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生物制品(三部)b型流感嗜血杆菌结合疫苗.doc

生物制品(三部)b型流感嗜血杆菌结合疫苗

开心
2018-09-08 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《生物制品(三部)b型流感嗜血杆菌结合疫苗doc》,可适用于医药卫生领域

b型流感嗜血杆菌结合疫苗bXingLiuganshixueganjunJieheYimiaoHaemophilusInfluenzaeTypebConjugateVaccine本品系用纯化的b型流感嗜血杆菌(Hib)荚膜多糖(CapsularpolysaccharideCPS)抗原通过己二酰肼(ADH)与破伤风类毒素(TetanustoxoidTT)蛋白共价结合制成。用于预防b型流感嗜血杆菌引起儿童的感染性疾病如脑膜炎、肺炎等。基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。制造菌种生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。菌种名称及来源采用b型流感嗜血杆菌CMCC或CMCC菌株来源于中国药品生物制品检定所。种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。种子批的传代主种子批启开后传代次数不超过代工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过代。种子批菌种的检定检定菌种可用含羊血的巧克力培养基或Hib综合培养基。培养特性b型流感嗜血杆菌菌种在普通营养琼脂培养基上不生长在含羊血的巧克力培养基或在Hib综合琼脂培养基上生长生长需要X因子(氯化血红素)、V因子(β辅酶A)卫星试验阳性菌落形状灰白色、半透明、光滑凸起湿润边缘规则。染色镜检应为革兰氏阴性短小杆菌、有荚膜有时连成线状亦可有单个阴性球菌。生化反应发酵葡萄糖、木糖、半乳糖产酸不产气。不发酵蔗糖、乳糖和果糖。赖氨酸脱羧酶反应呈阴性。血清学试验将在~℃培养的菌苔与Hib免疫血清进行玻片凝集试验应有强凝集反应。种子批的保存种子批应冻干后保存于℃以下。原液生产用种子启开工作种子批菌种接种在液体或固体Hib综合培养基上制备数量适宜的生产用种子。生产用培养基采用Hib综合培养基。不得含有对人体有害或其他过敏原物质。培养采用培养罐液体培养在培养过程中取样进行纯菌试验、涂片革兰氏染色镜检如发现污染杂菌应废弃。收获及杀菌于对数生长的后期或静止期的前期终止培养取样进行菌液浓度测定及纯菌检查然后于培养物中加入适宜浓度的甲醛溶液或脱氧胆酸钠溶液杀菌以确保杀菌完全及不损伤Hib荚膜多糖为宜。多糖提取和纯化将已杀菌的培养物离心去菌体后收集上清液采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)沉淀收集复合多糖乙醇沉淀收集粗制多糖或超滤浓缩后乙醇沉淀取上清然后加入适宜浓度的乙醇溶液沉淀多糖并依次用无水乙醇、丙酮洗涤沉淀物干燥后即为粗制多糖℃或以下保存。将粗制多糖溶解于饱和醋酸钠溶液中然后按适当比例用冷酚溶液重复抽提数次。收集上清液并透析或超滤脱酚再加乙醇至最终浓度为离心后收集沉淀物或超滤浓缩后乙醇沉淀取上清然后加入的乙醇溶液沉淀多糖依次用无水乙醇、丙酮于离心洗涤真空干燥所得固体即为精制多糖。多糖检定按项进行。保存及有效期保存于℃或以下保存时间按批准的执行。多糖衍生将精制多糖溶解后按适宜比例加入溴化氰进行活化然后向反应液中加入适宜浓度的己二酰肼溶液反应过夜。再将反应液超滤或透析。可冻干收集固体衍生物。多糖衍生物检定按项检定。保存及有效期保存于-℃或以下保存时间不超过天。载体蛋白载体蛋白为破伤风类毒素。破伤风类毒素原液制造和检定应符合“吸附破伤风疫苗”项规定。可采用柱色谱或其他经批准的方法对破伤风类毒素原液进一步纯化并配制至适宜浓度。多糖蛋白结合物的制备结合多糖衍生物与破伤风类毒素蛋白等量混合加入碳二亚胺(EDAC)进行反应。然后透析或超滤透析。结合物纯化结合物用柱色谱纯化,收集Vo附近的洗脱液合并各次层析收获的洗脱液即为纯化的结合物除菌过滤后,即为结合物原液。原液检定按项检定。保存及有效期保存于~℃保存时间不超过个月。半成品配制用氯化钠注射液稀释多糖结合物原液每毫升疫苗溶液含Hib荚膜多糖应不低于µg。半成品检定按项进行。成品分批应符合“生物制品分批规程”规定。分装应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。规格每瓶ml每次人用剂量ml含纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖µg。包装应符合“生物制品包装规程”规定。检定多糖检定鉴别试验采用免疫双扩散法(附录VIIIC)应与b型流感嗜血杆菌免疫血清形成明显沉淀线。化学检定固体总量依法测定(附录VIIM)。核糖含量以D核糖为对照应为mgg(附录XXXX)。磷含量应为mgg(附录VIIA)。蛋白质含量应小于mgg(附录VIB第二法)。核酸含量应小于mgg核酸在波长nm处的吸收系数(Ecm)为(附录IIA)。多糖分子大小测定采用SepharoseCLB凝胶柱(×cm)测定KD≤的多糖回收率应不低于。(附录XXX)。细菌内毒素检查应不高于EUµg(附录XIIE)。多糖衍生物检定己二酰肼含量应为–µgmg(附录XXXX)。残余氰化物含量应不高于ngmg(附录XXXX)。结合物原液检定鉴别试验采用免疫双扩散法(附录VIIIC)应与b型流感嗜血杆菌免疫血清及破伤风类毒素免疫血清形成明显沉淀线。化学检定多糖含量以D核糖为对照按核糖含量计算结合物中多糖含量应不低于µgml(附录XXXX)。蛋白质含量应不低于µgml(附录VIB第二法)。多糖与蛋白质的比值按和测定结果计算应为。高分子结合物含量高分子结合物应为或游离多糖≤(附录XXXX)。分子大小测定采用SepharoseCLB凝胶柱(×cm)测定KD值应不高于KD值小于的洗脱液回收率应不低于。(附录VIIIG)EDAC残留量采用Nwilchek方法测定EDAC残留量应低于µmolL(附录XXXX)。无菌检查依法检查(附录XIIA)应符合规定。细菌内毒素检查应不高于EUµg(附录XIIE)。半成品检定无菌试验依法检查(附录XIIA)应符合规定。成品检定鉴别试验采用免疫双扩散法(附录VIIIC)应与b型流感嗜血杆菌免疫血清及破伤风类毒素免疫血清形成明显沉淀线。物理检查外观检查应为无色透明液体无异物。装量按附录IA中装量项进行检查应不低于标示量。化学检定pH值应为~(附录VA)。氯化钠含量应为L(附录VIIG)。多糖含量以D核糖为对照按核糖含量计算供试品中多糖含量每1次人用剂量应为~µg(附录XXXX)。高分子结合物含量高分子结合物应为或游离多糖≤(附录XXXX)。分子大小测定采用SepharoseCLB凝胶柱(×cm)KD值小于的洗脱液回收率应大于(附录VIIIG)。效力试验每批疫苗皮下注射体重克NIH(或BALbc)小鼠只另取同批小鼠只作为对照注射氯化钠溶液。于第、日皮下注射两次每次注射剂量为含µg多糖的Hib结合疫苗于第~日经眼眶后静脉采血以ELISA法测定抗HibIgG抗体以氯化钠溶液对照组小鼠血清的A值求出Cutoff值疫苗组应有%以上小鼠的血清抗HibIgG抗体水平高于Cutoff值。无菌检查依法检查(附录XIIA)应符合规定。热原检查依法检查(附录XIID)应符合规定。注射剂量按家兔体重每kg注射µg多糖。异常毒性检查依法检查(附录XIIF)应符合规定。细菌内毒素检查每次人用剂量应不高于EU(附录XIIE)。保存、运输与效期于℃保存和运输自生产之日起效期为个月。使用说明b型流感嗜血杆菌结合疫苗使用说明【药品名称】通用名:b型流感嗜血杆菌结合疫苗英文名:HaemophilusinfluenzaeTypebConjugateVaccine汉语拼音:bXingLiuganshixueganjunJieheYimiao【成分和性状】本品系用纯化的b型流感嗜血杆菌荚膜多糖与破伤风类毒素共价结合而成。为无色透明液体含防腐剂不含异物或凝块。辅料:按批准的执行。【接种对象】或月龄婴儿~周岁儿童。【作用与用途】本疫苗接种后可使机体产生体液免疫应答。用于预防由b型流感嗜血杆菌引起的侵袭性感染(包括脑膜炎、肺炎、败血症、蜂窝组织炎、关节炎、会厌炎等)。【规格】每瓶为ml每次人用剂量为ml含纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖应不低于µg。【免疫程序和剂量】臀部外上方处或上臂外侧三角肌附着处皮肤经消毒后肌肉注射。免疫程序及剂量:自()月龄开始每隔个月或个月接种一次(ml)共三次在个月时进行加强接种一次~月龄儿童每隔个月或个月注射一次(ml)共二次在个月时进行加强接种一次~周岁儿童仅需注射一次(ml)。【不良反应】注射后一般无副反应有的接种部位有轻微红肿、硬结、压痛、低热或伴有皮疹偶有局部瘙痒感一般不须特殊处理即行消退。必要时可对症治疗。全身反应:主要为发热(多在℃以下)偶有烦躁、嗜睡、呕吐、腹泻、食欲不振少有会出现非典型的皮疹症状一般可自行缓解。【禁忌】()患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。()已知对该疫苗的任何成份有过敏反应特别对破伤风类毒素过敏者。()严重心脏病、高血压患肝、肾脏病者。【注意事项】()以下情况者慎用:家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者。()使用前应充分摇匀如出现摇不散的凝块有异物疫苗瓶有裂纹制品曾经冻结标签不清或过期失效者不可使用。()接受免疫抑制治疗或免疫缺陷患者注射本疫苗可能影响疫苗的免疫效果。()应备有肾上腺素等药物以供偶有发生的严重过敏反应时急救用接受注射者在注射后应在现场观察至少分钟。()本疫苗如与其它疫苗同时接种应在不同的部位注射。()在任何情况下疫苗中的破伤风类毒素不能代替常规破伤风类毒素的免疫接种。【贮藏】于~℃避光保存和运输。【包装】【有效期】个月。【执行标准】【批准文号】【生产企业】企业名称:生产地址:邮政编码:电话号码:传真号码:网址:附录多糖含量测定本法系依据可溶性糖经无机酸处理脱水产生糠醛(戊糖)或糠醛衍生物生成物能与酚类化合物缩合生成有色物质以此测定Hib结合物中多糖的含量。试剂()(wv)三氯化铁浓盐酸溶液称取三氯化铁(FeCl·HO)加浓盐酸使溶解成ml。()地衣酚(甲基间苯二酚)乙醇溶液称取地衣酚g放入ml容量瓶中加乙醇至ml(临用前配制)。()µgml核糖对照品溶液称取D核糖mg加水至ml。测定法取ml水加入ml三氯化铁浓盐酸溶液混匀后再加入ml地衣酚乙醇溶液,混匀。沸水浴分钟冰水浴在nm波长测A值作为空白对照。先将供试品用水稀释到核糖含量应不高于µgml然后取ml待测样品加水ml自“加入ml三氯化铁浓盐酸溶液”起,同法操作。分别取核糖对照品溶液(μgml)ml、ml、ml、ml、ml、ml于ml试管中每管依次加水ml、ml、ml、ml、ml、ml自“加入m三氯化铁浓盐酸溶液”起同法操作。结果计算用核糖对照品溶液的浓度对其相应的A值作直线回归得直线回归方程。将待测样品的A值代入直线回归方程求出待测样品核糖含量a(µgml)。待测样品多糖含量(μgml)=a×待测样品稀释倍数附录己二酰肼含量测定本法系依据在四硼酸钠存在的条件下己二酰肼中氨基基团能与三硝基苯磺酸(TNBS)发生显色反应采用采用紫外可见分光光度法测定Hib多糖衍生物中己二酸二肼(ADH)的含量。试剂()己二酰肼对照品贮备溶液(mgml)取ADHg精密称定加水定容至ml℃保存。()己二酰肼对照品工作溶液(µgml)精密量取ADH标准贮备液ml加水定容至ml。()四硼酸钠溶液称取四硼酸钠(NaBO·HO)g加水定容至ml室温保存。()TNBS溶液量取TNBSml加水定容至ml℃保存。测定法量取四硼酸纳溶液ml加水ml混匀再加入的TNBS溶液ml混匀于室温放置分钟于nm波长下测定A值作为空白对照先将供试品用水稀释到ADH浓度应不高于µgml然后取ml加入四硼酸纳溶液ml自“加入的TNBS溶液ml”起同法操作。分别取ADH对照品工作溶液(µgml)ml、ml、ml、ml、ml每管依次加水ml、ml、ml、ml、ml加入四硼酸纳溶液ml自“加入的TNBS溶液ml”起同法操作。结果计算用ADH对照品工作溶液的浓度对其相应的A值作直线回归得直线回归方程将待检样品的A值代入直线回归方程求出待检样品ADH含量B(µgml)。ADH的含量可计算为:B×稀释倍数×X(mgml)式中B为样品中ADH含量X为样品中衍生物多糖含量。附录残余氰化物含量测定本法系依据在酸性条件下溴化氰与吡啶联苯胺发生显色反应采用采用紫外可见分光光度法测定Hib多糖衍生物物中溴化氰的含量。试剂吡啶联苯胺溶液(临用前配制):取联苯胺g精密称定加入的吡啶溶液ml(取吡啶ml,加水ml)溶解再加入盐酸ml(取浓盐酸ml,加水ml)混匀。对照品溶液的制备:mgml溴化氢对照品储备溶液:临用前配制,取溴化氰mg,精密称定加水ml(乙腈助溶)。。ng/ml溴化氢对照品工作溶液:精密量取溴化氢对照品储备液ml加水至ml混匀。供试品溶液制备:取多糖衍生物适量配制成mgml用于检测。测定法量取吡啶联苯胺溶液ml加水ml混匀℃以下、暗处放置分钟后于nm下测定A值作为空白对照。取试品用ml吡啶联苯胺溶液ml混匀℃以下、暗处放置分钟后于nm下测定A值。分别取溴化氢对照品工作液(ngml)ml、ml、ml、ml、ml、ml每管依次加水ml、ml、ml、ml、ml、ml加入吡啶联苯胺溶液ml混匀℃以下、暗处放置分钟后于nm下测定A值。结果计算用溴化氢对照品工作液的含量对其相应的A值作直线回归得直线回归方程将供试品的A值代入直线回归方程求出供试品溴化氢含量B(ngml)。供试品中溴化氰的含量(ngmg)=B式中B为样品中溴化氰含量(ngml)为样品中衍生物含量。附录高分子结合物含量测定本法系利用高分子结合物与低分子结合物及游离多糖在不同乙醇浓度下沉淀分离采用采用紫外可见分光光度法测定磷含量以此确定高分子结合物的含量。试剂()molL氯化钠溶液取氯化钠g精密称定加水溶解并稀释至ml室温保存。()molL硫酸于体积%的浓硫酸中加入体积的水混匀制得。()%(wv)钼酸铵称取钼酸铵g加水溶解并稀释至ml。()%(wv)抗坏血酸称取抗坏血酸g加水溶解并稀释至ml。()矿化试剂浓硫酸与高氯酸等体积混合制得。()产色试剂水、molL硫酸、%(wv)钼酸铵、%(wv)抗坏血酸按体积比:::混合制得。()μgml磷对照品贮备溶液取经℃干燥的磷酸氢二钠g精密称定加水ml、molL硫酸溶液ml溶解补加水至ml。临用时将贮备液稀释即为µgml磷对照品工作溶液。()moll氢氧化钠溶液称取g氢氧化钠加水溶解并稀释至ml。供试品的制备()分步沉淀原液用生理盐水稀释至多糖含量-μgml或成品疫苗ml加入molL氯化钠溶液ml混匀后加入无水乙醇ml置℃冰箱放置小时于转分钟、℃离心分钟吸取上清为样品于沉淀中加入乙醇溶液ml加玻璃珠混合后室温放置小时。再加入乙醇溶液ml混合后室温放置小时然后于转分钟、℃离心小时。吸取ml上清为样品沉淀再加入molL氢氧化钠溶液ml混合后室温放置小时加水ml为样品。()取多糖含量-μgml或成品疫苗ml为样品()样品矿化分别取mm样品、ml样品、ml样品、ml样品各份加入矿化试剂ml置℃干燥小时然后升温至℃干燥分钟再升温至℃干燥小时。测定法取水ml加矿化试剂µl后加ml产色试剂混匀后于℃水浴小时在nm波长测定A值作为空白对照。于矿化好的供试品中加水ml加产色试剂ml混匀后置℃水浴小时在nm波长测A值。分别量取磷对照品工作溶液ml、ml、ml、ml、ml于试管中每管依次加水ml、ml、ml、ml、ml。然后每管分别加入矿化试剂µl后加ml产色试剂混匀后于℃水浴小时在nm波长测A值。结果计算用磷对照品溶液的浓度对其相应的A值作直线回归得直线回归方程。将供试品的A值代入直线回归方程求出磷含量。供试品磷含量(µgml)分别为:P=(A×)P=(A×)P=(A×)P=(A×)–(P×)试验有效性≤P(PPP)≤供试品高分子化合物含量(%)=P(PPP)×供试品游离多糖含量(%)=-P(PPP)×式中P、PPP为样样样样的磷含量AAAA为样样样样中取样矿化后的磷含量。附录碳二亚胺(EDAC)残留量测定法本法系依据二甲基巴比妥酸试液与碳二亚胺反应形成紫红色络合物采用紫外可见分光光度法测定碳二亚胺的含量。试剂()二甲基巴比妥酸试液(Dimelhybarbituricacid)(临用现配)称取二甲基巴比妥酸g于ml吡啶中并加水至ml混匀即得。()乙酸吡啶溶液(AeclicacidPyridine)(临用现配)将等体积的冰乙酸和吡啶混匀即得。()µmolL碳二亚胺(EDAC)对照品储备液(临用现配)称取gEDAC以水溶解并定容至ml得mmolL溶液准确量取mmolL溶液ml于ml容量瓶定容至刻度即得µmolLEDAC对照品储备液。()EDAC对照品工作溶液的制备取µmolL碳二亚胺(EDAC)对照品储备液用水分别稀释至、、、、µmolL即为EDAC对照品工作溶液。测定法取供试品和EDAC对照品工作溶液各ml分别加入二甲基巴比妥酸试液ml另取水ml作为空白对照同法操作混匀各管室温暗处静置分钟分别加入乙酸吡啶溶液ml混匀后于nm波长处测定A值(如试验有干扰在测吸光值前rpm离心分钟)。结果计算用EDAC对照品溶液的浓度对其相应的A值作直线回归得直线回归方程。将供试品的A值代入直线回归方程求出含量取其平均值。供试品EDAC残留量(µmolL)=EDAC的平均浓度×稀释倍数

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