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首页 2010年版《中国药典》三部微生态活菌制品总论征求意见稿

2010年版《中国药典》三部微生态活菌制品总论征求意见稿.doc

2010年版《中国药典》三部微生态活菌制品总论征求意见稿

开心
2018-09-08 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《2010年版《中国药典》三部微生态活菌制品总论征求意见稿doc》,可适用于医药卫生领域

微生态活菌制品总论(征求意见稿)微生态活菌制品系由人体内正常菌群成员或具有促进正常菌群生长和活性作用的无害外籍细菌经培养、收集菌体、干燥成菌粉后加入适宜辅料混合制成。用于预防和治疗因菌群失调引起的相关症状和疾病。微生态活菌制品必须由非致病的、活的细菌组成无论在生产过程、制品贮存和使用期间均应保持稳定的活菌状态。它可由一株细菌制成单价制剂也可由多株或几种细菌联合制成多价制剂。根据其不同的使用途径和方法可制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂等多种剂型。目前国内已经批准生产的微生态活菌制品有种(见附录)其中大多用于防治肠道菌群失调。制造微生态活菌制品的制备方法、工艺应能保证成品含有足够的活菌数量保持其稳定性同时应防止外源因子的污染。一、基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。二、生产用菌种生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。、菌种名称及来源选用的生产菌种应来自人体内正常菌群或对人体无毒无害、具有促进正常菌群生长和活性作用的外籍细菌细菌分离过程和传代背景应清晰应具备稳定的生物学和遗传学特性并能保持稳定的活菌状态。应经实验室和临床试验证明安全、有效。种子批的建立生产用菌种应按照“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定建立种子批系统。三级种子批应分别冻干置适宜温度保存种子批传代应限定传代次数原始种子批和主种子批启开后传代次数不得超过代工作种子批启开后至发酵培养传代次数不得超过代。、种子批检定菌种的属、种型分类鉴定应依据最新版伯杰氏细菌系统鉴定手册(Bergey’sManualofSystematicBacteriology)和伯杰氏细菌命名手册(Bergey’sManualofDeterminativeBacteriology)的有关规定包括形态、生长代谢特性检查原始种子或主种子还应作遗传特性和抗生素敏感性等检查。三级种子批常规检查包括以下三项:()培养特性及染色镜检将菌种接种于适宜培养基置有氧或厌氧环境中培养观察其生长情况确定菌种为需氧性细菌或厌氧性细菌以划线法观察在琼脂平板上生长的单个菌落的形状、大小、表面、边缘、透明度、色泽等特征也可比较菌种在不同温度、pH、或氯化钠浓度等条件下的生长特性等。取菌种的新鲜培养物涂片作革兰染色在显微镜下观察菌体的染色反应、形态、大小和排列等有芽孢的细菌应同时观察芽孢的形状、大小和位置(也可增做芽孢染色)。检查结果均应符合原始菌种的特性。()生化反应按附录XIV“细菌生化反应培养基”选择相应的培养基或其它适宜的方法进行结果应符合原始菌种的特性。()毒性试验毒性试验是通过动物试验检查菌种是否存在不安全因素以保证人体使用安全。用体重~g小鼠只每只腹腔注射ml新鲜菌液(不少于×CFUml)连续观察天小鼠均应健康存活、体重增加或每只小鼠经口灌胃ml新鲜菌液(不少于×CFUml)每天次连续天,从第天灌胃起连续观察至第天,小鼠均应健康存活体重增加。除另有规定外原始种子或主种子批还需进行以下检查:①细菌代谢产物脂肪酸测定用气相色谱法(附录ⅢC)或其他适宜的方法进行应符合该菌种的特性。②遗传特性分析可采用细菌DNA的GCmol的含量测定或其他适宜方法进行应符合该菌种的遗传特性。③抗生素敏感性试验采用琼脂扩散纸片法或其他适宜方法进行菌株的抗生素敏感性检查应符合该菌种的特性。④稳定性试验菌种在适宜培养基中连续传代代次后将第代培养物作种子批检定全部检查结果应与原始菌种的特性一致。三、菌粉制造应包括种子液制备、大罐培养、收获菌体(或芽孢)和菌体干燥制成菌粉。如生产多价制品时应每种菌分别培养制备单价菌粉。、生产用种子启开工作种子批菌种接种于适宜培养基进行多级种子扩增应涂片作革兰染色在显微镜下观察~个视野细菌的染色反应、形态应一致并符合生产用菌种的特征。制备过程应防止污染菌种传代次数应符合规定。、生产用培养基采用经批准的培养基用于生产。、培养采用液体培养。将种子液置适宜条件下培养(包括厌氧或需氧、温度、时间等)培养过程中取样涂片作革兰染色镜检、PH值检测等芽孢菌需进行芽孢形成率的检测均应符合规定。培养结束后取样做纯菌检查如发现污染应予废弃。生产多价制品的单价菌粉时应分别培养。、收获菌体和制成菌粉培养结束后离心收获湿菌体与适宜的分散剂、稳定剂混合。采用冷冻真空干燥法干燥菌体芽孢菌可采用加热干燥方法再经粉碎、过筛制成粉末状菌粉。、菌粉的保存与有效期应通过活菌稳定性试验确定保存温度和有效期。、菌粉检定按“菌粉检定”项进行符合规定后方能进行半成品配制。四、半成品、配制根据菌粉的活菌数量以适宜比例与辅料混合均匀后制成半成品。配制多价制品时应将各单价菌粉、辅料按配方比例和配制程序混合均匀配制过程应防止污染。、半成品检定按“半成品检定”项进行并符合规定。五、成品、剂型制备根据制品的用途、使用对象和用药途径等因素确定剂型。制备过程应符合附录Ⅰ“制剂通则”项下相关剂型的规定。、分批应符合“生物制品分批规程”规定。、分装、规格和包装制品的分装应符合附录Ⅰ“制剂通则”的有关规定。包装应符合“生物制品包装规程”的有关规定。规格应符合批准的规格要求。检定微生态活菌制品质量检定应包括菌粉检定、半成品检定和成品检定。一、菌粉检定、外观应为白色、灰白色或灰黄色粉末。、目的菌检查取少量菌粉加入适量灭菌生理氯化钠溶液或适宜稀释液后涂布在适宜琼脂平板上在适宜条件下培养其培养物的生长特性和染色镜检的特征应符合生产用菌种特征。、杂菌检查:杂菌检查:方法和结果判断见本总论附录。如不符合规定应废弃。、干燥失重菌粉中残余水分的含量会直接影响活菌的生存须进行菌粉干燥失重的检查。应按附录ⅦL或仪器方法测定。、活菌数测定测定每克菌粉中含有的活菌数量。方法见本总论附录。二、半成品检定半成品须作杂菌检查根据用药途径确定杂菌检查的质控指标。方法和结果判断见本总论附录。三、成品检定、鉴别试验检查成品中所含的目的细菌是否符合生产用菌种的特性。即按上述“种子批检定”方法进行生长特性、染色镜检和生化反应检查应符合规定。对于多价制品则须逐一检查单价菌。、理化检查()外观性状根据剂型观察制品的外观、色泽。片剂外观应完整光洁呈白色或类白色间有菌粉色斑颗粒剂、散剂和胶囊剂内粉末的粒子大小应一致色泽均匀间有菌粉色斑。()干燥失重按附录ⅦL或仪器方法测定减失重量应不得超过芽孢菌制品应不得超过。()粒度散剂和颗粒剂应进行粒度检查。按附录VG第二法采用单筛分法或双筛分法检查应符合规定。()装量(重量)差异各剂型按附录Ⅰ“制剂通则”的相应规定进行应符合规定。()崩解时限胶囊剂、片剂按附录ⅤC进行应符合规定。、活菌数测定按本总论附录方法测定每克制品活菌数应符合规定。多价制品应分别测定各单价活菌数。、杂菌检查目的是检查成品中外源性微生物的污染情况和是否存在意外的不安全因素以保证人体使用安全。方法和结果判断与半成品的“杂菌检查”项相同。、安全试验:安全试验是通过动物试验进行的非特异性毒性检查应根据制品的使用途径和人用剂量确定试验方法。肠道微生态制品照下述方法检查:取g制品加入ml生理盐水中混合均匀用只体重~g小鼠每只小鼠经口灌胃ml每天次连续天。自第日灌胃起连续观察天小鼠应健康存活、体重增加判为合格。如不符合规定可用只小鼠复试次判定标准同前。阴道微生态制品照下述方法检查用~g雌性小鼠只每只小鼠阴道内置入mg制品每天次连续天。从给药第天连续观察天小鼠应健康存活阴道局部无红肿分泌物等症状体重增加判为合格。保存、运输及有效期按批准的温度保存和运输自半成品配制之日起按批准的有效期执行。使用说明应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。附录已批准的微生态活菌制品制品名称细菌种类一、双歧杆菌活菌胶囊青春型双歧杆菌二、双歧杆菌活菌散青春型双歧杆菌三、双歧杆菌三联活菌胶囊长型双歧杆菌嗜酸乳杆菌粪肠球菌四、双歧杆菌三联活菌散长型双歧杆菌嗜酸乳杆菌粪肠球菌五、双歧杆菌乳杆菌三联活菌片长型双歧杆菌保加利亚乳杆菌嗜热链球菌六、地衣芽孢杆菌活菌胶囊地衣芽孢杆菌七、地衣芽孢杆菌活菌颗粒地衣芽孢杆菌八、地衣芽孢杆菌活菌片地衣芽孢杆菌九、蜡样芽孢杆菌活菌胶囊蜡样芽孢杆菌十、蜡样芽孢杆菌活菌片蜡样芽孢杆菌十一、双歧杆菌四联活菌片婴儿双歧杆菌嗜酸乳杆菌粪肠球菌蜡样芽孢杆菌十二、酪酸梭菌活菌胶囊酪酸梭状芽孢杆菌十三、酪酸梭菌活菌散酪酸梭状芽孢杆菌十四、酪酸梭菌活菌片酪酸梭状芽孢杆菌十五、凝结芽孢杆菌活菌片凝结芽孢杆菌十六、酪酸梭菌二联活菌胶囊酪酸梭状芽孢杆菌婴儿型双歧杆菌十七、酪酸梭菌二联活菌散酪酸梭状芽孢杆菌婴儿型双歧杆菌十八、枯草杆菌活菌胶囊枯草芽孢杆菌十九、枯草杆菌肠球菌二联活菌多维颗粒枯草芽孢杆菌屎肠球菌二十、枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊枯草芽孢杆菌屎肠球菌二十一、凝结芽孢杆菌活菌片凝结芽孢杆菌二十二、阴道用乳杆菌活菌胶囊德氏乳杆菌附录活菌数测定无菌称取g制品(或菌粉)加入ml稀释液中充分摇匀作倍系列稀释(最终稀释度根据不同的指标要求而定)取最终稀释度μl滴入选择性琼脂培养基平皿上共做个平皿并以玻棒涂布均匀置适宜条件下培养到期观察每个平皿菌落生长情况并计数。但必须注意当平皿菌落数小于或大于时应调整最终稀释度重新测定。根据个平皿菌落总数按下列公式计算活菌数。活菌数(CFUg)=××最终稀释度附注:()活菌数用“CFU”表示即为细菌集落单位。()稀释液通常使用生理氯化钠溶液。()选择性琼脂培养基是指最适宜制剂(或菌粉)中活菌生长的培养基。须经批准后才能使用。附录杂菌检查法微生态活菌制品杂菌检查法系检查微生态活菌制品及半成品、菌粉受外源微生物污染程度的方法。检查项目包括控制菌、非致病性杂菌总数、真菌数检查。杂菌检查应在环境洁净度级下的局部洁净度级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。供试品检查时如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂应证明其有效性及对微生物无毒性。除另有规定外本检查法中细菌培养温度为~℃真菌培养温度为~℃。检验结果以g为单位报告。供试品的准备检验时应从个以上最小包装单位中抽取供试品一般应随机抽取不少于倍的检验用量。一次试验所用的供试品量即为检验量(g)。除另有规定外直接称取g菌粉、半成品、成品(片剂、胶囊剂先研碎)备用。控制菌检查控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。菌种试验所用的菌株传代次数不得超过代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第代)并采用适宜的菌种保藏技术以保证试验菌株的生物学特性。破伤风梭状芽孢杆菌检查以生孢梭菌作为指示菌。大肠埃希菌(Escherichiacoli)〔CMCC(B)〕金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)〕乙型付伤寒沙门菌(SalmonellaparatyphiB)〔CMCC(B)〕铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC(B)〕生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)〔CMCC(B)〕白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)〕痢疾志贺菌(Shigelladysenteriae)〔CMCC(B)〕菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中培养~小时接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中培养~小时。用无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为~cfu或~cfu的菌悬液。菌悬液制备后应在小时内使用若保存在~℃的菌悬液可以在小时内使用。适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查所用的菌株及检测项目见表。表控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指示能力检查控制菌培养基特性试验菌株大肠埃希菌胆盐乳糖培养基促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌曙红亚甲蓝琼脂促生长能力指示能力大肠埃希菌沙门菌、志贺菌胆盐乳糖培养基促生长能力乙型付伤寒沙门菌痢疾志贺菌抑制能力金黄色葡萄球菌沙门、志贺属琼脂促生长能力指示能力乙型付伤寒沙门菌、痢疾志贺菌铜绿假单胞菌NAC液体促生长能力铜绿假单胞菌抑制能力金黄色葡萄球菌NAC琼脂促生长能力铜绿假单胞菌抑制能力大肠埃希菌绿脓菌素测定用培养基促生长能力指示能力铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌氯化钠肉汤促生长能力金黄色葡萄球菌抑制能力大肠埃希菌甘露醇盐琼脂促生长能力指示能力金黄色葡萄球菌抑制能力大肠埃希菌梭菌梭菌增菌培养基促生长能力生孢梭菌哥伦比亚琼脂促生长能力生孢梭菌白色念珠菌沙氏葡萄糖肉汤促生长能力白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂促生长能力指示能力白色念珠菌念珠菌显色培养基促生长能力指示能力白色念珠菌抑制能力大肠埃希菌吐温玉米琼脂培养物促生长能力指示能力白色念珠菌增菌培养基促生长能力检查:分别接种不大于cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较被检培养基管试验菌应生长良好。固体培养基促生长能力检查:取试验菌各ml(含菌数~cfu)分别涂布于被检培养基和对照培养基平皿中每种培养基平行制备个平皿在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养计数。被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比应不小于且生长的菌落形态应一致。培养基抑制能力检查:接种试验菌于被检培养基中在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养试验菌应不得生长。培养基指示能力检查:分别接种少量试验菌于被检培养基和对照培养基平皿上在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。供试品检查供试品的控制菌检查应按下述方法进行。阳性对照试验供试品进行控制菌检查时应做阳性对照试验。取阳性对照菌于相应选择性培养基平皿上划线接种按供试品的控制菌检查方法培养观察菌落生长情况。阳性对照试验应检出相应的控制菌。阴性对照试验取增菌液ml照相应控制菌检查法检查作为阴性对照。阴性对照应无菌生长。大肠埃希菌检查增菌培养称取供试品g加到ml灭菌胆盐乳糖增菌液中,培养~小时。特异培养将上述增菌液摇匀取ml滴加到曙红亚甲蓝琼脂平皿上以玻棒涂匀一式份培养~小时观察菌落生长情况。结果判定阳性对照平皿应长出紫黑色、圆形、稍凸起、边缘整齐、表面光滑、带有金属光泽的菌落。供试品平皿上若未见菌落生长、或生长的菌落与阳性对照的菌落形态特征不符判供试品未检出大肠埃希菌若生长的菌落与阳性对照的菌落形态特征相符或疑似应作革兰氏染色镜检等适宜的鉴定试验鉴别是否为制品中的目的菌或大肠埃希菌。志贺、沙门菌检查增菌培养称取供试品g加到ml灭菌胆盐乳糖增菌液中,培养~小时。特异培养将上述增菌液摇匀取ml滴加到沙门、志贺属琼脂平皿上以玻棒涂匀一式份培养~小时观察菌落生长情况。结果判定阳性沙门菌对照平皿应长出无色透明或半透明、圆形、光滑、稍隆起菌落中心呈黑褐色。阳性志贺菌对照平皿应长出无色、半透明、圆形、微突、光滑、的菌落。供试品平皿培养小时、小时各观察结果次若未见菌落生长判供试品未检出志贺、沙门菌若有菌落生长应与阳性对照的菌落比较并作革兰染色镜检等适宜的鉴定试验鉴别是否为制品中的目的菌或志贺、沙门菌。铜绿假单胞菌检查增菌培养称取供试品g加到ml的NAC液体中,培养~小时。特异培养将上述增菌液摇匀取ml滴加到NAC琼脂平皿上以玻棒涂匀一式份培养~小时观察菌落生长情况。结果判定阳性对照平皿应长出产绿色色素的菌落可使整个培养基呈绿色。如平皿上无菌落生长或生长的菌落与阳性对照菌落形态特征不符判供试品未检出铜绿假单胞菌。如平皿生长的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似应挑选~个菌落分别接种于营养琼脂培养基斜面上培养~小时。取斜面培养物进行革兰染色、镜检及氧化酶试验鉴别是否为制品中的目的菌或铜绿假单胞菌。氧化酶试验取洁净滤纸片置于平皿内用无菌玻棒取斜面培养物涂于滤纸片上滴加新配制的%二盐酸二甲基对苯二胺试液在秒内若培养物呈粉红色并逐渐变为紫红色为氧化酶试验阳性否则为阴性。若斜面培养物为非革兰阴性无芽孢杆菌或氧化酶试验阴性均判供试品未检出铜绿假单胞菌。否则应进行绿脓菌素试验。绿脓菌素(Pyocyanin)试验取斜面培养物接种于PDP琼脂培养基斜面上培养小时加三氯甲烷~ml至培养管中搅碎培养基并充分振摇。静置片刻将三氯甲烷相移至另一试管中加入molL盐酸试液约ml振摇后静置片刻观察。若盐酸溶液呈粉红色为绿脓菌素试验阳性否则为阴性。同时用未接种的PDP琼脂培养基斜面同法作阴性对照阴性对照试验应呈阴性。若上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿脓菌素试验阳性判供试品检出铜绿假单胞菌。若上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿脓菌素试验阴性应继续进行适宜的鉴定试验确认是否为铜绿假单胞菌。金黄色葡萄球菌检查增菌培养称取供试品g加到ml灭菌的%氯化钠肉汤中,培养~小时。特异培养将上述增菌液摇匀取ml滴加到甘露醇高盐琼脂平皿上以玻棒涂匀一式份培养~小时观察菌落生长情况。结果判定阳性对照平皿应长出产金黄色素的圆形、凸起边缘整齐的菌落。供试品平皿上若未见菌落生长或生长的菌落与阳性对照菌落形态不符判未检出金黄色葡萄球菌若平皿上生长的菌落与阳性对照品的菌落特征相符或疑似应挑选~个菌落分别接种于营养琼脂培养基斜面上培养~小时。取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色并接种于营养肉汤培养基中培养~小时作血浆凝固酶试验。血浆凝固酶试验取灭菌小试管支各加入血浆和无菌水混合液(∶)ml再分别加入可疑菌株的营养肉汤培养物(或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液)ml、金黄色葡萄球菌营养肉汤培养物(或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液)ml、营养肉汤或无菌氯化钠溶液ml即为试验管、阳性对照管和阴性对照管。将管同时培养小时后开始观察直至小时。阴性对照管的血浆应流动自如阳性对照管血浆应凝固若试验管血浆凝固者为血浆凝固酶试验阳性否则为阴性。如阳性对照管或阴性对照管不符合规定时应另制备血浆重新试验。若上述疑似菌为非革兰阳性球菌、血浆凝固酶试验阴性亦非制品中的目的菌判供试品未检出金黄色葡萄球菌。破伤风梭状芽孢杆菌增菌培养取供试品g或ml份其中份置℃保温分钟后迅速冷却。上述份供试液直接或处理后分别接种至ml的梭菌增菌培养基中置厌氧条件下培养小时。特异培养取上述每一培养物ml分别涂布接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平皿上一式份置厌氧条件下培养~小时。结果判定若供试平皿上无菌落生长判供试品未检出破伤风梭状芽孢杆菌若平皿上有菌落生长应挑选~个菌落进行革兰染色等适宜的鉴定试验。若上述疑似菌为革兰阳性梭状芽孢菌应进行芽孢的位置、大小、形态的观察等适宜的鉴定试验判断是否为破伤风梭状芽孢杆菌。白色念珠菌(Candidaalbicans)增菌培养取供试品g或ml接种至ml的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养~小时。特异培养取上述培养物ml滴加到沙氏葡萄糖琼脂培养基平皿上以玻棒涂匀一式份培养~小时(必要时延长至小时)。结果判定阳性对照平皿应长出乳白色偶见淡黄色的菌落菌落表面光滑有浓酵母气味培养时间稍久则菌落增大颜色变深、质地变硬或有皱摺。若供试品平皿上未见菌落生长或生长的菌落与阳性对照菌落形态特征不符判供试品未检出白色念珠菌。如平皿上生长的菌落与阳性对照菌落形态特征相符或疑似应挑选~个菌落分别接种至念珠菌显色培养基平皿上培养~小时(必要时延长至小时)。若平皿上无绿色或翠绿色的菌落生长判供试品未检出白色念珠菌。若平皿上生长的菌落为绿色或翠绿色挑取相符或疑似的菌落接种于吐温玉米琼脂培养基上培养~小时。取培养物进行革兰染色镜检及芽管试验。芽管试验挑取吐温玉米琼脂培养基上的培养物接种于加有一滴血清的载玻片上盖上盖玻片置湿润的平皿内置~℃、~h置显微镜下观察可见到由孢子长出短小芽管。若上述疑似菌为非革兰阳性菌显微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管亦非制品中的目的菌判供试品未检出白色念珠菌。非致病性杂菌、真菌计数计数培养基的适用性检查非致病性杂菌、真菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查包括成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。菌种对试验菌种的要求同控制菌培养基的适用性检查。大肠埃希菌(Escherichiacoli)〔CMCC(B)〕金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)〕枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)〔CMCC(B)〕白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)〕菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中培养~小时接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中培养~小时。上述培养物用无菌氯化钠溶液制成每ml含菌数为~cfu或~cfu的菌悬液。菌悬液制备后应在小时内使用若保存在~℃的菌悬液可以在小时内使用。适用性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液各ml(含~cfu)分别注入无菌平皿中立即倾注营养琼脂培养基每株试验菌平行制备个平皿混匀凝固置~℃培养小时计数取白色念珠菌液ml(含~cfu)注入无菌平皿中立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基每株试验菌平行制备个平皿混匀凝固置~℃培养小时计数。或采用涂布法取上述菌液各ml(含菌数~cfu)分别涂布于相应琼脂培养基平皿上以玻璃棒涂布均匀一式份同法培养计数。同时用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果判定被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。供试品检查供试品的非致病性杂菌、真菌检查应按下述方法进行。阳性对照除另有规定外真菌以白色念珠菌为对照菌其它以金黄色葡萄球菌为对照菌。除另有规定外选用营养琼脂用于非致病性杂菌的检查玫瑰红钠琼脂培养基用于真菌计数。真菌检查称取供试品g加到ml灭菌%氯化钠溶液或其它适宜稀释液中,混匀倍系列稀释取适宜稀释度供试液ml加到已备好的玫瑰红钠琼脂培养基上以玻璃棒涂匀一式份倒置恒温培养箱中培养小时每天观察结果记录平皿上生长的真菌菌落数。结果计算:以个平皿上生长的菌落平均数计算:真菌数(cfug)=×非致病性杂菌检查称取供试品g加到ml灭菌%氯化钠溶液或其它适宜稀释液中,混匀倍系列稀释取适宜稀释度供试液ml加到已备好的琼脂培养基上以玻璃棒涂匀一式份倒置恒温培养箱中培养小时每天观察结果记录平皿上生长的菌落数。结果计算方法同真菌检查。结果判断供试品检出控制菌或其他致病菌时按一次检出结果为准不再复试。供试品的非致病性杂菌总数、真菌数其中任何一项不符合不再复试。判供试品不符合规定。稀释液除另有规定外微生态制品杂菌检查用稀释液采用无菌氯化钠溶液。稀释液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。pH无菌氯化钠蛋白胨缓冲液照无菌检查法(附录ⅫA)制备。无菌氯化钠溶液配制取氯化钠g加水溶解使成ml过滤分装、灭菌。培养基及其制备方法可以照“无菌检查法”(附录ⅫA)和“微生物限度检查法”(附录ⅫG)制备。也可使用按以上处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。上述附录未收录的培养基按照以下配方配制。氯化钠肉汤培养基蛋白胨g氯化钠g牛肉浸粉g水ml取上述成分混合微温溶解调节pH为弱碱性煮沸滤清调节pH值使灭菌后为±分装灭菌。NAC液体培养基蛋白胨g奈啶酮酸g硫酸镁g磷酸氢二钾g溴化十六烷基三甲铵g水ml除琼脂外取上述成分混合微温溶解调节pH值使灭菌后为±加热溶化后分装灭菌。NAC琼脂培养基蛋白胨g奈啶酮酸g硫酸镁g磷酸氢二钾g琼脂g溴化十六烷基三甲铵g水ml除琼脂外取上述成分混合微温溶解调节pH值使灭菌后为±加入琼脂加热溶化后分装灭菌冷至℃倾注平皿。杂菌限度标准微生态活菌制品的药效成份就是活菌杂菌检查既不同于其它生物制品的无菌检查也不同于化学药品的微生物限度检查。杂菌检查的质控标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及活菌制品的特殊性而制订的。口服微生态活菌制品菌粉大肠埃希菌每g不得检出。金黄色葡萄球菌每g不得检出。铜绿假单胞菌每g不得检出。沙门菌及志贺菌每g不得检出。非致病性杂菌数每g不得过个cfu。真菌数每g不得过个cfu。半成品、成品大肠埃希菌每g不得检出。金黄色葡萄球菌每g不得检出。铜绿假单胞菌每g不得检出。沙门菌及志贺菌每g不得检出。非致病性杂菌数每g不得过个cfu。真菌数每g不得过个cfu。阴道微生态活菌制品菌粉金黄色葡萄球菌每g不得检出铜绿假单胞菌每g不得检出破伤风梭状芽孢杆菌每g不得检出白色念珠菌每g不得检出真菌每g不得检出。非致病性杂菌数每g不得过个cfu。成品和半成品金黄色葡萄球菌每g不得检出铜绿假单胞菌每g不得检出破伤风梭状芽孢杆菌每g不得检出白色念珠菌每g不得检出真菌每g不得检出。非致病性杂菌数每g不得过个cfu。个平皿菌落数之和个平皿菌落数之和

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2010年版《中国药典》三部微生态活菌制品总论征求意见稿

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