据之,说明细菌鞭毛染色在细菌鉴定中是很重要的技术细菌鞭毛染色的方法文献有很多报道,但基本方法可以归纳为:Leifson法,Gray法乜,镀银法”,Ryu法,但这些方法操作复杂或染液不稳定或着色欠佳,尽管科赫(Koch)在一个世纪前就发明了细菌鞭毛染色技术,但至今仍没有,个稳定而简易可推行的方法本文报告一种新的细菌鞭毛镀银染色方法,通过l属种株细菌鞭毛染色证实该方法操作简单,快速,可作为常规方法推广作者单位:海口,海南省人民医院检验科cEaudl:elirmxc,rcbioll~bcr~naU阿n)材料和方法检测技术标准菌株(株】:EcoliATCC,P一MmATCC(ATCC),Lmont~ytogenesATCC,Vparahaemoh~icuria,Ppseudoalcaligenes,Pstulzeri,Sentericasubsparizonae,Ahydrophila,ACtlVit~,Ppudi~,cellyL~,cepacia,A生生堕:i塑堂塑鱼垂堂盘点至】箜婆鲞第期“,S口cm,yrm,Psh一dlo~s,Lmorme)togenes,Prettgedc临床分离菌株(株):Paeruginos~t株,Ppudida株,PpseudoalealM株,SpuCrefittiena株,Pmirabilis株,Ahydrophik,株,c株,Afaecolis株,Pm株,Ecoli株,Cfreuadii株,Srgbrzrge~elg株,Ecl株,P蜘株,St)phi株,Sa~onae株,Snudtophilia株,choleraenonOl株,口pseudomatlei株,Mmorganii株鞭毛肉汤:参照文献配制:Twptose(DIFCO):gL,NaCI:gL,K:gL,pH:,qc灭菌rain菌株培养:所有菌株均分别划线接种血琼脂平板和鞭毛肉汤管种培养基,Oqc培养,h鞭毛肉汤管出现微混浊即在显微镜下观察动力,每株有动力菌分别制备这种培养物的涂片涂片制备:血平板培养物:在处理过的洁净玻片一端加,滴蒸馏水,用灭菌过的接种针蘸取蒸馏水后沾取单个菌落轻轻点于玻片E蒸馏水中,轻轻晃动,使菌体分散于玻片上,室温风干或嚣于温箱干燥ml鞭毛肉汤培养物加人Iml福尔马林,g离心mir,,倾掉清后加人ml蒸馏水轻轻晃动使菌体分散,再离心min,再加人适量蒸馏水,变成微乳混浊,制成涂片染色液配制:媒染剂A:gF,Ci,,mlmolLHCI溶液,室温存放,长期稳定媒染剂B:单宁酸(SIGMA)g溶解于ml蒸馏水中,加甲醛Oml室温存放,长期稳定银染液C:按文献AgNg溶于ml蒸馏水取出ml备用,向余下的盯d硝酸银溶液缓缓滴加浓氨水,边加边摇动直到形成沉淀又渐渐溶解恰好形成澄清溶液,再用备用A溶液慢慢回滴形成稳定薄雾状溶液取出Oral,余下染液避光密封,oc冰箱存放染色方法:取A液ml(滴)加入带有塞的试管内,再加入B液ml(滴),充分混合,用酒精灯火焰轻微缓缓加热,s,稍冷却这样处理过的A,B混合液染片s(,s)即可,蒸馏水缓慢冲洗干净A,B混合物不稳定,加热后min内使用,否则影响染色质量滴加银染液c染色,加热至微冒蒸气染l,如S,蒸馏水洗净染液,干后油镜检查,应观察O个视野以匕涂片染色鞭毛质量评分:应用West等人方法根据染色质量不同,分别记作,,,,分,其中分:只见菌体,未见鞭毛分:很少的鞭毛,但鞭毛形态很差分:很少的鞭毛,但鞭毛形态完整分:很多的鞭毛鞭毛形态完整但仅局限在涂片某部位分:很多的鞭毛,很完整的鞭毛形态,分布在大部分涂片k结果与讨论按West报告的方法评价属,种共株细菌种培养方法鞭毛染色结果见表l血琼脂平板培养有株涂片染色获得分,占得分者株占得分者株占O得分者株占平均每株菌得分肉汤培养有株菌涂片染色获得分,占得分者株占,平均每株涂片染色获得分West等人改良了镀银染色液,使用加热的银染液其结果表明使用半固体培养基比平板培养效果好,株细菌中有株的鞭毛染色涂片获得分,占,株获得分,占,株获得分,占,株获得分,占,另外一株腐败许旺菌(原称腐败假单胞)染色失败,平均每株鞭毛染色涂片分和本文试验结果对比说明使用新方法染鞭毛有很高的成功率细菌鞭毛染色效果见图需氧菌G非发酵杆菌株,血平板培养进行鞭毛染色全部获得分,表明非发酵菌固体培养更适合于鞭毛染色株肠杆菌血琼脂平板培养有株获得分和株获得分,这些菌株使用肉汤培养进行鞭毛染色获得分以上这充分表明肉汤培养鞭毛染色更适用于肠杆菌科的某些菌株Forbes使用改良的Leifson方法染色肠杆菌(变形杆菌除外)鞭毛质量很差,这可能是由于使用血平板培养细菌的缘故一些菌种因培养基性质(肉汤培养和固体培养)不同而鞭毛位置分布发生变化,这主要表现在弧菌科细菌(嗜水气单胞菌,豚鼠气单胞菌,类志贺邻单胞菌及副溶血弧菌)九版伯杰手册…描述气单胞菌为极单毛菌,但早期固体培养可见周毛菌,年日本学者ToshioSHIMA)A等人通过鞭毛染色和电镜证实株嗜水气单胞菌有株在固体培养时显示周毛菌,株豚鼠气单胞菌有株固体培养时显示周毛菌,这种细菌在液体培养时都为极单毛菌表l结果显示,株嗜水气单胞菌有株血平板培养可见周毛菌(图),株豚鼠气单胞菌都为周毛菌中华微生物学免接学朵忠年月第糕第l期ChinJMicmbioll哪株类志贺邻单胞菌有O株固体培养时显示周毛菌但液体培养时全部为单端丛毛菌年的系统伯杰手册描述弧菌有些种有倒甩,这些侧毛长度为tin,鞭毛直径为l,rim每个菌体有多根有些菌株每个菌体可达根,这侧毛比端毛细小这些侧毛没有鞘副溶血弧菌就有这样的侧毛而现在认为这样的”侧毛”是周鞭毛正是由于这种周鞭毛的存在使弧菌一些种具有在固体培养基上蔓延(S~lq)生长的特性本文结果显,J副溶血弧菌为周毛菌(图)另外,血培养非O霍乱弧菌显示有单侧毛和亚端毛(图l),霍乱弧菌鞭毛的这种分布位置尚未见文献描述本文结果有株肠杆菌血琼脂平板培养涂片染色鞭毛为分,染色显示鞭毛脱落于菌体(图):但肉汤培养鞭毛形态完整(见图)细菌鞭毛染色技术一直是细菌鉴定的难点,其主要原因是由于鞭毛纤细,直径仅为,nm,低于光学显微镜的分辩率而不能直接染色观察,鞭毛与培养条件如温度,培养基成分和生长阶段等因素有“本研究证实:除机械性外力,培养基不同也可以引起鞭毛脱落,少数肠杆菌固体培养有鞭毛脱落,但液体培养鞭毛很完整尽管目前细菌鞭毛染色方法报告较多,Clark首先使用评价染色质量方法,对其改良的Leifson方法进行评判,Forbes引用west方法评价其改良的Leifson方法本文通过引用West等人的评价方法证明该染色方法是可靠的,并且固体培养和液体培养细菌鞭毛染色都适用液体培养细菌涂片染色鞭毛质量获得分比固体培养少,这可能与离心处理标本有关本文报告的方法不同于已发表的银染法,丹宁酸含量略有增加,将媒染剂分为两部分,增强稳定性,氯化铁的酸化处理使此溶液能长期稳定Finegan和Smith报告根据Porter等人改良法使用老化媒染剂增强鞭毛染色,研究证明使用加热过的媒染剂能提高染色速度且背景清晰,鞭毛粗大甲醛必不可少,但硫酸钾铝成分对于本试验是不适用的总之本文报告的鞭毛染色方法具有简单,快速,重复性好,染色后的鞭毛清晰等多种优点,从而可作为常规方法参考文献iHoltJG,KriegR,Sn~thpFIA,etBergeyM~ualofdeterm~naveb【NinthEditi~)WiUJ~a玎dWilkinsCoBahimo~,,Pl一MurrayRGE,D畔hPuNRobinowCFDetemfiuativeandc,tologScallightnficroscopy:GePamdtP,MRGEWoodWAandKrlegNRMethodsforn口andmecarbacteriolc~AmericanSoc~etyl由华微生物学和免疫学杂志年月第卷第期ChinJMicrobio!ImunoJanuavVol田细曹鞭毛镀银法染色围(lO)FigThepiGturaofverpIatinmethodforstainingbacterialflagella()aeruginosastrainArCCgrownonBAS:plckestrainATCClgrownonBASflydrophiastrainATCCgrownonBAS:Ahydrophflast~ainATCCgrowninflagelabroth:smaltophiliastraJngrolgDoogASCel~Cfastraingro*monBSA:mirabilisstraingrownonBSA:eoalisstraingrownonBSA:AcaviaestarinATCCigrownonBSA:caviaestrainATCCgrowninflagellabroth:LLaaizonaestraJngroominflagelabroth:sarizonaestraingrownonBSAylparahe口iyticusATCCIstraingrownonBSAvcholeraenonLstraingrownonBSA生塑生塑堂塑鱼堕芏盘点年】月第巷第l期CthnJcrnhm【km】一vb,oforMl州Washing~xtDc,PRhod~METhec~~ofogyofPsendo~~sppas,lbysilverptz~ingsmitfingmeth~JfenMierobio:KodakaHArmiinldAY,LombardGLetalPrtalldureJrdear,nstratingh~tefialtlgellaJClmMicrobio:ClarkWAAsitr~flifiedleff~mIuastainJClmMicn~biol,:Fi~eganSMSmithRAEnhstainhLgofbm,tefialflagellausag~xln~rdantInthesilverstainBiotechnlc苦}llst~hemlstry:】WMBttrdash~,qViFreimuthFSimlllifiedslJveplatthgmnforflagJCinlMi~bio卯:ll‰IRdflagellaa】nJCllnMicn~blol,:Tq~hioSHM)A,RiichiSAKAZAKIK肌SUZLKIPenlrlt虹IUSllagdlainl【cstrait~ofA”JapanJMedllio:【l一lKohakuINOUEYmahima~I~,SAKOKenjiSUZUKIelalPl川chousna罾einpleslorrsmasshigeoid~str,fi~Japan】MeallBl,l一】KrlegNR,HoltJG,MRGEetBerrysM~ualofsslertmtic【ol(VlumJWii~andWilki~Co,Bahil~Pln鼢nDLVthnoIn:PRBamn口,PfallerMA,etManualofClinicalMicmbtolog(WenEchti~Ameri~SobrietyforMicn~biologyWashlngt~DC,,PlCtarridge皿,MulllnsJMc,dInHowardBJKei~rJF,WeiwdeldelalChtficalpathogenicloietabidcg~(Secondhb【帆)吨,PIBeaAenDcGoldbergSilvermpnstainforleptt~spimatJdflagella】llacterlo【:OPorter】RTaonmlkaKW,SmithRADen~rallngb~tefialflagellaTheAmeri~lBicdc~Racb目:l噼(收稿日期:)第三相蛋白分离结合水平双相凝胶电泳对福赛类杆菌蛋白分离影响的研究黄定明周学东天野鞍雄福赛类杆菌菌株(Bacphor水平型电泳仪上l恒温等电聚焦电泳后,采用浓度,ExcelGelSDS梯度胶进行第二相SDSPAGE凝胶电泳电泳蛋白银染观察作昔单位:成都四JI『大学华西口腔医学院c黄定明周学东口车大阪大学大学院齿学研究科口腔分子免疫制御学讲座(天野敦雄)通讯作者:黄定明(Email:dingmingh~gyahm…cn)结果用ReadyPrep试剂盒每种试剂提取福赛类杆菌蛋白电泳图谱存在显着差异,说明该试剂盒不同试剂提取的蛋白种类和数量存在明显不同根据福赛类杆菌全细胞蛋白溶解性不同分步系列提取,口r达到在水平双相凝胶电泳前,将样品蛋白进行第三相分离,从而使每次上样液中蛋白种类减少在维持上样蛋白总量II==变的情况下与全细胞蛋白上样相比,每种蛋白的含量相对增加,使原来用全细胞蛋白检测不出的低浓度蛋白也能检测,从而增加了检出蛋白的种类同时每次提取的蛋白质种类减少,有利于电泳后蛋白之间的分离和蛋白质电泳图谱的解析试剂I成分为Tris硷,提取福赛类杆菌易溶性蛋白主要为胞浆蛋白,电泳图谱显示种类最多,大量酸性蛋白,酸陛蛋白质相对分子质量(M)从数千道尔顿到l不等一试剂提取试剂I不溶解蛋白,试剂中除了Tris硷,还有尿素,CHM”S,BiolJY【e,可提取中度溶解的检测技术蛋白质尿素能打开蛋白质的折叠结构,两性离子界面活性剂CHM:S阻碍蛋白质凝集,使蛋白质充分溶解,从而提高电泳的分离效果试剂除了含试剂成分,还含硫脲,两性离子界面活性剂磺基甘氨酸三甲内盐(SB一l),三丁基磷化氢(TBP)该试剂能溶解试剂I,试剂不能溶解的蛋白质电泳图谱发现分离了余种酸性蛋白质,且蛋白斑点边缘光滑锐利,等电点位于,之间,在(,)之间硫脲,SB一l能增加疏水蛋白特别是富含脂质的膜蛋白溶解性,阻止疏水蛋白在IPG等电聚焦电泳时凝集沉淀,促进疏水蛋白进人凝胶条内:TBP能有效地促进难溶陆膜蛋白的溶解因此可认为试剂有利于提取蛋白在水平双相凝胶电泳中分离,分离的蛋白主要是福赛类杆菌膜蛋白有关膜蛋白的致病作用有待进一步研究=(收稿日期:)

类似资料

该用户的其他资料

《封神传奇》之游戏攻略及窍门[精彩].doc

2016新编稻飞虱论文:稻飞虱 因子膨化 气象等级 预报模型.doc

武汉首批达标电动车上市 时速超20公里自动断电.doc

屏东县加禄国小课程评监实施计画.doc

7天连锁酒店 大连港湾广场店 饭店揽生意不得穿军.doc

职业精品

精彩专题

上传我的资料

精选资料

热门资料排行换一换

  • 外国文学史.pdf

  • 让孩子着迷的77×2个经典科学游…

  • 经济学重点题库.同等学力人员申请…

  • 张仃漫画.pdf

  • 山水园林图.pdf

  • 中国音乐的人文阐释 刘承华 着…

  • 李滨声画集:民俗卷.pdf

  • 精编连环画 中国民间故事大全1.…

  • 精编连环画 中国民间故事大全3.…

  • 资料评价:

    / 14
    所需积分:0 立即下载

    意见
    反馈

    返回
    顶部