抗 A 、抗 B 血型定型试剂(单克隆抗体)
Kang A、Kang B Xuexing Dingxing Shiji (Dankelongkangti)
Anti- A and Anti- B Blood Grouping Reagents (Monoclonal Antibody )
本品系用A血型单克隆抗体或 B 血型单克隆抗体配制而成,用于鉴定人ABO 血型。
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的要求。
2制造
2.1 专用原材料
2.1.1杂交瘤细胞
杂交瘤细胞建株,需经几次克隆筛选,以 100 %克隆孔上清相应抗体阳性的作为原始细胞株。原始细胞株经传代,稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株为主细胞。
杂交瘤细胞库的建立及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。工作细胞库经血凝效价测定合格后方能用于生产。
2.1.2染色剂
抗A可选用次甲基兰等蓝色染料、抗B可选用吖啶黄等黄色染料配制至适宜浓度。
2.1.3防腐剂
可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等,配制至适宜浓度。
2.1.4稳定剂
可选用蛋白质、葡萄糖、盐类等配制至适宜浓度,不得使用凝聚胺、聚乙二醇等促凝剂用于配制稳定剂。
2.2 制备程序
2.2.1杂交瘤细胞培养物上清液的制备
抗A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞经培养传代,待杂交瘤细胞过度生长后收取培养液上清.检测血凝效价合格后扩大培养即得。
2.2.2小鼠杂交瘤腹水的制备
2.2.2.1小鼠腹腔预处理
健康 BALB / c 小鼠腹腔用石蜡油预处理。
2.2.2.2接种
检测抗 A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞培养物上清液抗体血凝效价合格后,用生理氯化钠溶液或不完全培养液重新悬浮细胞,接种于数天前用石蜡油处理过的小鼠腹腔内。
2.2.2.3腹水的收集
接种后数周,处死小鼠收集腹水,离心去沉淀,以适当方法除纤维蛋白原,加入适宜的防腐剂,-30℃及以下保存。
2.3 半成品
2.3.1 半成品配制
合并杂交瘤细胞培养物上清,可加入少量腹水混合,加入染色剂,使抗 A 血型定型试剂呈蓝色,抗B血型定型试剂呈黄色,除菌过滤。
2.3.2 半成品检定
按3.1项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装与冻干
应符合“生物制品分装与冻干规程”规定。
2.4.3 规格
应为经批准的规格。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1半成品检定
3.1.1效价测定
取抗A血型试剂、抗B血型试剂及国家参考品,2倍系列稀释至适宜稀释度,分别加入相应的2%A1、A2、A2B、B血型红细胞悬液,同时设红细胞悬液对照,置18~ 25℃反应15分钟,以1000转/分钟离心1分钟后观察结果。抗A血型试剂对A1、A2、A2B血型红细胞的凝集效价应分别不小于1:128、1:32、1:16,抗B血型试剂对B血型红细胞的凝集效价应不小于1:128,且不得低于国家参考品同步测定结果。
3.1.2特异性
于抗A血型试剂、抗B血型试剂中分别加入2%A1、A2B、B、O血型红细胞悬液,同时设红细胞悬液对照,置18~ 25℃反应15分钟,以1000转/分钟离心1分钟后观察结果,抗A血型试剂应与A1 、A2B血型红细胞产生凝集,与 B、O血型红细胞不产生凝集;抗B血型试剂应与B血型红细胞产生凝集, 与A1、O血型红细胞不产生凝集;且均不应出现溶血和其他不易分辨的现象。
3.1.3冷凝集素和不规则抗体测定
单人份3例A型、3例B型、10例O型红细胞,分别用生理氯化钠溶液、20%牛血红蛋白生理氯化钠溶液配制2%及5%浓度,2%红细胞悬液在4℃、18-22℃、37℃进行测试;5%红细胞悬液在18-22℃、37℃进行测试。
所有测试结果均不产生凝集反应或溶血现象。
3.1.4无菌检查
依法检查(附录 XII A)含有蛋白成分的液体组分,半成品分装后留样做无菌检查,采用直接接种法,应符合规定。
3.1.5稳定性试验
37℃至少放置7天(有效期为一年)或14天(有效期为两年),检定结果应符合3.1.1~3.1.4项要求。
3.2成品检定
3.2.1 外观
抗 A 为透明或微带乳光的蓝色液体,抗 B 为透明或微带乳光的黄色液体,不应有摇不散的沉淀或异物。
3.2.2 效价侧定
按3.1.1 项进行。
3.2.3 特异性
按3.1.2项进行
3.2.4 冷凝集素和不规则抗体测定
按3.1.3项进行。
3.2.5 亲和力
将抗A、抗B血型试剂分别与10%红细胞悬液于瓷板或玻片上混匀,抗A血型试剂与A1、A2、A2B血型红细胞出现凝集的时间应分别不长于15、30、45秒;抗B血型试剂与B血型红细胞出现凝集的时间应不长于15秒,且在 3 分钟内凝集块必须达到1mm2以上。
3.2.6稳定性试验
37℃至少放置7天(有效期为1年)或14天(有效期为2年), 检定结果应符合3.2.1~3.2.5项要求
4 保存及有效期
于 2~8 ℃ 避光保存,自组装之日起,按批准的有效期执行。
5 使用说明
应符合“生物制品包装规程”的规定及批准的内容。
抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)使用说明
【 制品名称 】 通用名称:抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)
汉语拼音:Kang A、Kang B、Xuexing Dingxing Shiji (Dankelong Kangti)
英文名称:Anti-A and Anti-B Blood Grouping Reagents (Monoclonal Antibody)
【 定义 】 抗A、抗B血型定型试剂是分别针对红细胞膜A抗原和B抗原的特异性抗体,可与携带相应抗原的红细胞发生凝集反应。用于ABO血型的常规检测。
【 试剂盒组成 】 抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂各1瓶。规格为10ml/瓶。抗A试剂为透明或微带乳光的蓝色液体,抗B试剂为透明或微带乳光的黄色液体。
【 使用方法 】
1.平板法(玻片法)
(1)取白瓷盘一块,用肥皂水刷洗后晾干,用蜡笔划出小格,并注明A、B字样。
(2)将抗A定型试剂、抗B定型试剂各1滴分别滴于瓷盘上A、B处,分别取等体积待检血样(5-10%红细胞悬液或全血)于抗A定型试剂和抗B定型试剂处,用不同的竹签将定型试剂与待检血样调匀,同时不停地摇动瓷盘,按照有无凝集判定结果。
2.试管法:取试管2支,分别标上A、B字样,向A管滴加抗A定型试剂1滴。向B管滴加抗B定型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的2%红细胞悬液各1滴,摇匀1000r/min离心1分钟或室温静置1小时,按照有无凝集判定结果。
【 结果判定 】
血型
血型定型试剂
抗A 抗B
A
+
-
B
-
+
O
-
-
AB
+
+
【 注意事项 】
(1)为了便于鉴别,抗 A 血型定型试剂呈蓝色,抗 B 血型定型试剂呈黄色。
(2)对含有自身冷凝集素的受检者,在鉴定血型时,往往被误定为 AB 型,遇到此种情况需用 37 ℃ 生理氯化钠溶液洗涤受检者红细胞 2 ~3 次,以去除吸附在红细胞上的冷凝集素,然后再鉴定血型。
(3)在做配型试验时,应按规定取受检者血清用已知 A 血型或 B 血型红细胞进行反定型试验。
(4)凡抗人球蛋白试验( Coombs Test )阳性、新生儿溶血病或获得性溶血性贫血患者红细胞,因其红细胞
表
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面吸附有抗体球蛋白,故干扰血型的鉴定,遇到此种情况需进行吸收释放试验。
(5)制品混浊或有沉淀不得使用。
保存
于2~ 8 ℃ 避光保存,在有效期内使用。
【 保存及有效期 】 于2-8℃避光保存,在有效期内使用。
【 执行
标准
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】
【 批准文号 】
【 生产企业 】
企业名称
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