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第三节
标准
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作业程序
尿液
分析
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操作程序
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1 目的
规范
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尿液分析试验,确保检测结果准确性和重复性。
2 标本采集与要求
2.1 收集尿液的容器和尿量
收集尿液标本的容器多种多样,留取标本最基本的要求是使用清洁、干燥、方便的容器。无论采用何种容器,都必须满足下列要求:
2.1.1 门诊病人凭交费发票在检验科窗口领取一次性尿杯。根据检验单要求留取尿样,交由检验科窗口工作人员。
2.1.2 病房送检的尿标本容器上应使用标签,并注明病人的姓名、科别、床号、检测项目等,尽可能注明收集标本的时间。
2.1.3 容器只限一次性使用、清洁,不含有干扰试验的物质。
2.1.4 所用容器至少可容纳50ml尿液,开口应大于4cm,底部要宽,以防止尿液溅出。
2.1.5 容器应方便运输,便于保存。
2.1.6 对于儿科患者,特别是新生儿,可使用小型,特殊的容器。
2.1.7 对尿量,尿液分析和妊娠试验不少于10ml。
2.2 收集尿液标本的
方法
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2.2.1 自然排尿法
适用于尿液分析检查、细菌检查和细胞学检查。取尿标本时,注意防止尿道口分泌物的污染,特别是女病人易受阴道分泌物污染。临床最常用的方法是采用中段尿法,即尿流开始的小部分弃之,收集中段尿于尿杯中。细菌检查,必须用无菌盐水彻底清洗外生殖器,然后收集中段尿于无菌容器中。
2.2.2 膀胱导管或穿刺法
对于自然排尿困难的病人或为了避免女病人阴道分泌物的污染,可采用膀胱导管。但此法可能把细菌带入膀胱而引起感染,故不宜经常使用。为了获得单次
尿标本,在耻骨弓上穿刺膀胱取尿有时被用来代替导管取尿。
2.3 尿液标本的种类
2.3.1 首次晨尿标本
收集早晨起床后的第一次尿液标本,此尿液最适合于尿液常规检查和HCG
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定性定量试验,特别是细菌及亚硝酸盐、尿蛋白和细胞、管型等有形成分的显微镜检查。
2.3.2 随机尿标本
随机留取任何一个时间的尿液标本,不受条件的限制。此类标本容易获得,是尿液分析等检查最常用的方法,但受饮水、饮食和收集时间等多种因素影响,病理成分容易漏诊。仅适用于门诊、急诊病人的过筛检验。
2.3.3 空腹尿标本
即进食前的尿液标本。此标本对糖尿病患者尿糖测定有较大意义。
2.3.4 餐后尿标本
即通常在餐后两个小时收集的尿液。其对于病理性蛋白尿、糖尿检查更为敏感。午餐后尿,对尿胆原检查特别有益。
2.3.5 三小时尿标本
即收集上午3小时的尿液标本。具体的做法:嘱病人于留尿前一天少饮水,使得尿液浓缩呈偏酸性,不含晶形或非晶形盐类。早晨8点排空膀胱的尿液,然后卧床3小时,至11点收集所有尿液标本。此标本适用于病人每小时或每分钟细胞排泄率。
2.3.6 十二小时尿标本
即患者正常进食,晚上8点排空膀胱的尿液,于容器中加入约10ml甲醛作为防腐剂,再收集以后12小时内所有尿液标本。曾常用于细胞、管型等有形成分的计数,如尿Addis计数等,因患者标本采集繁琐和有形成分长时间保存困难,
现己少用,建议使用3小时尿标本。
2.3.7 二十四小时尿标本
病人于早晨8点排空膀胱的尿液,再收集以后24小时内所有尿液标本。此标本用于体内代谢产物的定量检测,如尿蛋白、微量白蛋白排泄率、糖、肌酐定量、儿茶酚胺等检查。
2.4 尿液标本的保存
尿液化学物质和有形成分不稳定,排出后即开始发生物理和化学变化,如胆红素、尿胆原见光易分解;抗坏血酸消失。细菌生长导致尿液成分的改变:尿素经细菌酵解生成氨,尿pH升高,使尿液有形成分破坏;葡萄糖被细菌降解,使病理性尿糖消失。因此,应提倡常规检查在排尿后尽快送检。室温保存的尿液标
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本须2小时内测定完毕,检测的标本不保存。标本如不能及时分析,必须采取保存措施,冷藏法或化学防腐法。
2.4.1 冷藏法
冷藏可抑制微生物生长,维持尿液pH恒定,使尿中有形成分的形态基本不变。但4oC条件下,冷藏不得超过8小时,有时冷藏时非晶形磷酸盐和尿酸盐可析出形成沉淀影响尿沉渣检查,故检验前应恢复至室温。
2.4.2 化学防腐法
常用的化学防腐剂有:(1)甲苯:于尿液表面加甲苯数滴,使成一薄层隔绝空气,防止细菌生长繁殖,通常用于一般化学成分检查;(2)甲醛:每100ml尿液加40%甲醛0.5ml可抑制细菌生长并固定尿中有形成分,适用于尿液有形成分的检查,但不能使用于具有还原性醛基的化学成分(如糖、17-羟皮质类固醇)检查;(3)盐酸:每1000ml尿标本中加入浓盐酸1ml即可,使尿液维持在pH2,此标本主要可用于17-羟皮质类固醇、17-酮类固醇、儿茶酚胺、丙酮定量等。2.5 尿液标本收集的注意事项
临床医护人员和实验室工作人员应指导病人正确留取尿标本的方法。根据不
同实验要求,留取不同种类的尿液标本、不同的取样方式和尿量。尿液分析、尿生化、HCG定性试验、尿液细胞计数、尿含铁血黄素标本,一般留取约20ml。注
意防腐剂使用的种类、使用的方法,并嘱咐病人注意防腐剂对自己的伤害。
2.6 不合格尿液标本的处理
对标识不明、标本量不合适、防腐剂和容器使用不当等不合格的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理。
3 测定方法
干化学法。
4 测定分析原理
4.1 尿比重
尿比重测定是在流动池中进行,在吸入标本过程中流动池中充满了尿标本。光电二极管发出650nm光照射到流动池。尖端的光电元件CCD测定总反射光的角度。标本的折射指数是反射光与标准曲线反射光角度进行比较(贮存于仪器的曲线图),再转换成尿液比重。
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4.2 尿pH
尿pH测定基于模块中两种指示剂反应,甲基红、溴麝香草酚兰。在尿液pH为5-9时,这种试剂带的颜色变化经历从橘红、黄绿至蓝色。
4.3 尿白细胞
尿液中的白细胞主要是中性粒细胞,试剂带反应利用中性粒细胞酯酶的特性,反应区含有吲哚酚酯,它能被粒细胞酯酶分解成吲哚酚,后者与重氮盐反应形成紫色缩合物。
4.4 尿亚硝酸盐
亚硝酸盐与Gress氏检测原理相同,在尿液中的硝酸盐被细菌分解代谢为亚硝酸盐:硝酸盐→尿液中细菌还原作用→亚硝酸盐。在酸性条件下,亚硝酸盐和氨苯基磺胺重氮化反应生成重氮盐化合物,后者与 3-羟基1.2.3.4-四氢苯并喹啉偶联生成红色的偶氮化合物,红色化合物的强度于亚硝酸盐的浓度呈正比。
4.5 尿蛋白质
蛋白模块检测区含有缓冲化合物和溴酚兰指示剂。在一定pH条件下,溴酚
兰指示剂产生出阴离子,与带阳离子的蛋白质(主要是白蛋白)发生颜色变化,从黄色转变成绿色。
4.6 尿葡萄糖
葡萄糖测定的原理是基于特异的葡萄糖氧化酶-过氧化物酶,葡萄糖氧化酶作用与尿液中D-葡萄糖使其形成β-D-葡萄糖内酯和过氧化氢,过氧化氢再被过氧化氢酶催化释放出氧,后者使色源呈现不同的颜色变化(从黄色变化为兰绿色再变化为绿色)。
4.7 尿酮体
尿酮体测定原理基于朗格氏法,在碱性条件下尿液中的乙酰乙酸和丙酮与硝普钠和甘氨酸反应生成紫红色化合物。本实验对乙酰乙酸和丙酮特异,但不与β-羟丁酸发生作用。
4.8 尿胆原
在酸性基质下,尿胆原与对甲氧基苯重氮氟酸盐发生重氮偶联生成红色的重氮盐化合物。
4.9 胆红质
试剂带测定尿胆红质是在酸性基质下,胆红质与重氮盐偶联反应行成红-紫
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色的重氮盐化合物。
4.10 红细胞
血红蛋白或肌红蛋白具有过氧化物酶样活性,催化四基联苯胺和有机物氢过氧化物反应,使四甲基联苯胺呈现绿色。
5 试剂
5.1 试剂
来源:罗氏尿液分析试纸条试剂。
贮存条件及稳定性:2-30℃保存至有效期。
试剂准备:即开即用,开封后,可稳定保存14天。
5.2 校准物
来源:罗氏尿液分析校准条。
贮存条件:2-30℃保存。
5.3 质控物
来源:伯乐质控品。
贮存条件: 2-8℃保存至有效期。
6 仪器
URYSIS 2400尿液分析仪。
7 操作程序
见《URYSIS 2400尿液分析仪操作程序》。
8 生物参考区间
尿比重:1.000-1.040。
尿pH:随机尿:pH为4.8-7.4;晨尿:pH为5-6。
尿白细胞:正常人<10个白细胞/μl;可疑范围为 10-20 个白细胞/μl;
病理状态>20个白细胞/μl。
尿亚硝酸盐:正常人尿液中亚硝酸盐为阴性。
尿蛋白质:正常人尿液中蛋白低于10mg/dl。
尿葡萄糖:正常人空腹尿糖<1.1mmol/L(20mg/dl);
日间尿糖<1.7mmol/L(30mg/dl)。
尿酮体:正常人尿液中乙酰乙酸低于 0.5mmol/L(5mg/dl)。
尿胆原:正常人尿液尿胆原低于17μmol/L(1mg/dl),为弱阳性。
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胆红质:正常成人尿胆红质低于3.4μmol/L(0.1mg/dl)。
红细胞:正常人尿液中红细胞为0~5 个/μl。
9 性能指标
灵敏度:白细胞:28 Leu/μL;亚硝酸盐:0.07 mg/dl;尿蛋白质:12 mg/dl;尿葡萄糖:40 mg/dl;尿酮体:5 mg/dl;尿胆原:1.4 mg/dl;胆红质:0.6 mg/dl;红细胞:7 Ery/μL。
10 可追加检测时限
不可追加。
11 结果编辑和
报告
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签发
检验结果自动传入LIS系统,由当日报告审核人员审核后发放,详见《实验室信息系统操作手册》。