植物中总黄酮的提取与测定
原理
黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基,能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色,溶液在510 nm 处有最大吸收,显色反应在60 min 内稳定。用芦丁作为对照品,用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂,吸光度与芦丁的浓度呈线形关系,采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
仪器与试剂
新锐T6型紫外可见分光光度计;Explrer型电子天平(0.1mg)。60%的乙醇溶液;5%亚硝酸钠溶液;10%硝酸铝溶液。
芦丁
标准
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溶液的配制
称量13.2mg芦丁,用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。
标准曲线的制作
准确吸取0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0 ml芦丁标准溶液,放入10毫升容量瓶内(写明标记),分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液;再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀,放置6min;加入10%硝酸铝溶液0.5ml,放置6min后;加入4%氢氧化钠溶液4.0ml,加60%乙醇定容,摇匀后,放置15min;(扫描找到最大吸收)在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白,用芦丁含量的浓度作为横坐标,纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度,作标准曲线。
总黄酮提取与测定和计算
称取0.6—0.8g样品粉末,加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内,置于水浴锅上, 70℃条件下回流提取60min。过滤、定容于100ml.
吸取样品量(根据样品的吸光度调整)1.0ml,放入10毫升容量瓶内(写明标记),用60%乙醇加到2.0ml;加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀,放置6min;加入10%硝酸铝,溶液0.5ml,放置6min后;加入4%氢氧化钠溶液4.0ml,摇匀后,加60%乙醇定容,放置15min;在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。
总黄酮含量=A/M·100×稀释倍数A为标准曲线中的含量。
例如:测得的吸光度=0.504 Y=0.0101x+0.0017
A= Y-0.0017/0.0101=0.504-0.0017/0.0101=49.73
M为样品的质量(mg)
浙公网安备 33021202002483