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生物制品(三部)冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞).doc

生物制品(三部)冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)

yexiaoke1986
2018-09-07 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《生物制品(三部)冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)doc》,可适用于医药卫生领域

冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)DongganYixingNaoyanMiehuoyimiao(VeroXibao)JapaneseEncephalitisVaccine(VeroCell)Inactivated,Freezedried本品系用乙型脑炎(以下简称乙脑)病毒接种于Vero细胞,经培养、收获病毒液、灭活病毒、浓缩、纯化后加入稳定剂冻干制成用于预防乙脑。基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。制造生产用细胞生产用细胞为Vero细胞。细胞库的管理及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。各种子批代次应不超过批准的限定代次取自同批工作细胞库的支或多支细胞管经复苏、扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。细胞制备取工作细胞库中的支或多支细胞管细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为批。将复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化分散成均匀的细胞加入适宜的培养液混合均匀置℃~℃培养形成致密单层细胞。毒种名称及来源生产用毒种为乙脑病毒P株。种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。乙脑病毒P株原始种子应不超过第代主种子批和工作种子批的代次应不超过批准的限定代次。种子批毒种的检定主种子批应进行如下全面检定工作种子批至少应进行项检定。鉴别试验将毒种倍系列稀释取~稀释度的病毒液与乙脑特异性免疫血清等量混合作为试验组取~稀释度的病毒液与乙型脑炎非特异性血清等量混合作为对照组于℃水浴中和分钟试验组和对照组每个稀释度分别接种体重为g昆明鼠或其他品系小鼠只每只脑内注射ml逐日观察日内死亡不计观察天计算中和指数应不低于。无菌检查依法检查(附录XIIA)应符合规定。支原体检查依法检查(附录XIIB)应符合规定。病毒滴定将毒种倍系列稀释取~稀释度病毒液脑内接种体重为~g昆明鼠或其他品系小鼠每稀释度注射小鼠只每只ml逐日观察日内死亡者不计观察天病毒滴度应不低于LgLDml。病毒外源因子检查依法检查(附录XIIC)应符合规定。免疫原性检查用主种子批毒种制备原疫苗腹腔免疫体重为~gNIH小鼠只每只ml免疫次间隔天初免后第天对免疫组和未经免疫的对照组小鼠用不低于LD病毒量的非生产用乙脑病毒P株进行腹腔攻击同时各组小鼠每只脑腔注射ml稀释液。天后免疫组应保护对照组死亡率应不低于。毒种保存冻干毒种保存于℃以下液体毒种保存于℃以下。原液细胞制备按项进行。培养液培养液为含有适宜浓度灭能新生牛血清的或其他适宜培养液。新生牛血清的质量应符合要求(附录XIIID)且乙脑抗体应为阴性。对照细胞病毒外源因子检查依法检查(附录XIIC)应符合规定。病毒接种和培养细胞生长成致密单层时弃去细胞培养液用Earle’s液或其他适宜的洗涤液充分冲洗细胞,除去牛血清后,加入MEM维持液。工作种子批毒种按(MOI接种(同一批工作种子批应按同一MOI接种)。置适宜温度下培养。病毒收获经培养小时澄清过滤后收获病毒液。根据细胞生长情况可加入新鲜维持液继续培养进行多次病毒收获。同一细胞批的同一次病毒收获液检定合格后可合并为单次病毒收获液。单次病毒收获液检定按项进行。病毒灭活应在规定的蛋白质含量范围内进行病毒灭活。单次病毒收获液中加入终浓度为ugml甲醛置适宜温度灭活一定时间。病毒灭活到期后每个病毒灭活容器应立即取样分别进行病毒灭活验证试验。超滤浓缩同一细胞批制备的多个单次病毒收获液经病毒灭活后进行适宜倍数的超滤浓缩至规定的蛋白质含量范围。纯化浓缩后的病毒液采用蔗糖密度梯度区带离心法或其他适宜的方法进行纯化。脱糖将收集液以截留分子量kD的膜进行超滤脱糖后可加入适宜浓度的稳定剂即为原液。原液检定按项进行。半成品配制用疫苗稀释液将原液按同一蛋白质含量和抗原含量进行稀释总蛋白质含量不得超过ugml加入适宜的稳定剂即为半成品。半成品检定按项进行。成品分批应符合“生物制品分批规程”规定。分装及冻干应符合“生物制品分装冻干规程”规定。规格复溶后每瓶ml每次人用剂量ml。包装应符合“生物制品包装规程”规定。.检定单次病毒收获液检定无菌检查依法检查(附录XIIA)应符合规定。支原体检查依法检查(附录XIIB)应符合规定。病毒滴定按项进行应不低于LgLDml。原液检定无菌检查依法检查(附录XIIA)应符合规定。病毒灭活验证试验将病毒灭活后供试品脑内接种体重(g小鼠只每只ml同时腹腔接种ml为第代天后将第代小鼠处死只取脑制成脑悬液同法脑内接种~g小鼠只为第代天后将第代小鼠处死只同法脑内接种~g小鼠只为第代接种后逐日观察日内死亡者不计观察天全部健存为合格。(动物死亡数量应不超过试验用动物总数的)。蛋白质含量应按附录VIB第二法进行测定应按批准的标准执行。抗原含量采用酶联免疫法应按批准的标准执行。半成品检定无菌检查依法检查(附录XIIA)应符合规定。抗原含量采用酶联免疫法应按批准的标准执行。成品检定除水分测定外应按标示量加入灭菌注射用水复溶后进行以下各项检定。鉴别试验采用酶联免疫法检测应证明含有乙型脑炎病毒抗原。外观应为白色疏松体复溶后应为无色澄明液体无异物。水分应不高于(附录VIID)。游离甲醛含量应不高于μgml(附录VIL)。效价测定采用免疫小鼠中和抗体测定法以蚀斑减少中和试验测定中和抗体。参考疫苗(RA和RB)以及中和试验阳性血清由国家药品检定机构提供。将被检疫苗(T)和参考疫苗(R)分别稀释成:腹腔免疫体重为~g小鼠只每只ml免疫次间隔天。第次免疫后第天采血分离血清同组小鼠血清等量混合于℃灭活分钟。稀释阳性血清、被检苗血清和参考苗血清分别与稀释病毒(约PFUml)等量混合同时将稀释后的病毒再:稀释作为病毒对照置℃水浴分钟接种孔细胞培养板BHK细胞每孔ml置℃培养分钟加入含甲基纤维素的培养基覆盖物于℃培育天染色蚀斑计数病毒对照组的蚀斑平均数应在~之间。计算被检疫苗和参考疫苗组对病毒对照组的蚀斑减少率。蚀斑减少率=(-SCV)×S为被检苗平均斑数CV为病毒对照组平均斑数按以下公式计算被检苗效力T值。T=(Y-)+LgXT=被检苗引起蚀斑减少的抗体稀释度的对数Y为被检苗的蚀斑减少数X为蚀斑中和试验时所用的血清稀释倍数结果判定:()合格:T≥(RARB)―()重试:(RARB)―<T<(RARB)―()不合格:T<(RARB)―热稳定性试验疫苗出厂前应进行热稳定性试验于℃放置天按项进行效价测定仍应合格。如合格视为效价测定合格。牛血清白蛋白残留量应不高于ng剂(附录VIIIF)。无菌检查依法检查(附录XIIA)应符合规定。异常毒性检查依法检查(附录XIIB)应符合规定。细菌内毒素含量测定应不高于EUml(附录XIIE凝胶限量试验)抗生素残留量测定细胞制备过程中加入抗生素的应进行该项检查采用ELISA法应不高于ngml。Vero细胞DNA残留量应不高于pg剂(附录IXB)。Vero细胞蛋白残留量测定采用酶联免疫法应不高于ugml并不得超过总蛋白含量的。.保存、运输及有效期于~℃保存和运输。自生产之日起有效期为个月。疫苗稀释剂疫苗稀释剂为灭菌注射用水应符合对疫苗稀释剂有关要求。疫苗稀释剂装量疫苗稀释剂包装疫苗稀释稀释剂有效期疫苗稀释剂批准文号疫苗稀释剂生产企业说明书PAGE

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