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化药(二部品种)苄达赖氨酸.doc

化药(二部品种)苄达赖氨酸

yumeyuki
2018-09-08 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《化药(二部品种)苄达赖氨酸doc》,可适用于医药卫生领域

浙食药检业〔〕号浙江省食品药品检验所关于年版药典品种苄达赖氨酸及其滴眼液质量标准起草结果的报告国家药典委员会:根据贵会国药典化发号“关于发送中国药典年版(二部)生化药品科研项目会议纪要的通知”的任务分工安排及要求我所已完成年版药典品种苄达赖氨酸及其滴眼液药品质量标准的起草修订工作并经上海市食品药品检验所复核我所根据复核单位的复核意见进行了再审现将该品种质量标准及起草说明等上报贵会请审核。附件:、苄达赖氨酸及其滴眼液药品质量标准中英文版、苄达赖氨酸及其滴眼液药品质量标准起草说明、上海市食品药品检验所关于苄达赖氨酸及其滴眼液质量标准复核说明各份(复印件)、电子文档(附件~)二OO九年五月六日抄送:上海市食品药品检验所(无附件)苄达赖氨酸BiandaLai’ansuanBendazacLysine书页号:年版二部-修订【检查】有关物质取本品加水溶解并稀释制成每ml中约含mg的溶液作为供试品溶液精密量取ml置ml量瓶中加水稀释至刻度摇匀作为对照溶液。照高效液相色谱法(附录ⅤD)测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂以乙腈molL醋酸(:)为流动相检测波长为nm。理论板数按苄达赖氨酸峰计算不低于苄达赖氨酸峰与各杂质峰的分离度应符合要求。精密量取对照溶液μl注入液相色谱仪调节检测灵敏度使主成分色谱峰的峰高为满量程的精密量取供试品溶液与对照溶液各μl分别注入液相色谱仪记录色谱图至主成分峰保留时间的倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积()。苄达赖氨酸滴眼液BiandaLai’ansuanDiyanyeBendazacLysineEyeDrops本品为苄达赖氨酸与适量的抑菌剂制成的水溶液。含苄达赖氨酸(CHNO•CHNO)应为标示量的%~%。【性状】本品为无色或几乎无色的澄明液体。【鉴别】()取本品作为供试品溶液另取苄达赖氨酸对照品适量加水制成每ml中含mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VB)试验吸取上述两种溶液各μl分别点于同一硅胶G薄层板上以甲苯冰醋酸(:)为展开剂展开后晾干置紫外光灯(nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的荧光和位置应与对照品溶液的主斑点相同。()取含量测定项下的溶液照紫外可见分光光度法(附录ⅣA)测定在nm的波长处有最大吸收在nm的波长处有最小吸收。【检查】pH值应为~(附录ⅥH)。渗透压比取本品依法检查(附录ⅨG)渗透压比应为~。硫柳汞(以Hg计)对照品溶液的制备将µgml汞标准溶液用%KCrO-%HNO溶液稀释至µgL的标准溶液低温保存。临用时用%HCl溶液配制成系列浓度标准溶液用%NaOH-%NaBH溶液作为还原剂测定荧光强度。以荧光值为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。样品溶液制备精密量取苄达赖氨酸滴眼液~ml加入硝酸~ml消解至溶液澄清消解完全后置电热板上加热赶去硝酸至近干用%HCl溶液清洗合并洗液至ml量瓶中定容至刻度再用%HCl稀释至相应浓度。同时制备样品空白。测定荧光值从标准曲线计算求得浓度即得。含硫柳汞以Hg计不得过ugml。其他应符合眼用制剂项下有关的各项规定(附录IG)。【含量测定】精密量取本品适量用水定量稀释制成每ml中含苄达赖氨酸μg的溶液照紫外可见分光光度法(附录ⅣA)在nm的波长处测定吸光度按CHNO•CHNO的吸收系数(Eeqo(sup(),sdo(cm)))为计算。【类别】同苄达赖氨酸。【规格】()ml:mg()ml:mg【贮藏】遮光密封保存。附件:苄达赖氨酸质量标准起草说明一、概况:本品收载在中国药典年版二部国外药典中均未见收载。原药典标准中有关物质采用薄层色谱法测定现根据实验结果修订为HPLC法。经查本品国内有宁夏康亚药业有限公司、山东鑫齐药业有限公司、武汉武药制药有限公司、河北医科大学制药厂、宁波唯森制药有限公司、安徽省双科药业有限公司、浙江莎普爱思制药有限公司家企业生产。本次起草工作收集到个企业生产的样品共批为浙江莎普爱思制药有限公司生产的三批样品(批号:、、)及宁波唯森制药有限公司生产的两批样品(批号:、)。本标准经上海市食品药品检验所复核并提出复核意见。二、质量标准相关项目修订情况说明:(一)有关物质、中国药典年版二部的苄达赖氨酸质量标准中有关物质检查是以羟基苄基吲哒唑为杂质对照品采用薄层色谱后紫外检视。现采用HPLC法测定该杂质及其他杂质以增加灵敏度及专属性。、有关物质测定方法:取本品加水溶解并稀释制成每ml中约含mg的溶液作为供试品溶液精密量取ml置ml量瓶中加水稀释至刻度摇匀作为对照溶液。照高效液相色谱法(附录ⅤD)测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂以乙腈molL醋酸(:)为流动相检测波长为nm。理论板数按苄达赖氨酸峰计算不低于苄达赖氨酸峰与各杂质峰的分离度应符合要求。精密量取对照溶液μl注入液相色谱仪调节检测灵敏度使主成分色谱峰的峰高为满量程的精密量取供试品溶液与对照溶液各μl分别注入液相色谱仪记录色谱图至主成分峰保留时间的倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积()。仪器:Agilent高效液相色谱仪Waters高效液相色谱仪UV检测器(nm)色谱柱:KromasilC柱(×mmμm)DimonsilC柱(×mmμm)AlltimaC柱(×mmμm)流动相:乙腈molL醋酸(:)色谱柱的选择:分别选用根不同型号、规格的色谱柱用有关物质测定项下的方法试验苄达赖氨酸及杂质A(羟基苄基吲哒唑)的保留时间见表色谱图见图~。结果杂质A与苄达赖氨酸峰之间的分离度符合规定。还考察了℃、℃、℃不同柱温条件下分离度均符合规定。表各成分的HPLC保留时间色谱柱苄达赖氨酸羟基苄基吲哒唑KromasilC柱DimonsilC柱AlltimaC柱图苄达赖氨酸HPLC定位图图羟基苄基吲哒唑HPLC定位图检测波长的选择:分别以水、molml醋酸溶液及流动相溶解苄达赖氨酸对照品和杂质A(羟基苄基吲哒唑)对照品用紫外分光光度计扫描结果苄达赖氨酸在~nm处有最大吸收羟基苄基吲哒唑在nm波长处有最大吸收原中国药典年版二部苄达赖氨酸质量标准中苄达赖氨酸的紫外鉴别项下其最大吸收波长nm故本试验采用nm作为测定波长。紫外扫描图谱见图~:图羟基苄基吲哒唑紫外扫描图谱(水溶解)图羟基苄基吲哒唑紫外扫描图谱(流动相溶解)图苄达赖氨酸紫外扫描图谱(水溶解)图苄达赖氨酸紫外扫描图谱(流动相溶解)破坏试验:取本品(批号为样品)约mg置ml量瓶中作以下试验:①加过氧化氢溶液ml振摇小时候后加水稀释至刻度摇匀滤过取滤液作为氧化破坏供试品溶液②℃烘箱加热小时放冷加水稀释至刻度滤过取滤液作为热破坏供试品溶液③置Lx下放置小时加水稀释至刻度滤过取滤液作为光破坏供试品溶液④加molL盐酸溶液ml放置小时用molL氢氧化钠溶液中和加水稀释至刻度摇匀滤过取滤液作为酸破坏供试品溶液⑤加molL氢氧化钠溶液ml放置小时用molL盐酸溶液中和加水稀释至刻度摇匀滤过取滤液作为碱破坏供试品溶液。取上述供试品溶液进样结果见图~。图光破坏HPLC图图热破坏HPLC图图酸破坏HPLC图图碱破坏HPLC图图氧化破坏HPLC图实验结果表明苄达赖氨酸在高温强光下较稳定在酸、碱、氧化环境下有不同程度的分解降解产物与主峰能明显分离。()最低检出量(LOD)测定:在nm波长处苄达赖氨酸和杂质A(羟基苄基吲哒唑)的最低检出量为ng和ng。见图~。图苄达赖氨酸最低检出量HPLC图图杂质A最低检出量HPLC图()外标法与自身对照结果比较:见表。表外标法与自身对照结果比较批号杂质A(外标法)杂质A(自身对照法)总杂质未检出未检出未检出未检出未检出未检出两种方法计算杂质A的含量差别不大且在五批样品中杂质A的含量很低或未检出。故在起草的质量标准中直接以自身对照法测定而舍弃杂质A对照品的使用。()样品测定结果见表图~。表苄达赖氨酸有关物质测定结果批号有关物质()未检出未检出图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图根据以上五批样品的测定数据同时考虑到HPLC比TLC灵敏度高故采用自身对照法控制总杂质将限度订为%便能达到既控制特定杂质羟基苄基吲哒唑的量又能省去该特定杂质对照品的使用目的。三、复核单位意见上述修订项目经上海市食品药品检验所复核根据复核结果在保留时间分钟前后检出了几个杂质峰故建议将色谱图记录时间由主成分峰保留时间的倍延长至倍再根据我所的扫描图谱显示苄达赖氨酸的最大吸收波长在~nm杂质羟基苄基吲哒唑的最大吸收波长在nm因此在测定波长选择上建议是否应选择nm以更好地控制有关物质。我所对五批样品又重新进行了复核检验以nm和nm为检测波长记录色谱图至主成分峰保留时间的倍色谱图及测定结果如下:图样品(批号)有关物质HPLC图(上为nm下为nm)表苄达赖氨酸有关物质测定结果()批号检测波长nmnm上海所结果(nm)检测结果表明在nm和nm波长下记录的图谱中峰面积结果相近有关物质测定结果也相近由于苄达赖氨酸的紫外鉴别项下其最大吸收波长nm故本标准中还是将测定波长订为nm在约主峰三倍保留时间处有杂质峰而在上海所的复核的图谱中此杂质峰出现在约主峰四倍保留时间处说明在不同的色谱系统中保留时间会有一定差异为了获得准确的数据在拟定的质量标准中暂将图谱记录时间设为主峰的五倍。根据以上五批样品的测定结果同时考虑到HPLC比TLC灵敏度高故采用自身对照法控制总杂质将限度订为%既控制特定杂质羟基苄基吲哒唑的量也省去了该特定杂质对照品的使用。其他项目未作修订。苄达赖氨酸滴眼液质量标准起草说明一、概况本品收载在中国药典年版二部国外药典中均未见收载。我所除了对国家药典会建议增订抑菌剂硫柳汞的检查方法进行研究外对本品的有关物质也进行了考察。经查本品国内有宁夏康亚药业有限公司、武汉远大制药集团股份有限公司、河北医科大学制药厂、宁波唯森制药有限公司、安徽省双科药业有限公司、浙江莎普爱思制药有限公司。本次起草工作收集到个企业生产的样品共批为浙江莎普爱思制药有限公司生产的四批样品(批号:)及宁波唯森制药有限公司生产的两批样品(批号)。本标准经上海市食品药品检验所复核并提出复核意见。二、质量标准相关项目修订情况说明(一)硫柳汞:在苄达赖氨酸滴眼液中常用的抑菌剂为硫柳汞钠。目前测定硫柳汞含量的方法很多有双硫腙滴定法、分光光度法、高效液相色谱法、冷原子吸收法。原子荧光光谱法与上述方法相比具有灵敏度高、干扰少、线性范围宽等优点。仪器与试剂双道原子荧光分光光度计:AFS型断续流动氢化物发生系统北京科创海光仪器有限公司微波消解样品制备系统:Multiwave型配孔高温聚四氟乙烯消解罐奥地利Antonpaar公司超纯水仪:NANOpureDlamondTM型美国Barnstead公司控温电热板:EHB型美国LabTech公司空心阴极灯:汞北京有色金属研究总院标准物质:汞标准液【GBW(E)】国家标准物质研究中心试剂:硝酸、盐酸(BVⅢ级北京化学试剂研究所)氢氧化钠、硼氢化钠、重铬酸钾(分析纯国药集团化学试剂有限公司)实验用水为去离子水(电阻率为MΩ·CM)。方法和结果样品制备方法精密量取苄达赖氨酸滴眼液ml置于聚四氟乙烯消解罐中加入硝酸ml放入微波消解仪中消解至溶液澄清消解完全后置电热板上加热赶去硝酸至近干用%HCl溶液清洗合并洗液至ml容量瓶中定容至刻度。再吸取ml上述溶液至ml容量瓶用%HCl溶液定容至刻度即得。同时制备样品空白。仪器条件表测定汞的工作参数参数指标参数指标负高压PMTV加热温度℃灯电流mA氩气压力MPa测定高度mm测定方式标准曲线法载气流量mlmin积分方式峰面积屏蔽气流量mlmin进样体积ml读数时间S读数延迟时间S工作曲线的绘制将µg·ml-汞标准液用%KCrO-%HNO溶液稀释至µg·L-的标准溶液再用%HCl溶液配制成、、、、、µg·L-的系列浓度标准溶液用%NaOH-%NaBH溶液作为还原剂测定荧光强度。以荧光值(If)为纵坐标、浓度(C)为横坐标绘制工作曲线。一次回归方程If=a*Cba=b=相关系数R为检出限为μg·L-定量限以倍检出限计为μg·L-浓度与荧光值见下表:表汞标准溶液浓度与荧光值浓度(C)荧光值(If)µgLµgLµgLµgLµgL仪器精密度试验测定汞标准溶液(µg·L-)的荧光值重复进样次RSD为%。重复性试验取浙江莎普爱思制药有限公司生产批号为的苄达赖氨酸滴眼液做重复性试验。精密量取ml份加样品分析共份按前述供试品溶液制备方法及荧光测定条件进行测定RSD为%。结果见表表重复性试验结果(n=)编号荧光强度浓度(µgL)稀释体积(ml)平均浓度(µgml)RSD()回收率试验取浙江莎普爱思制药有限公司生产批号为的苄达赖氨酸滴眼液做回收率试验。精密吸取本品ml共份分成组置聚四氟乙烯消解罐中每组分别精密加入浓度为µg·ml-的汞标准溶液ml、ml、ml加入硝酸ml放入微波消解仪中进行消解至溶液澄清消解完全后置电热板上加热赶去硝酸至近干用%HCl溶液清洗并过滤合并滤液至ml容量瓶中定容至刻度。再吸取ml上述溶液至ml容量瓶用%HCl溶液定容至刻度即得。同时制备样品空白。按前述方法进行测定测得平均回收率结果见表。表回收率试验结果(n=)测定浓度(concentration)µgL加入量(added)µg回收率(recovery)平均回收率(meanrecovery)RSD样品分析用本法对浙江莎普爱思制药有限公司生产的批苄达赖氨酸滴眼液和宁波唯森制药有限公司的批苄达赖氨酸滴眼液进行了测定每批测定份测定结果见下表。硫柳汞分子量为其中Hg分子量质量比为%。表样品分析结果莎普爱思批号测得值(µgL)稀释体积(ml)含量(µgml)平均含量(µgml)硫柳汞含量(µgml)唯森批号测得值(µgL)稀释体积(ml)含量(µgml)平均含量(µgml)硫柳汞含量(µgml)根据企业提供的处方投料量浙江莎普爱思制药有限公司样品中硫柳汞钠的投料浓度为ugml宁波唯森制药有限公司现提供样品中硫柳汞钠的投料浓度为ugml但该公司已提出对苄达赖氨酸滴眼液的补充申请将硫柳汞钠的投料浓度调整为ugml。故参考药剂学等文献一般硫柳汞的常用浓度为结合企业投料情况现将硫柳汞钠的限度定为以Hg计不得过ugml。(二)有关物质参照苄达赖氨酸修订的质量标准中的方法测定苄达赖氨酸滴眼液中的有关物质结果除了与辅料相应位置有出峰外未见明显杂质峰。考虑到本品原料中已对有关物质进行了控制且比较稳定故该项目不列入质量标准中色谱图见图~:图辅料(莎普爱思)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图辅料(宁波唯森)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图根据以上测定数据所起草的年版二部该品种的质量标准中增订硫柳汞检查项目。其他项目未作修订。三、复核单位意见上述修订项目经上海市食品药品检验所的复核根据硫柳汞的复核结果上海所建议对苄达赖氨酸滴眼液中硫柳汞的量制定一个合理的控制范围而不是仅限定上限建议将苄达赖氨酸滴眼液中硫柳汞的量控制在“~μgml”。我所认为硫柳汞作为一种抑菌剂不应该制定下限其最低量可以由微生物限度项目控制即必须达到足够的抑菌效果。而现在生产厂家的处方中硫柳汞的量还没有完全统一无法根据我们现在的几批样品测定结果制定下限故现还是参考药剂学等文献将硫柳汞钠的限度定为以Hg计不得过μgml。其他同意我所拟定的标准内容。苄达赖氨酸复核说明根据国家药典委员会国药典化发号文中国药典年版(二部)生化药品标准科研项目会议纪要的要求我所对贵所拟定的苄达赖氨酸质量标准中有关物质进行了复核检验我所共收到两家企业五批样品现将复核检验结果及意见汇总如下。我所采用的复核条件为:采用Agilent高效液相色谱仪色谱柱为SynergiuHydroRPA(×mmμm)流动相为乙腈molL醋酸溶液(:)流速mlmin供试品配制溶液为流动相。结果为理论板数按苄达赖氨酸计为苄达赖氨酸与最近相邻杂质峰的分离度为。批样品供试品溶液的色谱图见图~。批样品的检验结果见表。按贵所拟订的限度样品不符合规定。由实验结果可知贵所拟定的液相色谱条件合理能有效分离主峰与杂质峰。我所采用上述色谱条件在保留时间分钟前后检出了几个杂质峰故建议将色谱图记录时间由主成分峰保留时间的倍延长至倍(表的数据是按倍的保留时间计)。贵所的扫描图谱显示苄达赖氨酸的最大吸收波长在~nm杂质羟基苄基吲哒唑的最大吸收波长在nm因此在测定波长选择上是否应选择nm以更好地控制有关物质是否可行请贵所考虑。表样品检验结果样品生产单位批号我所检验结果贵所检验结果()杂质峰面积和自身对照峰面积()有关物质宁波唯森制药有限公司未检出未检出浙江莎普爱思制药有限公司苄达赖氨酸图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图苄达赖氨酸滴眼液质量标准复核说明根据国家药典委员会国药典化发号文中国药典年版(二部)生化药品标准科研项目会议纪要的要求我所对贵所拟定的苄达赖氨酸滴眼液质量标准中有关物质、硫柳汞检查项进行了复核检验我所共收到两家企业六批样品现将复核意见说明如下。、有关物质参照苄达赖氨酸原料修订的质量标准中有关物质的方法对批样品进行了测定色谱条件见原料项下色谱图见图~。按产品说明书两家企业添加的辅料种类均相同由贵所提供的辅料色图谱我所推测宁波唯森制药有限公司的硫柳汞的添加量多为μgml故在min、min与min有三个较大的吸收峰。依据贵所提供的色谱图我所对批样品进行了扣辅料色谱峰处理除批号为的样品比的限度略高外其余均符合的限度。考虑到本品原料已对有关物质进行了控制故同意贵所的意见该项不列入滴眼液质量标准中。苄达赖氨酸图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图图样品(批号)有关物质HPLC图、硫柳汞苄达赖氨酸滴眼液为多剂量剂型硫柳汞为常用抑菌剂。为更有效控制产品质量应对苄达赖氨酸滴眼液中硫柳汞的量制定一个合理的控制范围而不是仅限定上限。我所建议将苄达赖氨酸滴眼液中硫柳汞的量控制在“~μgml”。我所复核条件为:仪器采用AFS双道原子荧光光度计微波消解仪采用MARSCEM公司标准物质为国家标准样品GSBG北京应天意标准样品公司提供(mgL)。考虑到除酸时间过长我所也考察了除酸与不除酸两种方法对测定结果的影响不除酸方法中应将还原剂浓度调整为NaOHNaBH测定结果见表。从表中的数据显示在低浓度的情况下两者还是比较接近的而在高浓度时两种方法的结果存在一定的差异故还是选用了除酸的方法。但是在复核检验过程中我所发现若硝酸除得过干会使结果偏低。因此需在质量标准中明确“除酸的温度设置为不超过℃并且除酸后还应剩有少量溶液”。批样品的检验结果见表。表样品检验结果样品生产单位批号我所检验结果Hg浓度(μgml)贵所检验结果Hg浓度(μgml)浙江莎普爱思制药有限公司宁波唯森制药有限公司表除酸与不除酸两种方法测定结果样品批号除酸方法检验结果Hg浓度(μgml)不除酸方法检验结果Hg浓度(μgml)插入原料项下RelatedsubstancesCarryoutthemethodforhighperformanceliquidchromatography(AppendixVD)usingacolumnpackedwithoctadecylsilanebondedsilicagelandamixtureofacetonitrilemolLaceticacid(:)asthemobilephaseDetectionwavelengthisnmandthenumberoftheoreticalplatesofthecolumnisnotlessthan,calculatedwithreferencetothepeakofbendazaclysineDissolveaquantityofthesubstancebeingexaminedwiththewatertoproduceasolutionofaboutmgpermlasthetestsolution()Measureaccuratelymlofsolution()intoamlvolumetricflask,dilutebywatertothevolumn,mixwellasthereferencesolution()Injectμlofsolution()intothecolumn,adjusttheattenuationsothatthepincipalpeakheightinthechromatogramisaboutoffullscaleofthechartInjectseparatelyaccuratelyμleachofthesolution()and()intothecolumnandrecordthechromatogramforfivetimestheretentiontimeoftheprincipalpeakThesumoftheareasofallpeaksotherthantheprincipalpeakinthechromatogramofsulution()isnotgreaterthantheareaoftheprincipalpeakofsolution()插入到制剂项下ThiomersalCarryoutthemethodforatomicfluorescencespectrometricmethodReferencesolutionDilutethestandardsolutionofHgwithsolutionofKCrOHNOtotheconcentrationofμgpermlUsethissolutionasstandardsolutionStoragedtightlyclosedat℃~℃TestsolutionMeasureaccuratelyml~mloftheeyedropstodigestionvesselAddnitricacidml~mltodigestthesolutioncompletelyHeatthevesselwithaheatingplatetoallmostdryTransfertheresiduewithHCltoamlvolumetricflask,dilutetovolumewithHClThendilutetotheconcentrationtocorrespondtostandardworkingcurveProcedureMeasureaccurratelyml、ml、ml、ml、ml、mlofstoragedstandardsolutiontodifferentvolumericflasksDilutetovolumewithHCl,mixwell,toprepareaseriesstandardladdersolutionbeforedeterminationCarryoutthemethodforatomicfluorescencespectrometricmethodUseNaOHNaBHsolutionasreductantMeasurethefluoresenceoftheresultingsolutionsandthetestsolutionwithHglampCalculatethecontentofHgNotmorethanμgperml(calculatedontheweightofHg)插入到制剂鉴别项下Carryoutthemethodforthinlayerchromatography(AppendixVB),usingsilicagelGasthecoatingsubstanceandamixtureoftoluenceglacialaceticacid(:)asthemobilephaseApplyseparatelytotheplateμleachoftwosolutionsAfterdevelopingandremowaloftheplate,dryitinairandexamineunderultravioletlight(nm)PAGE

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