下载

1下载券

加入VIP
  • 专属下载特权
  • 现金文档折扣购买
  • VIP免费专区
  • 千万文档免费下载

上传资料

关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 FDA资料汇编美国药典细菌内毒素试验1995年

FDA资料汇编美国药典细菌内毒素试验1995年.doc

FDA资料汇编美国药典细菌内毒素试验1995年

longyun918
2018-09-07 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《FDA资料汇编美国药典细菌内毒素试验1995年doc》,可适用于医药卫生领域

美国药典细菌内毒素试验年目录本章节提供个评估样品内或检品上可能存在的细菌内毒素浓度的方法。试验用的鲎变形细胞溶解物(鲎试剂)是从鲎循环变形细胞的水提取物得到制备成一种复合的专门试剂一鲎试剂用于凝胶形成。用检品的稀释液直接与参考内毒素稀释液做平行比较来确定反应终点内毒素含量用内毒素单位来表示。因为鲎试剂也可用比浊法或比色法的读数来表达所以这些试验方法如符合要求也可做为替代方法。这类试验要求建立一条标准回归曲线然后通过内插法定出检品的内毒素含量:实验过程包括内毒素及对照品溶液与鲎试剂在预定的反应时间中孵育(保温)及在分光光度计的适当波长中读取光吸收度。比浊法测定可在孵育终止时立即得到数据在动力学检测中(比浊法和比色法)反应期间自始至终测量光吸收值并算出它们的比值。对于比色法则在读数前加入适量终止反应的酶试剂使反应终止在预定的反应时间终点上。参考标准和对照标准内毒素(内毒素参考标准品和对照标准品)参考标准内毒素(RSE)系指美国药典内毒素参考标准品已确定其效价为每瓶个美国药典内毒素单位(EU)每整瓶参考标准内毒素用ml的鲎试剂用水溶解并在旋涡混合器上间歇地混匀分钟并用此浓度溶液制备随后一系列稀释液混匀的参考标准内毒素可在冰箱中保存不超过天以备用。每次用此液作稀释前均应在旋涡混合器上强有力地混合分钟以上每次制备下一步稀释液前应混匀稀释液不少于秒。吸附能使内毒素活力损失故不要贮存稀释液反之缺乏支持的论据。对照标准内毒素(CSE)是已被参考标准内毒索标定的另种内毒素制品每批新的对照标准内毒素用于试验前均应进行标定用参考标准内毒素标定对照标准内毒素必须用试验中所用的特定鲎试剂。由于分析的是很少量的瓶对照标准内毒素和瓶参考标准内毒素可能会影响凝胶过程。但按“试验程序”规定稀释参考标准内毒素系列的每一浓度水平都必须用支重复试管每瓶对照标准内毒素或等比稀释液同样也用支重复试管。参考标准内毒素反应终点对数的均数与对照标准内毒素反应终点对数的均数之差的反对数就是标定对照标准内毒素的效价然后再转换并表达为对照标准内毒素在干燥状态下每ng所含内毒素单位和每个包装所含内毒索单位无论那种表达方式都可行。合适的对照标准内毒素效价范围为每ngEU。预试验使用有确定标示灵敏度的鲎试剂将使用的容器或用具经烤箱℃以上时间充分处理)以破坏外源性表面上的内毒素。细菌内毒素试验结果的有效性要求有足够的证明其检品包括固体、溶液、洗脱液或提取液自身对试验无增强/抑制作用或其它干扰。通过如下所述的增强/抑制试验证实其有效性包括适当的阴性对照。如果鲎试剂来源、产品组分(配方)及制造工艺改变时有效性必须重做检验。复核鲎试剂灵敏度试验复核灵敏度试验至少用瓶鲎试剂制备成λ、λ、λ和λ的参考标准内毒素(或对照标准内毒素)双份稀释液系列。这里λ是鲎试剂的标示灵敏度用每毫升含内毒素单位表示将上述个浓度分别做支重复试管试验及阴性对照。终点浓度的几何均数(见计算和判断)必须大于或等寸λ且少于或等于λ。每一批新的鲎试剂在用于试验前都要复核其标示的灵敏度。增强抑制试验取部分检品或不超过最大有效稀释度(倍数)的稀释液(未经处理已不能测出内源性内毒素)用不加及加有最终浓度为λ、λ、λ和的内标素的检品进行试验遵照”试验程序”进行对未经处理的检品和加有内毒索的样品每个浓度均不少于支重复试管。平行试验用水加相同浓度内毒索重复试验并做阴性对照如“计算和判断”项所描述的那样计算检查品反应终点内毒索浓度的几何均数如果检品反应终点的几何均数大于或等于λ且小于或等于λ则该检品的增强抑制试验是有效的如果加有内毒索的检品得出的结果超出规定的范围则该检品不适用于细菌内毒素检测。在中和、灭活或排除干扰物质或将检品做不超过最大有效稀释倍数的稀释液后重做增强/抑制试验(所用稀释液不超过最大有效稀释倍数)足以克服已知加入的内毒索对检品在检测过程中的增强/抑制干扰:在试验中未经处理的样品若察有内源性内毒素则检品不宜做增强/抑制试验或通过超滤法或适当稀释以消除山毒素的作用使其变成能用此法检测。把未经处理的检品稀释到不超过最大有效稀释倍数的水平、且察觉不到内毒素时用此稀释液重复检品的增强/抑制试验。最大有效稀释(MVD)最大有效稀释适用于注射剂或经整倍稀释的非肠道给药的溶液及些给药剂量按重量计算而给药量的体积是可改变的药物内毒索的限值浓度是依据每个检查品里的含量所定。用λ除以限值得到最大有效稀释系数λ是在检验溶解物时标定的灵敏度(以EU/训表示)这里每个检查品的内毒素限值都是按该检品的活性单位或按重量表示(即EU/mg或EU/unit)。用被检测样品的溶解浓度或用该检品按标签标示的浓度(mg/m或units/m)乘以限值的积再除以λ得到最大有效稀释系数二种方法都可以。所得最大有效稀释系数是作为有效检验制备的最低稀释浓度溶液。试验步骤在试验的准备和进行过程中要格外小心避免微生物污染样品。通过按几何系列即每一浓度都比下一浓度大一个恒定比率逐次稀释以降低待测样品的浓度来控制样品小内毒索含量。另应有阴性和阳性对照及阳性样品对照试验中每个样品的每一稀释浓度不得少于支重复反应管包括一系列标准品内毒素稀释液做平行试验时也不少于支重复反应管。对每个试管架上的样品都应有套内毒素标准品稀释液系列管块孵育。当环境条件能保持致时也可伴多个试管架的样品一齐孵育。准备由于标准内毒素和鲎试剂的包装和装量可能不同含量和(或)稀释应按标签所示。样品和鲎试剂混合后的pH值范围应在除非个别样品另有特别规定。pH可通过实验前在样品中加无菌、无内毒素的NaOH或HCl或合适的缓冲剂来调节。操作程序在*mm试管或单个试瓶中分别加入一定量的阴性对照、标准内毒索浓液、样品和阳性检品对照。阳性检品对照制品或溶液洗涤液或提取液组成其中加入浓度为λ的参考标准内毒素或已标定的对照标准内毒素。除非用中个试瓶试管中均应加适量的鲎试剂。混合样品/鲎试剂的混和物均放人孵育装置如水浴箱或加热箱小准确记录试管放入的时间在±℃无振动孵育上分钟然后小心取出观察。阳性反应的特点是坚实的凝胶形成翻转脂℃时保持不脱落记作阳性(十)。阴性结果的特征是缺乏这样的凝胶或形成粘性胶状但不能保持完整结果记作阴性()拿取试管应小心避免受到意外振动或可能导致的假阴性。如果阳性产品对照为阴性或内毒素标准品剂量在货试剂标示灵敏度的±个二倍稀释度内仍不显示终点浓度或任阴性对照呈阳性则试验无效。若测定试验样品中存在的内毒索量需做含量计算。计算和判断(解释)几何均数计算反应终点是在内毒索、样品或加有内毒素的样品的系列递减浓度小最后呈阳性试验结异的浓度记录每稀释系列重复试验的终点浓度E确定终点浓度的对数e并用下面的公式计算终点浓度的几何均数。终点浓度的几何均数:(∑e/f)的反对数这里∑e是所用稀释系列反应终点浓度的对数和f是重复试验组数(反应管数)。内毒素含量计算计算检测样品中或制品表面内毒素浓度(EU/m或g或mg)首先计算反应终点的浓度E每稀释系列的反应终点浓度由每反应终点稀释系数的倒数乘以λ得到。这里λ是试验中标示溶解物的灵敏度以EU/ml表示。试验中检品之几何终点浓度即是∑e/f的反对数这里e是反应终点浓度的对数f是试验时样品在该水平的重复反应管数。判断当内毒素浓度不超过各自专文所规定的范围时检测的样品符合要求(译自美国药典XⅫ版第页<>)(杨呜岗译)

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

评分:

/4

VIP

在线
客服

免费
邮箱

爱问共享资料服务号

扫描关注领取更多福利