U50，488H预处理及低温保存离体兔心不同时限超微结构的变化

U50，488H预处理及低温保存离体兔心不同时限超微结构的变化 U50，488H预处理及低温保存离体兔心不同 时限超微结构的变化 第l4卷第l5期 2004年8月 中国现代医学杂志 ChinaJournalofModamMedicine Vo1.14No.15 Aug.2004 文章编号:1005—8982(2004)15—0061—03 U50,488H预处理及低温保存离体 兔心不同时限超微结构的变化 段大为,刘维永,王红兵,付勇2 (1.第四军医大学西京医院心血管外科中心,陕西西安710032; 2.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西西安710033) 摘要:目的探讨U50,488H预处理及低温保存对离体兔心的保存效果和不同保存时间对心肌超微结构 的影响. 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 健康大白兔32只,随机分成4组,每组8只.1组:低温保存4h;2组:低温保存6h;3组:低温 保存8h;4组:低温保存10h.每组动物经50U,488H预处理后,离体供心均用U50.488H心肌保存液进行低 温保存.用电镜观察保存后的心室肌超微结构,比较不同保存时间心肌超微结构的变化.结果兔心保存4h 和6h时心肌细胞出现轻度损伤;在保存8h和10h心肌细胞呈现中度损伤.但保存10h的离体心脏再灌注后 心功能的恢复与保存8h组相比较存在明显的差异.结论U50,488H药物处理及心脏低温保存供心8h和 10h后心肌组织均出现中度损伤,但离体兔心保存10h再灌注后出现严重的心功能障碍,而兔心保存8h以内 的离体心脏保存效果良好. 关键词:离体心脏;心脏移植;超微结构;50U.488H;心脏保存 中图分类号:R654.2文献标识码:A Change0fultrastructureinisolatedratSheartbyU50.488Hpre一 1???’1?lUniversity,Xi’an,Shanxi710033,P.R.China) Abstract:Objective:Toinvestigatetheprotectiveeffectanduhrastructurechan~ngofratSheartby U50,488HpreconditioningandU50,488Hheartpreservationsolutiontostorage,inhypothermiafordiff erent preservationtime.Methods:Healthyrabbits(n=32)wererandomlydividedintofourgroups,eightrabbit sin everygroups.Groupone,theisolatedrabbitsheartswerepreservedforhouminhypothermia;grouptwo,for sixhoum;groupthree.foreighthoum;groupfour,fortenhourslong.AllrabbitswerepretreatedbyU50, 488HandisolatedratheartbepreservedbyU50,488Hpreservationsolutioninlowtemperature(0, 4)?.To comparethedifferentchangeamongtheratSmyocardiumultrastructureindifferenttime.Results:When protectiontheheartforfourhoumandsixhours.thecardiacmusclecellshowedupminorinjury;thecardiac musclecellshowedupsecondarylevelin8hgroupand10hgroup.Afterreperfusion,therecoverydegreeof heatsfunction,therewereobviouslydifferentin8hgroupand10hgroup.Conclusion:Themyocardium tissueappearssecondarylevelinjuryin8hand10hbyU50,488Hpreconditioningandheartpreservation solutionpreserveinhypothermic,butthereareseriousheartfunctiondisturbancein10hgroup,thewhole preservativeresultisfinein8hgroup. 收稿日期:2003--06—26 中国现代医学杂志第14卷 Keywords:isolatedhea~;hearttransplantation;ultrastructure;U50,488H;myocardiumpmse~ation CLCnumb~r:R654.2Doeumentcode:A 本实验采用特异性k阿片受体激动剂U50, 488H对兔习进行预处理并置于U50,488H心脏保 存液中低温下保存,观察不同保存时间供心的超微 结构变化. 1材料与方法 1.1实验动物和分组 健康大白兔32只,根据低温保存时间的不同将 其随机分成4组,每组8只,雌雄不拘,体重2.5,3 (2.74?0.45)kg.I组,离体心脏在低温下保存4h: ?组,心脏在低温下保存6h;m组,心脏在低温下保 存8h;IV组,心脏在低温下保存10h. 1.2保存液的配制 以ST.Thmos?为基础液,在此基础液中加入阿 片受体激动剂U50,488H,U50,488H浓度为100 mol/L,钾离子浓度调整为8mmol/L.ST.Thmos? 组成成分为:氯化钠110mmol/L,氯化钾16mmol/L, 氯化镁16mmo]]L,氯化钙1.2mmol/L,碳酸钠1O mmol/L,pH值7.8,渗透压(285,300)m0sm/L. 1.3免心的切取与保存 大白兔称重后,仰卧固定于手术台上,在麻醉前 (1O,15)min经外周静脉给U50,488H0.44mgg. 戊巴比妥钠(60mg,kg)经腹腔注射麻醉,肝素(3 mg,kg)经耳缘静脉注入进行抗凝,进行全身肝素化 抗凝.麻醉满意后,正中劈胸骨切口,在主动脉和右 锁骨下动脉交界处切断主动脉胸,迅速取出心脏,并 放人(0,4)?的H—K缓冲液中,冲洗掉残留在主动 脉内的血液,进行主动脉插管后,移至Langendorff 灌注装置上,用37?CH—K液灌注.灌注压维持在 100cmH0.灌注15min后将心肌温度降到30~C,并 经主动脉灌注4?的超极化心肌保护液,灌注压100 cmH0,灌注量8ml/kg;冷灌完毕后,将离体心脏放 人(0,4)?U50,488H液中恒低温保存,保存期间 每问隔1h重复灌注心脏保存液一次,灌注为首次 量的1/2.在保存时间点,将每组的心脏再连接到 Langendorff灌注装置上,用30qCH—K液逐渐复温至 37?,H—K液灌注30min后,取右心室肌组织进行 电镜检查. 电镜的标本制作:用尖利的刀片在右心室,并将 标本切成1mm×1nlrn×1mrn大小(6,8)块,迅速 致于4?2.5%戊二醛固定液中固定2h.冲洗后,再 用磷酸缓冲的锇酸(pH7.4)固定2h.以递减浓度 的酒精和丙酮酸脱水,以1份Epo812包埋剂+1份 丙酮浸透3h;再单独用Epo812包埋剂浸透1h,移 于胶囊内包埋,6O?聚合.将包埋组织块前端修成 梯形(0-3mm×0.2mm)用美国AD机械推进式超 薄切片机连续切片,厚度为400A以铜网载片1O张 左右.再用2%醋酸钠染色30min,清水反复冲洗5 遍,再以枸橼酸铅染色(7-8)rain,清洗后用日本 JEM一2000EX电子显微镜观察并摄片. 2结果 低温不同保存时间再灌注后,四组离体心脏的 心功能情况见表1,2. 表1心脏自动复跳及心律失常情况 电镜结果:在离体兔心低温保存(4,6)h时,心 肌问连接完整,肌丝排列规则,线粒体不明显肿胀, 嵴完整(见图1).保存6h时,心肌细胞尚完整,肌 丝,肌节排列稍紊乱,线粒体肿胀,增生明显,嵴较 乱,染色质边聚明显,核浓缩线粒体嵴断裂消失,线 粒体轻度肿胀(见图2).保存8h时,肌丝断裂,出 现局灶性肌丝断裂溶解,线粒体肿胀,有轻度空泡 化,染色质边聚明显,核浓缩线粒体嵴断裂消失(见 表2不同保存时限再灌注30rain后心功能恢复率(x-4+S)%(n=8) Ivs1IP>0.05;IIIvsIVP<0.05;?vs?P<0.05;?VSIVP<0.Ol ? 62? 第l5期段大为,等:U50,488H预处理及低温保存离体兔心不同时限超微结构 图3).保存10h时,出现局灶性肌丝消失,内皮细 胞肿胀,血管管腔狭窄(见图4). 图4低温保存1Oh心肌超微结构的变化(X15k) 3讨论 心肌细胞的损伤不但发生在缺血期,还可发生 在血液重新灌注后,心肌缺血再灌注损伤包括超微 结构,功能代谢和电生理等方面的损坏性变化.心 脏移植的供心保护及保存效果是影响心脏移植患者 术后生存的重要因素之一.有学者报道【1心肌保护 与ATP密切相关,心肌ATP含量是衡量细胞完整性 及恢复可能性的最好指标,ATP,心肌收缩力,超微 结构三者之间有着密切关系.张勇[2】报道ST.111oms ?液在低温离体心脏保存6h时,心肌超微结构变 化明显:徐长宪报道口】用ST.ThomsI1液和Colllns液 联合冷浸泡犬心3h后,线粒体肿胀明显,嵴疏松, 排列紊乱有断裂,基质密度降低,糖原颗粒减少,且 肌纤维问质水肿较明显.GYwan等在SD大鼠的 研究显示,k阿片受体选择性激动剂U50,488H可 以模拟IPC而减少心肌梗死面积和降低心律失常的 发生,实验证实了阿片受体参与了IPC的心肌保护 作用.我们在本实验中将特异性k一阿片受体激动 剂U50,488H加入含1/2钾离子浓度的sT.1110ms? 液内,对离体兔心进行不同时间段的低温保存,发现 U50,488H可以以使离体兔心在低温保存6h,心肌 超微结构变化不明显.在低温保存8h和10h后心 肌超微结构发生中度的变化,但心脏复跳后的心功 能则存在明显的差异.有报道吗啡可以减轻心肌 缺血再灌注损伤,其作用是通过心脏局部的阿片受 体及心肌细胞的KATP通道介导产生心肌保护作 用,机体对有害刺激及应激的反应均与阿片受体系 统有关;并且亚低温可以通过抑制氧自由基产生,减 轻脂质过氧化反应,从而减少中性粒细胞渗出,或抑 制钙离子内流,对心肌产生一定的保护作用.从本 实验的结果可以看出用阿片受体激动剂U50,488H 对离体心脏进行缺血前的预处理,而后以ST.Thoms ?液中加入阿片受体激动剂U50,488H作为心脏保 存液进行离体心脏的低温保存可以延长离体供心的 时间,但不同低温保存时间下供心的生化指标的变 化需要进一步的检测. 参考文献 【1】钟佛添,刘处生,巫国勇,等.供者心脏热缺血后收缩力,三磷酸腺 苷,超微结构的关系【JJ.中国胸心血管外科临床杂志,2002,7(1): 28-31. 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