生物制品（三部）注射用重组人干扰素α2b（假单胞菌）

注射用重组人干扰素 α2b（假单胞菌） Zhusheyong Chongzu Ren Ganraosu α2b (Jiadanbaojun) Recombinant Human Interferon α2b for Injection （P.putida） 本品系由高效表达人干扰素α2b基因的腐生型假单胞菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。 1基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2制造 2．1工程菌菌种 2．1．1名称及来源 重组人干扰素α2b工程菌株系由带有人干扰素α2b基因的重组质粒转化的腐生型假单胞菌菌株(Pseudomonas putida VG-4)。 2．1．2种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2．1．3菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 2．1．3．1划种LB琼脂平板 应呈典型腐生型假单胞菌集落形态，无其他杂菌生长。 2．1．3．2染色镜检 棒状，可运动，有荚膜，无芽孢。涂片染色后应呈典型的革兰阴性。 2．1．3．3对抗生素的抗性 应与原始菌种相符：硫酸链霉素150μg/ml，盐酸四环素50μg/ml和氨苄西林100μg/ml。 2．1．3．4电镜检查（工作种子批可免做） 应为典型腐生型假单胞菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 2．1．3．5生化反应 不液化明胶，不水解淀粉和聚β-羟基丁酸酯（附录ⅪⅤ）， 不能利用反硝化作用进行厌氧呼吸，能够合成荧光色素。 2．1．3．6干扰素表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量（1.0×109IU/L）。 2．1．3．7表达的干扰素型别 应用抗α2b型干扰素参考血清做中和试验，证明型别无误。 2．1．3．8质粒检查 该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。 2.1.3.9 目的基因核苷酸序列检查 目的基因核苷酸序列应与理论值相符。 2．2原液 2．2．1种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。 2．2．2发酵用培养基 采用适宜的不含任何抗生素的培养基。 2．2．3种子液接种及发酵培养 2．2．3．1在灭菌培养基中接种适量种子液。 2．2．3．2在适宜的温度下进行发酵，应根据批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（附录Ⅸ G）。 2．2．4发酵液处理 用高速离心法收集处理菌体。收集到的菌体可在-20℃以下保存1年。 2．2．5初步纯化 采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。 2．2．6高度纯化 经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为干扰素原液。除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。 2．2．7原液检定 按3.1项进行。 2.3半成品 2.3.1配制与除菌 2.3.1.1稀释液配制 按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。 2.3.1.2稀释与除菌 将检定合格加稳定剂白蛋白的干扰素原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品，保存于2～8℃。 2.3.2半成品检定 按3.2项进行。 2.4成品 2.4.1分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2.4.2分装及冻干 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.4.3规格 应为经批准的规格。 2.4.4包装 应符合“生物制品包装规程”规定。 3检定 3.1原液检定 3.1.1生物学活性 依法测定（附录Ⅹ C）。 3.1.2蛋白质含量 依法测定（附录Ⅵ B第二法）。 3.1.3比活性 为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于1.0×108IU。 3.1.4纯度 3.1.4.1电泳法 依法测定（附录Ⅳ C）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg(考马斯亮蓝R250染色法)或 5μg(银染法)。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。 3.1.4.2高效液相色谱法 依法测定（附录Ⅲ B）。色谱柱以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/L磷酸盐-0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量不低于20μg，于波长280nm处检测，以干扰素色谱峰计算理论板数应不低于1000。按面积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。 3.1.5分子量 依法测定（附录Ⅳ C）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，制品的分子质量应为19.2kD±1.92kD。 3.1.6外源性DNA残留量 每1支次人用剂量应不高于10ng（附录Ⅸ B）。 3.1.7宿主菌蛋白残留量 应不高于总蛋白质的0.02%（附录Ⅸ D）。 3.1.8残余抗生素活性 依法测定（附录Ⅸ A），不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。 3.1.9细菌内毒素检查 每300万IU应小于10EU（附录Ⅻ E 凝胶限量试验）。 3.1.10等电点 主区带应为5.7～6.7, 供试品的等电点与对照品的等电点图谱一致。（附录Ⅳ D）。 3.1.11紫外光谱扫描 用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100μg/ml～500μg/ml，在光路1cm、波长230nm～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为278nm±3nm（附录Ⅱ A）。 3.1.12肽图（至少每年测定1次） 依法测定（附录Ⅷ E），应与对照品图形一致。 3.1.13 N-末端氨基酸序列(至少每年测定1次) 用氨基酸序列 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪测定， N-末端序列应为： Cys-Asp-Leu-Pro- GluGln -Thr-His-Ser-Leu-Gly-Ser-Arg-Arg-Thr-Leu。 3.2半成品检定 3.2.1细菌内毒素检查 每300万IU应小于10EU，300万IU/支以上规格的，每支应小于10EU（附录Ⅻ E 凝胶限量试验）。 3.2.2无菌检查 依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。 3.3成品检定 除水分测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余项目的检定。 3.3.1鉴别试验 按免疫印迹法（附录Ⅷ A）或免疫斑点法（附录Ⅷ B）测定，应为阳性。 3.3.2物理检查 3.3.2.1外观 应为白色薄壳状疏松体，加入标示量注射用水后应迅速复溶为澄明液体。 3.3.2.2可见异物 依法检查（附录Ⅴ B），应符合规定。 3.3.2.3装量差异 按附录Ⅰ A中装量差异项进行，应符合规定。 3.3.3化学检定 3.3.3.1水分 应不高于3.0%。如制品中含葡萄糖则水分应不高于4.0%（附录Ⅶ D）。 3.3.3.2pH值 应为6.5～7.5（附录Ⅴ A ）。 3.3.3.3渗透压摩尔浓度 依法测定（附录V H），应符合批准的要求。 3.3.4生物学活性 应为标示量的80%～150%（附录Ⅹ C）。 3.3.5残余抗生素活性 依法测定（附录Ⅸ A），不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。 3.3.6无菌检查 依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。 3.3.7细菌内毒素检查 每1支次人用剂量应小于10EU（附录Ⅻ E凝胶限量试验）。 3.3.8异常毒性检查 依法检查（附录Ⅻ F小鼠试验法），应符合规定。 4保存、运输及有效期 于2～8℃避光保存和运输。自生产分装之日起，按批准的有效期执行。 5使用说明 应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。