乙肝核心抗体HBcAb(雅培)改 SOP

K 广州金域医学检验中心 KM-SOP-0300•345 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 文件名称:乙肝核心抗体检测作业指导书 表号: KM-MP03•02•02 已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 ,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 （I have understood the relevant content of the document.I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure） 阅读人签名表 姓名（NAME） 职务（POSITION） 签名（SIGNATURE） 签名日期（DATE） 文件修改记录页 （Procedure amendment form） 表号: KM-MP03•02•03 序号 NO. 页码(Page) 内容更改说明（Description of Modified contents） 审批人 （Approved by ） 批准生效日期 （Approved date） 1 换版 文件信息表 (Procedure information form) 表号: KM-MP03•02•04 文件名称 Title of DOC.(Doc. Code) 乙肝核心抗体检测作业指导书（KM-SOP0300•345） 版本号 (Edition No.) Edition 3.0 生效日期(Operative date) 2008-03-13 文控部门 (Doc. Control Dept.) 实验室文控室 回顾日期/签名 (Review date /signature ) 回顾日期(Review date) 回顾人员签名( Signature ) 替代文件(Replaces) 乙肝核心抗体检测作业指导书(Edition 2.0) 存放地点(Location)/持有人（Holder） No. Location（Holder） No. Location （Holder） 1 实验室文控室（陈彬） 2 化学发光室（段学成） 作者签名/日期(Author signature/date) 廖巍俊 审批人签名/日期(Authorized by : Signature/Date) 陈建波 接收人签名/日期 （Receiptor/Date） 副本数(copy No.) 乙肝核心抗体检测作业指导书（雅培） （Standard operation procedure for analysis of HBcAb） 1. 原理（Test principle）: 微粒子酶免分析法（MEIA）：标本与微粒子于一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，反应液的一部分被移到玻璃纤上，洗去未反应的被检物质与其他不要成分，反应的第二阶段终了后，再次冲洗，将未反应的第二抗体除去，加入基质液，基质液被碱性磷酸酶分解成MU，当该生成物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的变化率，从而决定被测物质的浓度。 2. 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）: 标本收集（Specimen collection）:类型（Type）: 血清、血浆（柠檬酸钠、肝素钠、ACD、CPDA-1、EDTA抗凝）。;用量(Volume)0.6mL，仪器加样量(Sampling volume)236μL 拒收标本（Specimen rejection）：其它抗凝标本、其它体液标本拒收；加热灭活标本拒收。 标本储存条件(Specimen storage conditions)： 2-8℃14天；冷冻保存更久，十天后处理标本 其他(Others)：为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确定离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。 3、试剂(Reagent)： 3.1美国AXSYM 原装试剂。 试剂盒组分(Components)： 试剂盒（Reagent pack） 100人份，2-8℃保存，使用累计时间不可超过112小时。 试剂2：4.8mL大肠杆菌重组乙肝核心抗原包被的微粒子TRIS溶液，添加有蛋白稳定剂，其最小浓度为0.02%，防腐剂为叠氮钠。 试剂3：12.8mL乙肝核心抗体碱性磷酸酶TRIS缓冲液结合物，添加有蛋白稳定剂，其最小浓度为0.05ug/mL，防腐剂为叠氮钠。 试剂1：4.3mL标本稀释液，其最小浓度为70mM。 校准物：1瓶8mL雅培HBcAb校准液，源自人血浆的原材料全部经过检验，与HIV-1抗原、乙肝表面抗体、HIV 1&2抗体、HCV抗体没有反应。 未随试剂盒提供的组分： HBcAb质控物：两瓶9mL的雅培HBsAg质控。 阴性质控（Control -）：HBcAb阴性质控，源自人血浆的原材料全部经过检验，与HIV-1抗原、乙肝表面抗体、HIV 1&2抗体、HCV抗体没有反应。防腐剂为叠氮钠。 阳性质控（Control +）：HBcAb阳性质控，源自人血浆的原材料全部经过检验，与HIV-1抗原、乙肝表面抗体、HIV 1&2抗体、HCV抗体没有反应。防腐剂为叠氮钠。 质控 颜色 质控范围（S/CO） 阴性质控 无色 1.700-2.500 阳性质控 蓝色 0.050-0.800 其它试剂： 探针清洗液：TEAH：氢氧化四(羟乙基) 铵，四瓶装（110mL每瓶）或两瓶装（220mL每瓶），含2%氢氧化四(羟乙基) 铵。15-30℃保存。 1号液：MUP：四甲基磷酸伞型酮，四瓶装（220mL每瓶），含1.2mM四甲基磷酸伞型酮。防腐剂为叠氮钠。2-8℃保存，在雅培仪器上使用累计时间不可超过14天。 3号液：Matrix cell wash：纤维杯洗液，四瓶装（1000mL每瓶），为含0.3M NaCL的TRIS缓冲液。防腐剂为叠氮钠和抗生素。15-30℃保存。 4号液：Diluent：稀释液，1瓶（10L）稀释液含0.1M磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗生素。15-30℃保存。 其它必需： Matrix cells：纤维杯 Reaction Vessels：RV杯（反应杯） 试剂准备(reagent preparation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time; New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Recod the results. 4 仪器（Instrument）：美国AXSYM ABBOTT。 4.1 仪器准备（Prepare apparatus）：使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的1号液、3号液、4号液、纤维杯、RV杯。然后运行仪器操作软件。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。 5.安全防范（Safety Precautions） A． 日常的安全防范 所有实验室的工作人员必须穿戴手套和工作服;当离开实验室和进入办公室前必须脱掉手套；所有接触过样品的手套，枪头和其它物件须丢弃在标有生物危害的垃圾箱中；生物危害的垃圾须每天适时的处理以保持清洁；尽量避免使用尖锐的物品和器具；宜用不易破裂的材料制品；工作台在每天工作结束后用次氯酸钠溶液清洗。工作完毕，应脱去手套后洗手，再脱去工作服，然后用消毒液洗手。 B． 血样的处理 来自病人可能带有肝炎，HIV病毒的血样如果不正确的处理在吸取，处理，分析和存储标本时会传染到工作人员。在处理血样时工作人员须熟练学会防护，戴不易渗透的手套，禁止用嘴吸取样品；避免接触血清；不要用戴手套的手触摸暴露的皮肤，口，眼。使用过的枪头必须先丢弃在有消毒液的容器中；所有的血样须存在密封的容器中；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间。 C．溢出处理 被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，先在污染区外周围倒入消毒液，再向中心消毒处；擦试用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中 6校准（Calibration if Applicable）： 6.1校准品储存和使用(Calibration material storage and usage)：当使用新批号试剂之前，都需要对试剂盒进行校准。将试剂盒放入试剂转盘后，在ORDER LIST内申请校准，采用专用条码样本杯座，将校标液(每杯15滴)按指定位依次放入样本架，开始校准。（非新试剂盒不做此步）。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material.use it within expiration date,storage in 2-8℃ 校准品成分的稳定性：保存于15~25℃，可稳定8小时 保存于2~8℃，可稳定2天 保存于（-15）~（-25）℃，可稳定1个月（不可反复冻融）。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准：(If one of the two happens, recalibration ) （1）试剂批号改变 (Reagent lot changes) （2）根据质控需要进行校准(Recalibration based on quality control problem) （3）校准周期（Frequency of calibration）：两周(Two weeks)。 6.3步骤： 每个样品杯至少加入样品236ul。将样本杯按仪器指定位置放好后，按“RUN”键开始。仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做所有浓度的质控，如质控在控则校准通过。 7操作过程：(Procedural Steps) 7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的已经按实验号编好号样本管，本项目编号为3xxx（一个x代表一个阿拉伯数字）。 7.2将300ul去离子水与10ul血清标本充分混匀，取出空样本架，将含有30：1稀释的血清样本管加入样品架中，在ORDERLIST中的PATIENT中申请实验项目或质控项目，然后点F1进入确认菜单，确认申请无误后，按RUN键运行。 7.3结果出来后，在RESULTS中查询。选定结果后，按PRINT键打印，再按F3键把结果传入系统。( Send data to LIS ) 7.4数据审核(Data checkup)：联机是否正确？对照申请表格与仪器LIST中的实验号和加样杯号是否一一正确对应，原始导出结果与系统结果是否对应。 8质量控制(Quality control)： 使用雅培HBcAb质控物做室内质控。每工作日至少做两个浓度的值。 质控结果判断、拒绝 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 与处理参照HBcAb质控物说明书。 9计算(Calculations if Applicable)：无 无需人工计算。 10 参考范围：(Reference interval) 阴性：S/CO>1.00 阳性：S/CO<1.00 S/CO：样本检测值与临界值的比值 11 结果解释：（Interpretation of Results） HBcAb并不能检测出所有HBV隐性感染的个体。 若需区分急性和慢性乙肝，需结合病人症状及其它血清学标志物。 本参考值不适用于尸体样本和其它体液（如尿、唾液、精液、羊水）。 不可使用加热灭活样本。 冰冻标本检测前需离心。 12方法的局限性（Method Limitations）： HBcAb并不能检测出所有HBV隐性感染的个体。 若需区分急性和慢性乙肝，需结合病人症状及其它血清学标志物。 本参考值不适用于尸体样本和其它体液（如尿、唾液、精液、羊水）。 不可使用加热灭活样本。 冰冻标本检测前需离心。 12.1干扰物质（Interfering Substances）： 胆红素影响（Bilirubin）：样本中胆红素的浓度直至20mg/dl，对检测结果无影响。 溶血影响（Hemolysis）：样本中血红蛋白的浓度直至 500mg/dL，对检测结果无影响。 脂血影响（Lipoprotein）：样本中甘油三酯的浓度直至2000 mg/dL，对检测结果无影响。 12.2注意事项（Notices）仅供体外诊断使用。(Use only for invitro diagnosis) 12.3其他（Others）：方法学比较或项目的特殊要求等。 13 临床意义：（Clinical Significance） HBcAb是反映HBV感染流行水平的指标，是乙肝病毒核心抗原的总抗体。其意义：(1)急性乙肝在HBsAg出现后，在谷丙转氨酶(ALT)高峰时，可在血清中测出HBcAb；(2)各种类型的慢性HBsAg携带者，在血清中可检出高滴度的HBcAb；(3)输用HBcAb阳性的血液制品，注射由HBV感染后出现免疫反应者的血液制备的乙肝免疫球蛋白，均可呈现单项HBcAb阳性。若HBcAb阳性，血液可能仍有传染性。 14参考文献：（References） 1 临床生物化学和生物化学检验. 2 美国AXSYM 乙肝核心抗体试剂说明书 3 中华医学检验全书 4 美国AXSYM操作说明书 STANDARD OPERATION PROCEDURE page 7/9乙肝核心抗体检测作业指导书（2008-03-13）