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首页 2010版中国药典2010年版药典(一部)部分增修订及新增品种乌梢蛇

2010版中国药典2010年版药典(一部)部分增修订及新增品种乌梢蛇.doc

2010版中国药典2010年版药典(一部)部分增修订及新增品种…

长江黄河
2018-09-06 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《2010版中国药典2010年版药典(一部)部分增修订及新增品种乌梢蛇doc》,可适用于医药卫生领域

乌梢蛇【炮制】乌梢蛇去头及鳞片切寸段。乌梢蛇肉去头及鳞片后用黄酒闷透除去皮骨干燥。酒乌梢蛇取净乌梢蛇段照酒炙法(附录ⅡD)炒干。每kg乌梢蛇用黄酒kg。本品为段状。棕褐色或黑色略有酒气。【PCR鉴别】照聚合酶链式反应法鉴别。模板DNA提取取本品粉末约g液氮中充分研磨使成粉末取适量(约g)至mL离心管中加入μl消化液(细胞核裂解液μlMEDTAμl蛋白酶K(mgml)μlRNA酶溶液μl)℃温育小时入μlWizardSVLysisBuffer混匀加到柱中rmin离心分钟弃掉过滤液加入μl洗脱液(醋酸钾mMTrisHClmM(pH)EDTAmM(pH)乙醇)rmin离心分钟弃掉过滤液用洗脱液反复洗脱次每次rmin离心分钟弃掉最后一次过滤液后再离心分钟将过滤柱转移入新的离心管中加入μl无菌双蒸水室温放置分钟后rmin离心分钟滤液℃保存备用。取对照药材粉末约g同法制成对照药材模板DNA溶液。PCR反应鉴别引物:’GCGAAAGCTCGACCTAGCAAGGGGACCACA’和’CAGGCTCCTCTAGGTTGTTATGGGGTACCG’。PCR反应体系:μl反应体系包括×PCR缓冲液μldNTP(mM)μl鉴别引物(μM)各μl高保真TaqDNA聚合酶(Uμl)μl模板μl无菌双蒸水μl。PCR反应参数:℃预变性分钟后进行次循环(℃秒℃秒)后延伸℃分钟。电泳检测用琼脂糖凝胶电泳法胶浓度为%胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed供试品与对照药材鉴别PCR产物的上样量分别为μlDNA分子量标记上样量为μl(μgμl)。电泳结束后凝胶在凝胶成像仪上或紫外透射仪上观察供试品与对照药材凝胶电泳图谱在bp之间应有单一条带。

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