中国运动医学杂志 2010年 5月第 29卷第 3期 Chin J Sports Med,May 2010,Vol.29,No.3
胰岛素 受 体 底物 -2 (insulin receptor substrate,
IRS-2)是细胞质中的接头蛋白(Adaptor),主要连接胰岛
素受体(IR)和多种效应分子,从而介导细胞对胰岛素
(INS)等的反应[1]。随着基因剔除技术的发展,发现剔除
IRS-2 基因的纯合子动物 (IRS-2-/-) 具有 2 型糖尿病
(DM)的全部特征[2],因此 IRS-2 及活动规律成为近来 2
型 DM 研究的热点。运动是治疗 2 型糖尿病的主要非药
物手段,运动可提高胰岛素的敏感性和作用效果,由于
IRS-2 的特殊作用,运动对胰岛素的影响与 IRS-2 的介
导功能相关。有研究发现运动可提高 IRS-2 蛋白表达和
磷酸化程度[3,4],但不同运动时间对 IRS-2 含量和磷酸
化的影响还不清楚。故本实验通过测定 2 型糖尿病大鼠
进行 8 周不同运动时间的跑台运动后骨骼肌 IRS-2 蛋
白含量及磷酸化变化,为 DM 运动疗法提供更科学的理
论指导。
1 材料与
方法
快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载
1.1 动物
70 只健康 Sprague-Dawley(SD)大鼠,体重(200±16)
g,雌雄不拘,由大连医科大学动物中心提供(许可证号:
SCXK(辽)2004-0017)。在
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
环境下常规分笼喂养,自
由饮水进食。适应性喂养 1 周后进行适应性训练。随机选
择 10 只大鼠为正常对照组,其余为实验组,制备 2 型糖
尿病大鼠模型。
1.2 实验方法
1.2.1 2 型糖尿病大鼠模型制备
参照洪丽莉等的方法制备模型[5]。实验组大鼠进行
4 周高脂饲料喂养,同时加 3%果糖饮水。 4 周后按
30mg/kg 体重的剂量一次性腹腔内注射 STZ(溶于 0.1
mmol/L 柠檬酸缓冲液,pH4.4)。注射后 1 周进行葡萄糖
耐量试验。方法为:大鼠禁食 4~6 小时,经腹腔注射葡
萄糖(2g/kg 体重),断尾采血测定 0、60 和 120min 时的血
糖。 DM 诊断标准为连续 2 次空腹血糖 (FGB)≥
7.8mmol/L 或葡萄糖负荷后 2h 血糖≥11.1mmol/L[6]。此
方法造模成功率达 85%。2 周后,大鼠禁食 12h 后,断尾
取血,用罗氏试纸测大鼠空腹血糖(FBG),同时检测空腹
胰岛素(FINS)。
高热量饲料配方:100kg 大鼠基础饲料中加人全蛋
粉 6kg(大连生化制品有限公司生产)、蔗糖 23kg(广西糖
业集团销售有限公司生产)、炼猪油 26.5kg(河北石家庄
制造),混和成形,烤干成 150kg。其总热量为 20.083J/g,
即 4.80CaUg,其中蛋白质占 15%,碳水化合物占 51%,脂
肪占 25%。
1.2.2 糖尿病大鼠运动
方案
气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载
将符合标准的 50 只糖尿病大鼠随机分为糖尿病对
照组和糖尿病运动组(20min 组、40min 组、60min 组和
80min 组),并继续高脂饲料喂养。各糖尿病运动组运动
强度参照 Soya 等的实验[7],以 20m/min 进行 8 周跑台运
动。运动时间分别为每天 20min、40min、60min 和 80min。
对照组常规饲养。本实验动物的处置符合国际实验动
物伦理学要求。
华宏 1 王耀光 1 郭仁勇 2
1 辽宁师范大学体育学院(大连 116029) 2 辽宁师范大学生命科学学院
不同运动时间对 2 型糖尿病大鼠骨骼肌
IRS-2 蛋白含量及磷酸化的影响
摘要 目的:探讨不同运动时间对 2 型糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物-2(IRS-2)蛋白含量及
磷酸化的影响。方法:采用高脂饲料喂养和腹腔内注射 STZ 制备糖尿病大鼠模型。将符合标准的 50 只糖尿
病大鼠随机分为糖尿病对照组和糖尿病运动组(20min 组、40min 组、60min 组和 80min 组),并继续高脂饲料
喂养。另取 10 只正常 SD 大鼠为正常对照组。各糖尿病运动组以 20m/min 的强度进行 8 周不同时间的跑台运
动。采用 Western blot 免疫印迹法检测各组大鼠骨骼肌 IRS-2 蛋白含量及磷酸化程度。结果:与糖尿病对照组相
比,20min 组、40min 组、60min 组和 80min 组大鼠股四头肌 IRS-2 蛋白含量分别升高 11.7%、12.4%、12.2%和
11.9%(P <0.01);与 20min 组及 80min 组相比,40min 组 IRS-2 蛋白含量分别升高 10.9%和 10.7%(P <0.05)。
与糖尿病对照组相比,20min 组、40mmin 组、60min 组和 80min 组大鼠股四头肌 IRS-2 磷酸化分别升高 11.2%、
12.7%、12.2%和 11%(P<0.05 和 P<0.01);与 20min 和 80min 组比,40min 组和 60min 组 IRS-2 磷酸化水平分
别升高 11.3%、11.5%(P<0.01)和 10.9%、11.1%(P<0.05)。但各组仍未恢复到正常对照组水平。结论:不同运
动时间对 2 型糖尿病大鼠骨骼肌 IRS-2 蛋白含量和磷酸化产生不同的影响,以 40min 效果最好。
关键词 不同运动时间;2 型糖尿病大鼠;骨骼肌;IRS-2 磷酸化
基金项目:辽宁省教育厅自然科学基金资助课
题
快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题
(20060474)
通信作者:王耀光,Email:yaoguangw@163.com
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中国运动医学杂志 2010年 5月第 29卷第 3期 Chin J Sports Med,May 2010,Vol.29,No.3
1.2.3 取材和指标测定
各组大鼠运动后即刻腹腔内注射 3%戊巴比妥钠
(50mg/kg 体重)麻醉,取后肢股四头肌肉组织,置于液氮
中,待提取蛋白质。
称取骨骼肌 100mg,剪碎后置于组织匀浆液 600μl
(2%SDS,50mmol/L Tris-HCl,pH6.8,10%甘油,1mmol/L
Na3VO4,1mmol/L PMSF,5g/L Leupeptin)中,采用 Poly
tron PT10-35 组织扩散仪制备组织匀浆(7000~10000g)。
所得匀浆置于 4℃、10000g 离心 10min,取上清液,采用改
良 Lowery 法测定蛋白浓度[8],以备上样。
1.2.4 IRS-2 蛋白表达测定
采用 Western blot 免疫印迹法。取含等量总蛋白
(50μg)的样品,经 7.5%SDS-PAGE 分离,电转膜后以 5%
脱脂奶粉封闭,再分别与兔抗人 IRS-1 和 IRS-2 多克隆抗
体反应,继而与辣根过氧化酶标记的羊抗兔二抗作用,以
增强化学发光法(ECL)显示蛋白条带,并用激光光密度
扫描仪测定蛋白条带光密度。
1.2.5 IRS-2 蛋白磷酸化的测定
采用免疫沉淀及增强化学发光法。取含等量总蛋白
(500μg)的样品,与抗 IRS-2 抗体 4℃孵育过夜。抗原-抗
体复合物经固相化蛋白 G 沉淀后,重新溶解于 Laemmli
上样缓冲液,加热到 95℃ 5min,经 7.5%聚丙烯酰氨凝
胶电泳 1.5h。抗-磷酸化酪氨酸免疫印迹,醋酸纤维薄
膜直接与辣根过氧化物酶结合的一抗 APY20H 孵育
1.5h。充分洗涤后与 ECL 反应 1min,即刻 X 线片曝光,
洗片后用 Leica Q550-IW 图像
分析
定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析
仪(德国)进行扫描,
计算光密度。
以正常对照组的 IRS-2 蛋白含量和磷酸化为 100 作
为标准,计算其他各组的相对量。
1.2.6 试剂与仪器
IRS-2 多克隆抗体够自 R&D Systems 公司,ECL 购
自英国 Amersham 公司。预染蛋白 Marker 购自 New
England BioLabs。血糖(FBG)用快速血糖仪检测,仪器及
试纸由美国强生公司生产。胰岛素(FINS)用放射免疫法
检测,试剂盒由南京生物工程研究所提供,批内 CV<3%,
批间 CV<5%。甘油三酯(TG)试剂盒:北京福瑞生物工程
公司生产,批号:040702。总胆固醇(Tc)试剂盒:北京福
瑞生物工程公司生产,批号:040702。动物跑台由北京硕
林苑科技有限公司生产,型号为 SLY-RTML 六跑道大鼠
跑台。
1.3 统计学分析
采用 SPSS11.0 软件包对实验数据进行统计处理,以
均数±标准差表示,组间显著性差异比较采用单因素方
差分析(ONE-WAY ANOVA),多重比较采用 LSD 法。显
著性水平 α 为 0.05。
2 结果
表 1 显示,与正常对照组相比,糖尿病大鼠体重明
显增加(P <0 .01),血清甘油三酯和总胆固醇水平也明
显升高(P <0 .01),同时血糖和胰岛素水平明显升高
(P <0 .01)。
表 2 显示,与对照组相比,糖尿病对照组股四头肌
IRS-2 蛋白含量下降 41%(P <0.01)。与糖尿病对照组相
比,运动 20min 组、40mmin 组、60min 组和 80min 组分别
升高 11.7%、12.4%、12.2%和 11.9%(P<0.01)。与 20min
组及 80min 组相比,40min 组 IRS-2 蛋白含量分别升高
10.9%和 10.7%(P <0.05)。但各组仍未恢复到正常对照
组水平。
与对照组相比,糖尿病对照组股四头肌 IRS-2 磷酸
化水平下降 49%(P<0.01)。与糖尿病对照组相比,运动 20min
组、40mmin 组、60min 组和 80min 组分别升高 11.2% 、
12.7%、12.2%和 11%(P<0.05 和 P<0.01)。与 20min 组和
80min 组比,40min 组和 60min 组分别升高 11.3%、11.5%
(P<0.01)和 10.9%、11.1%(P<0.05)。但各组仍没有恢复
到正常对照组水平。
3 讨论
根据 Soya 对运动强度的确定依据,20m/min 相当于
LT(乳酸阈)强度,LT 为有氧代谢向无氧代谢的转折点,
相当于 4mmol/L 血乳酸浓度,当运动强度高于 LT 时,机
体的代谢开始转向无氧代谢。LT 已经成为有氧健身锻炼
和康复训练的一个强度标准。美国运动医学会(ACSM)
和美国糖尿病协会(ADA)运动锻炼方案:运动与糖尿病
专业指南[9]也将 LT 强度列为糖尿病康复锻炼推荐的上
限强度。 IRS-2 主要连接胰岛素受体(IR)和多种效应分
子[10]。INS与 IR结合后,IR的 β亚基近膜区酪氨酸(Tyr)自
身磷酸化并且与 IRS-2 结合,IR 上激活的酪氨酸蛋白激
酶(PTK,IR-TK)催化 IRS-2 上多个 Tyr 磷酸化,为下游
含 SH2 区的蛋白提供位点,形成信号蛋白复合物,以介
导进一步的信号传导[11,12]。Park 等的研究发现,运动可
表 1 造模成功后两组大鼠体重、血糖、血脂和胰岛素水平
正常组(n=10) 糖尿病组(n=50)
体重(g) 292±15 382±17*
血糖(mmol·L-1) 4.57±0.49 11.74±3.95*
胰岛素(mU·L-1) 15.25±2.62 33.82±1.68*
血清甘油三酯(mmol·L-1) 0.85±0.21 1.51±0.36*
总胆固醇(mmol·L-1) 1.81±0.16 2.68±0.69*
注:*P <0.01,与正常对照组相比。
表 2 各组大鼠股四头肌 IRS-2 蛋白含量及磷酸化比较
组别 n IRS-2蛋白含量 IRS-2磷酸化
对照组 10 10.0±0.21 10.0±0.24
糖尿病对照组 10 5.9±0.39# 5.10±0.45#
糖尿病运动组
20min组 10 6.9±0.45◎ 5.72±0.47◎
40min组 10 7.53±0.48◎*○ 6.49±0.58◎**○○
60min组 10 7.30±0.59◎ 6.23±0.54◎*○
80min组 10 7.02±0.57◎ 5.62±0.59◎
注:#P <0.01:与对照组相比;◎P <0.01:与糖尿病对照组相比;
*P <0.05,**P <0.01:与 20min 组相比;○P <0.05,○○P <0.01:与
80min组相比。
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提高 IRS-2 蛋白含量和磷酸化程度[13-15],但这些实验均
采用单一固定时间,不同运动时间对 IRS-2 蛋白含量和
磷酸化影响的研究还未见报道。本实验结果显示,8 周运
动后,与糖尿病对照组相比,运动组大鼠骨骼肌 IRS-2 蛋
白含量显著增加,不同运动时间效果不同,并且 IRS-2 磷
酸化的作用效果也存在差异,以运动 40min 效果最好。由
于此类研究才刚开始,还需进一步探索。
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