食品微生物学检测中菌落总数测定测量结果的不确定度评定

食品微生物学检测中菌落总数测定测量结果的不确定度评定食品微生物学检测中菌落总数测定测量结果的不确定度评定依据JJF1059－1999《测量不确定度评定与表示》、 CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析一、测量方法按照国家标准GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行。检测过程为： 1）以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其它稀释液灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做出1：10的均匀稀释液。固体...

食品微生物学检测中菌落总数测定测量结果的不确定度评定依据JJF1059－1999《测量不确定度评定与表示》、 CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析一、测量方法按照国家标准 GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行。检测过程为： 1）以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其它稀释液灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做出1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均置器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min，做出1：10的均匀稀释液。 2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其它稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做出1：100的稀释液。 3）另取1mL灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。 4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2个～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。 5）稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46℃±1℃水浴保温）注入培养皿约15mL，并转动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液灭菌培养皿内作空白对照。 6）待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h±2h。 7）作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 8）选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平板内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。同一样品重复测量10次,取其平均值作为测量结果。10次重复测量的结果见表1。表1 单一样品重复测量的计算过程序号测量结果xi lgxi lgxi－ (lgxi－ )2 1 35000 4.5441 -0.03067 0.000941 2 88000 4.9445 0.36973 0.1367 3 100000 5.0000 0.42523 0.180821 4 200000 5.3010 0.72623 0.52741 5 65000 4.8129 0.23813 0.056706 6 9600 3.9823 -0.59247 0.351021 7 50000 4.6990 0.12423 0.015433 8 9800 3.9912 -0.58357 0.340554 9 9000 3.9542 -0.62057 0.385107 10 33000 4.5185 -0.05627 0.003166 平均值 59940 4.5748 二、数学模型从数据看，由于测量结果发散极大，与之相比其它不确定度来源（人员、标准、设备、环境、方法等）无疑均可以忽略不计，这也是微生物测量的特点。因此仅考虑由测量结果发散引入的不确定度分量。于是数学模型可以简单地写为 y=x 三、测量不确定度评定由于重复测量结果中最大值和最小值相差20倍。因此用常规的直接根据平均值得到标准偏差的方法显得有些不合理。通常的做法是取对数以后在用常规的贝塞尔方法进行计算。具体计算过程如下： 1）测量结果xi（表1第2列）； 2）取对数lgxi，得到对数lgxi的平均值为： =4.5748（表1第3列）； 3）求残差lgxi－（表1第4列） 4）求残差的平方（lgxi－）（表1第5列），得到残差平方和为＝1.997859 5）合成标准不确定度测量结果为10次重复测量的平均值，故平均值的标准不确定度为 =0.1490 6）扩展不确定度由于置信概率p=95%，自由度ν=10-1=9，由t分布表可得k=2.26。于是 7）取反对数，由lgx坐标回到x坐标由于lgx与x之间的非线性关系，不能直接求扩展不确定度U的反对数，只能给出微生物含量的可能区间。因此首先确定lgx的取值范围为：lgx=4.5748±0.3367，或写成 4.2381≤lgx≤4.9115 取反对数后可得 1.7×104≤x≤8.2×104 四、不确定度报告由于微生物测量结果的特殊性，所以其测量结果的不确定度表示也与其他专业不同。按照国家标准GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行，被测样品微生物菌落总数（十次测量平均值）在1.7×104和8.2×104之间。

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