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久泻灵颗粒剂治疗溃疡性结肠炎的实验及临床研究.pdf

久泻灵颗粒剂治疗溃疡性结肠炎的实验及临床研究

bachdong1
2011-09-23 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《久泻灵颗粒剂治疗溃疡性结肠炎的实验及临床研究pdf》,可适用于自然科学领域

ExperimentalandClinicalStudiesonTreatingUlcerousColitisofJiuxielingGranulesByWUYuHongSupervisor:Prof.WEIYanMingADissertationSubmittedtoGansuAgriculturalUniversityforTheDegreeofDoctorofAgronomy’CompletedinJuneCommencementiJunef|肃农、I止人学届博十学{V论文项目来源一、项目来源:兰州市科技局资助项目项目编号:二、项目来源:甘肃省中管局资助项目项目编号:.GZK一IIlr肃农业人学扁博十学f节论文中文摘要目的本研究观察了久泻灵颗粒剂(JiuxielinggranulesJXLG)对免疫复合物联合乙酸局部灌注的方法建立的大鼠溃疡性结肠炎(UlcerativecolitisUC)模型的结肠组织粘膜脂质过氧化水平、血清炎性细胞因子水平、结肠组织病理改变、结肠组织NF.KB及ICAM.表达的影响另外观察了JXLG对例溃疡性结肠炎患者的临床疗效及其治疗前后的对肠粘膜IgAIgGIgM和补体C的影响以探讨JXLG对溃疡性结肠炎的防治作用及其药理机制。方法.采用异种异体结肠黏膜组织致敏法和乙酸局部灌肠相结合的方法制造动物模型。将wistar大鼠随机分为正常对照组模型对照组阳性对照组(SalicylazosulfapyridineSASP组)JXLG大、中、低剂量组。连续给药天末次给药后h大鼠股动脉取血分离血清采用放射免疫法测定大鼠血清及结肠组织匀浆细胞因子IL、TNFQ含量及ELISA法测定大鼠血清细胞因子IFNY含量。处死大鼠后制备结肠组织匀浆生化法检测结肠组织中GSHPx、SOD、MDA、NO、TNOS和iNOS的水平处死大鼠后同时制备结肠组织标本病理切片HE染色后进行病理组织学评分免疫组化切片观察结肠组织NFKB及ICAM一的表达。.将例患者随机分为治疗组和对照组治疗组采用纯中药JXLG口服和灌肠治疗对照组(SASP组)口服西药柳氮磺胺吡啶治疗。两组均以w为个疗程连续服用个疗程后观察两组治疗前后治疗组总有效率肠粘膜病变改善情况及IgAIgGIgM补体C变化情况。结果.JXLG可显著改善肠黏膜炎症降低病理组织学评分。模型组黏膜层见不同程度充血、水肿、糜烂及出血浅小溃疡形成溃疡面有渗出性坏死层溃疡的周围腺体扩张腺上皮细胞轻度增生粘膜下固有层局部充血、水肿肠壁各层充满浸润的炎性细胞。以中性粒细胞为主。模型组病理组织学评分显著高于正常对照组(P<.)JXLG小、中、大剂量组及阳性对照组溃疡较浅表溃疡旁上皮修复明显腺体增生活跃肠黏膜充血、水肿、糜烂显著改善。还可见较少.UC模型大鼠血清IFN.Y含量明显升高(尸<.)JXLG大、中、小剂量组血清IFN.Y含量低于模型大鼠(尸<.orP<.)UC模型大鼠血清IL.含量低于正常对照组(尸<.)JXLG大、中剂量组血清IL.含量高于模型大鼠(P<.orP<.)UC模型大鼠血清TNF.Q含量明显升高(尸<O.)JXLG大、中剂量组血清TNF.Q含量低于模型大鼠(P<O.orP<.)。UC模型大鼠结肠粘膜匀浆IL一含量低于正常对照组(P<.)JXLG大、中、小剂量组大鼠结肠粘膜匀浆IL.含量高于模型大鼠沪<.orP<.)UC模型大鼠结肠粘膜匀浆TNF.Q含量高于正常对照组(P<O.)JXLG大、中、d,N量组大鼠结肠粘膜匀浆TNF.Q含量低于模型大鼠(尸<.orP<.)。.JXLG能够明显改善临床症状和病灶提高机体的免疫力和抵抗力能够降低IgAIgG,IgM补体C值。治疗组总有效率占.%对照组占.%。结论.JXLG对溃疡性结肠炎模型大鼠有显著的干预作用其机制可能与抗氧自由基损伤抑制NO、TNOS和iNOS生成及增强抗氧化酶活性有关。JXLG通IV过抑炎症y和应激关键VELISA.Thehomogenateofcolonmucousmembraneweremade.todetermineGSH·Px、SOD、MDA、NO、TNOSandiNOSconcentrationbybiochemistrymethod.InadditioncolonmucousmembranewasmadebiopsythroughHEstainingtocalculatehistopathologicalscore.AndimmunohistochemicalsectionsweremadetoresearchexpressionsofNFrdandICAM一incolontissue..patientswererandomlydividedintotreatmentgroupandcontrolgrouptreatmentgroupWastreatedwithJXLGbyoralandenematreatmentandthecontrolgroupWastreatedwithSASP.Bothgroupsweretreatedcontinuouscoursesasawholecourseandeachcourselastsweeks.Aftertreatmentthetotalefficiency,colonlesionsIgAIgGIgMandcomplementCchangesofpretreatmentandposttreatmentwereobservedtocompareandanalyzetheeffectsofJXLGRESUITS:.JXLGcouldmarkedlyimprovecolonmucosalinflammationanddecreaseff.肃农、Ik入学屑博十学移论文histopathologicalscore.ThecolonmucousofmodelgroupsuffereddifferentlevelsofmucosacongestionedemaulcerationbleedingandsmallshallowulcerswithexudativenecroticulcerexpansionaroundtheglandInadditionthecolonmucousglandularepithelialcellsbecamemildhyperplasiasubmucosallaminapropriaalsosufferedcongestionandedema.andbowelwalllayerswerefilIedwithinflammatorycellsespeciallyneutrophils.Histopathologicalscoresofmodelgroupweresignificantlyhigherthanthatofthenormalgroup俨<.).thecolonmucousulcerofJXLGtreatedgroupandSASPgroupismoresuperficialandepitheliumadjacenttoulcerrepairedsignificantly,theglandnexttoulcerbecamehyperplasiaactively.Inadditionthecolonmucosalhyperemiaedemaanderosionsignificantlyamelioratedandfewerinflammatorycellsinfiltrated.HistopathologicalscoresofJXLG·treatedgroupsdecreasedgreatly(P<O.orP<.ooi)..DifferentdosesofJXLGcouldweakenexpressionsofNFrdandICAMinColontissue.TheexpressionofNFr,Bofcolonmucousinnormalgrouponlyisweak.butthatofmodelgroupwasslightlyhigher(尸<O.).TheexpressionofNFrdofcolonmucousinpositivecontrolgroupandJXLGtreatedgroupsreduced护<.orP<O.).TheexpressionofICAMofcolonmucousinnormalgroupisweak.butthatofmodelgroupWassignificantlyhigherthanthenormalgroupandJXLGtreatedgroups(P<.)..JXLGcouldmarkedlyincreasethelevelsofGSHPx、SODwhiledecreasethelevelsofMDANOTNOSandiNOS.ComparewithnormalcontrolgrouptheMDANOTNOSandiNOSlevelsofcolonmucousmembraneofmodelgroupincreased(P<O.)。andtheSODandGSHPxevelsofcolonmucousmembraneofmodelgroupdecreasedmarkedly(P<O.)theresultsindicatedthatcomplexUCmodelsweremadesuccessfully.Comparewithmodelgroup.theSODandGSHPxconcentrationofhighandmiddledosagegroupofJXLGincreasedmarkedly(尸<.orP<.)andtheMDANOTNOSandiNOSlevelsofcolonmucousmembraneinthesamegroupdecreasedmarkedly(P<O.).theNO.TNOSandiNOSlevelsofcolonmucousmembraneinthehighandmiddledosagegroupofJXLGdecreasedmarkedly(尸<.or尸<O.)andtheeffectsofthehighdosagegroupofJXLGparticularfunctionedfurther..ThecontentofIFNinbloodserumofmodelgroupWashi曲erthanthatofnormalgroup(P<.)andthecontentsofIFN吖inbloodserumforthreeJXLGtreatedgroupswerelowerthanthatofmodelgroup(P<.orP<O.).ThecontentofIL一inbloodserumformodelgroupWaslowerthanthatofnormalgroup(P<.)andthecontentsofIL一inbloodserumformiddleandhighdosageVlI竹肃农、世人学屑博十学化论文ofJXLGtreatedgroupswerehigherthanthatofmodelgroup(P<.orP<O.).ThecontentofTNFainbloodserumfromodelgroupwashigherthanthatofnormalgroup(P<.O)andthecontentsofTNFainbloodserumformiddleandhi曲dosageofJXLGtreatedgroupswerelowerthanthatofmodelgroup(P<.orP<.).ThehomogenateofcolonmucousmembranecontentofIL一ofmodelgroupwaslowerthanthatofnormalgroup(P<.O)andthehomogenateofcolonmucousmembranecontentsofIL·inallthreeJXLGtreatedgroupswerehigherthanthatofmodelgroup(P<O.Oor尸<.).ThehomogenateofcolonmucousmembranecontentofTNFainmodelgroupwashigherthanthatofnormalgroup(P<.)andthehomogenateofcolonmucousmembranecontentofTNFainallthreeJXLGtreatedgroupswerelowerthanthatofmodelgroup(P<O.orP<.)..JXLGCansignificantlyimprovetheclinicalsymptomsandimprovethebody’SimmunityandresistanceandreducethelevelsofIgAIgGIgMandcomplement.CThetotaleffectiverateintreatmentgroupWas.%.while.%incontrolgroup.CONCLUSlNS:.JXLGhasasignificantinterventioneffectonratmodelofUCwhichmaybeactasallantioxidantofresistingfreeradicaldamageandinhibitingofNOTNOSandiNOSproductionenhanceantioxidantenzymeactivityandincreasethelevelofIL一decreasethatofIFNYandTNFa.JXLGalsocouldblockinflammationandreducetheamplificationeffectofcoloninflammationbyinhibitingactivationofNFKBandexpressionofICAM一SoJXLGhaveabettertherapeuticeffectonUCandwhichisalleffectivetraditionalChinesemedicinegranulesoftreatmentonUC..JXLGhasthebeRereffectsontreatingUC.JXLGcouldimprovethebody'simmunityandstrengthencapacitytoregulatecolondisorders.Keywords:UCJXLGExperimentalResearchClinicalResearchVI中医学的UC辨证分型治疗⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.综述三久泻灵的立方依据、组方分析及组方药理研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.立方依据⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..组方分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯组方药理研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.参考文献一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l第二部分实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..l目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验一久泻灵颗粒剂的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验二JXLG对大鼠UC模型治疗机理的有关研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一、JXLG对大鼠UC模型结肠病变氧化损伤的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IXl材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯研究方法与观察指标⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献二⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯作者简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯攻读博士期间发表的论文(主笔)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。导师简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..独创性卢明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯附件一:缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯附件二:附彩图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Xr肃农、f芝人学届博十:学f::论文.‘.J‘刖吾人类肠道疾病中溃疡性结肠炎是以腹泻、粘液脓血便、腹痛、里急后重等主要症状为特点的慢性炎症性人类疾病。其结肠的粘膜表现为炎症或溃疡多累及直肠和乙状结肠并可向远端扩展延伸至降结肠或遍及整个结肠。近年来UC在我国呈上升趋势⋯病情轻重悬殊病程缓慢长久且有反复发作的特点长期不愈者易致癌变晗。UC为胃肠道最严重的疾病之一其病因、发病机制目前仍不明确一般认为与免疫、环境、感染及遗传等多种因素相互作用有关。研究认为UC发病与免疫反应的异常有关。各种生化介质包括细胞因子生长因子粘附分子一氧化氮等介导异常的免疫反应在UC发病中起着重要作用故已成为研究热点。迄今尚无治疗木病的特效药物临床对uC的治疗丰要是氨基水杨酸类药物和皮质类固醇等总体疗效较差复发率高。由于溃疡性结肠炎患者长期腹泻便血会继发营养不良造成肠道菌群失调继而脏腑功能紊乱:而且还会导致免疫功能低下造成生活质量下降甚至导致结肠组织有癌变倾向。临床大样本调查中医药治疗本病优势明显因此研制治疗本病的中药制剂是目前医学界的重大课题具有良好的市场开发前景和重大的社会、经济效益。针对目前中药治疗溃疡性结肠炎疾病的复方偏少且组方复杂药味较多的不足本课题组在分析溃疡性结肠炎病情迁延日久不愈的中医证型特点的基础之上提出脾肾阳虚为其基本病机虚实夹杂、久病入络为其病机演变特点。以中医传统经典方剂为基础充分结合现代药理学研究成果和长期临床实践科学配伍治疗溃疡性结肠炎疾病的复方制剂进一步利用现代制药工艺将其研制成纯中药颗粒剂。在既往完成JXLG的体外抑菌、抗疲劳作用、急性及长期毒性试验研究的基础上再次参照了徐淑云等造模方法并加以改进以结肠黏膜组织致敏法加乙酸局部刺激法复制成符合人类自然发牛的Uc的病变特点的实验模型。通过对组织生化检测、血清及组织匀浆炎性细胞因子等研究进一步探索了中医药对溃疡性结肠炎有关机理的研究。研究提示:JXLG降低Tuc大鼠结肠组织脂质过氧化产物MDA和结肠组织N含量下调NOS活性提高UC大鼠血清及粘膜匀浆IL竹肃农业火学届博f:学节论文降低UC大鼠血清及粘膜匀浆TNFa及IFNY抑Nuc大鼠结肠NFKB激活。本制剂进一步深入、全面研究将其为开发安全、有效、稳定、可控的中药复方制剂奠定了基础。同时本研究的开展对挖掘、整理、研究中医验方提高中医药的科技含量满足人民日益增长的健康需求必将产生巨大的经济效益和社会效益同时亦具有深远的科学意义和现实意义。肌病变、多发性口腔溃疡、虹膜睫状体炎及内分泌病证。本病在统计学方面有重要意义由于本病病程漫长其病情轻重不一常易反复发作。据统计本病欧美国家发病率较高患病率约占/万~/万发病率约占/万~./万。在国内目前尚未见精确统计但近年来似有增多趋势。患者主要集中于.岁之间岁之年龄段患者最多城市居住人口较农村居住人口比率高【。发病机制关于本病的发病机制迄今的研究结果表明主要与下列因素有关:.氧自由基氧自由基(oxygenfreeredicalOFR)是一类具有高度化学反应活性的含氧基团主要包括超氧自由基()、羟自由基(OH·)等。UC病因尚不明确对其发病机制的研究已渐渐集中于OFR的作用已有大量直接和间接的证据提示UC肠粘膜中OFR水平明显升高大量OFR对自身组织产生攻击作用充当或激活炎性介质使炎症进一步加重【】。有学者通过动物实验研究证明氧自由基是促进本病发生发展的重要因素而机体自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)、谷”肃农业人学屑博十学f节论文胱甘肽.过氧化物酶(GSH。Px)能显著减轻结肠粘膜炎症反应促进溃疡组织愈合保护肠粘膜【】。.一氧化氮研究表明:中性粒细胞及巨噬细胞可诱导一氧化氮合酶(nitricoxidesynthaseNOS)合成释放大量NO(nitricoxideNO)后介导细胞损伤肠道动脉充血及肠平滑肌功能失调【】。近来研究指出UC活动期病人结肠粘膜层NOS活性增强NO合成亦增多【。Middleton等‘发现UC活动期病人直肠灌洗液中亚硝酸盐(N‘)浓度增高病人直肠炎症粘膜中N。增多源于NO产生增多。NO在UC发病机制中的作用并未完全被确认但是可以确定NO在炎症过程中充当了双重角色【。.细胞免疫功能异常肠黏膜屏障功能的完整是维持肠黏膜正常功能的基础。黏膜屏障功能的缺陷有利于微生物抗原进入肠黏膜固有层诱发异常的黏膜免疫应答。效应T细胞的活化是肠黏膜免疫及其后续炎症的起点外周T细胞亚群中已明确CDT细胞是导致肠黏膜炎症的主要效应细胞因为到目前为止所研究的所有结肠炎模型中黏膜组织浸润中最主要的细胞类型即为CDT细胞。辅助性T细胞根据CD细胞分泌的两类不同细胞因子分为Thl$Th细胞Thl细胞丰要分泌IL一、IFNY、IL等而Th细胞丰要分泌IL、IL一、IL一、IL一等。IL在炎症性肠病组织中表达减少其中在溃疡性结肠炎中减少较明显。RogyMA等阴研究表明溃疡性结肠炎患者ILmRNA表达减少赵晓军等眵研究显示溃疡性结肠炎患者结肠黏膜培养上清液中IL含量较对照组明显降低。而溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中IFNY含量明显升高。IFN.Y能促进Th细胞分化为Thl细胞影响Thl/Th比率IFNY促进Thl分化主要通过两种途径:()通过阻止Th的分化而使Thl的分化占优势()在抗原的致敏过程中IFNY和IL直接调节Thl的分化阳。同时显示溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中IFNy/IL一明显高于正常对照提示促炎因子增高、抗炎因子减少、Thl/Th细胞平衡紊乱。Thl细胞主要介导与细胞和局部炎症有关的免疫应答参与细胞免疫而Th细胞的主要功能为刺激及细胞增生并产生抗体与体液免疫有关。机体应保持Thl/Th平衡才能使机体处于免疫平衡状态。溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中IFNY含量明显升高L明显减少”’肃农业人学屑博十学化论文IFNY/IL升高Thl/Th平衡失调效应CDT细胞极化为Th细胞介导的肠黏膜炎症疾病是溃疡性结肠炎的发病机制之一已得到学界认同。目前认为Thl细胞丰要介导细胞免疫其优势细胞因子主要是IFNYIFNY能促进T细胞向Thl极化而抑制IhlTh极化:Th细胞.丰要介导体液免疫其优势细胞因子是ILIL能促进T细胞向Th极化而抑制lt,JThl极化。已有证据表明:()在溃疡性结肠炎患者体内存在更多的自身抗体如抗中性粒细胞胞质抗体(pANCA)和抗原肌球蛋白抗体Th细胞能为B细胞活化并分化为浆细胞和产牛抗体提供更大的帮助()UC中增加的的自身抗体丰要为与Th相关的抗体类型如IgGl和IgG()EB病毒诱导的基因(EBl)编码的产物现在被鉴定为Th型细胞因子这种细胞因子在UC中增加n。因而研究者推测UC的发生可能是表达CDld的树突状细胞和上皮细胞递呈抗原给NKT细胞NKT细胞活化后分泌IL并开始溶解上皮细胞导致上皮细胞减少、溃疡以及上皮屏障出现裂口此后肠道微生物进入固有层以及IL一诱导趋化因子产生导致后续的更严重的炎症反应n¨。因而肠黏膜免疫调节紊乱导致炎症性肠病的发生过程是:肠道共牛的微生物抗原刺激肠黏膜T细胞CDT细胞在IL的作用下分化为Thl形成IFNYTNFa升高的Thl型黏膜炎症表现与Crohn病相似CDT细胞或非典型NKT细胞活化后分泌IL一ILIL形成Th型黏膜炎症表现为溃疡性结肠炎。而调节性T细胞ThTrl和CDCDT细胞通过分泌TGFB和ILIO等抑制肠黏膜免疫反应维持肠黏膜平衡(图)n羽。《葛藏毽NK一鹂兹缴活化《绥罐’h反应图l溃疡性结肠炎属于=Th型黏膜炎症的免疫学发病机制(引自王旭丹等¨)”肃农业人学属博十学位论文.炎性细胞因子表达异常细胞因子(cytokine)主要是指由机体免疫细胞和某些非免疫细胞合成分泌的一类具有广泛牛物活性的小分子多肽物质作为细胞间的信号传递分子在介导和调节免疫应答及炎症反应过程中发挥重要作用。在UC患者的结肠黏膜中可检测到大量淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞、中性粒细胞的存在这些免疫细胞可释放多种细胞因子。根据细胞因子的大体作用细胞因子常分为三类:促炎细胞因子、抗炎细胞因子以及牛长因子。促炎细胞因子包括白介素一(IL一)IL一IL~IL一IL一肿瘤坏死因子a(TNFa)TNFgIFN等其中多数细胞因子由Thl细胞、单核细胞以及巨噬细胞产生参与细胞的免疫反应介导炎症的发生发展。抗炎细胞因子包括IL一IL一ILIL一等主要由Th细胞产生主要参与B细胞的活化和体液免疫反应同时下调Thl细胞反应而具有抗炎作用。另一类生长因子包括了增殖刺激因子、转移生长因子(TGF)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子、成纤维细胞牛长因子等对不同的细胞具有生长调节和增殖作用。促炎细胞因子与抗炎细胞因子之间的平衡失调被视为UC的一个重要的发病机制n’。如果抗炎与促炎因子的平衡状态被破坏如促炎因子一方占优势则导致疾病的发生。现已证实细胞因子在局部炎症反应和免疫反应中起重要作用。IL、IL、IL一和TNF等促炎症细胞因子是公认的能介导uC发病的细胞因子。在活动性UC的病变部位ILIL一TNFa及其他细胞因子如IL一和MCP等均可增高且与病变活动性有关。ILlg是诱导炎症性肠病的肠道炎症的一种非常重要的细胞因子Stevensetaln报道了从UC患者结肠黏膜分离的单核巨噬细胞中产生大量的ILE在UC活动期明显升高Breeseetalu报道在UC活动期TNFa的水平在血浆及粪便中升高。IL一B还可通过自分泌或旁分泌刺激其他炎症递质女HIL、IL一和TNFa的产生TNFa则可使中性粒细胞聚集内皮细胞黏附分子上调以及增加上皮紧密连接的通透性和抑制上皮细胞的生长等。IL一丰要由单核巨噬细胞产生有广泛的促炎作用如促进B细胞活化、增生并最终分化为浆细胞增加免疫球蛋白合成并能促进T细胞增生、刺激毒性T细胞反应。有文献报道n:uC发生时IL一水平明显升高可与TNFa和IL一卜a相互作用导致UC活动期的特征性炎症反应。用免疫荧光技术可以在UC黏膜病变部位干f肃农业人学届博十学f节论文巨噬细胞的胞质中检测到IL阳性颗粒。活化的IL与UC的免疫反应和临床表现以及其他自身免疫性疾病有关。皮质类固醇激素在转录水平上能阻断IL和IL一的合成并且可以预防许多其他细胞因子的产生。皮质类固醇对IL及其他细胞因子的有效抑制作用也支持了细胞因子在UC免疫发病机制中的作用。IL一是一种主要由中性粒细胞产生的强有力的中性粒细胞趋化因子和活化因子在中性粒细胞介导的组织损伤中起重要作用对嗜碱性粒细胞和T细胞也有一定的趋化作用这些生物活性与UC发生密切相关。利用原位杂交技术可显示ILmRNA在UC活动期肠黏膜病变区域的表达明显增加特别是在溃疡底部黏膜表面的炎性渗出物内隐窝脓肿及瘘管的边缘以及与溃疡相邻的黏膜区域。目前认为TNFB、IL、IL诱发的炎症反应很大程度上是通过诱导以IL为代表的趋化因子的产生而实现的。关于UC发病中的促炎性细胞因子相关证据表明活动期UC患者病变黏膜组织及从中分离出的固有层单核细胞产生的IL明显增高。还有研究发现UC患者血清IL浓度明显升高与病变范围和病变严重程度成正相关而且活动期UC患者的病变黏膜IL的mRNA和蛋白表达较非病变黏膜、感染性肠道炎症对照组和正常对照明显升高并和炎症分级呈正相关。治疗后随着病情的缓解IL浓度下降说明IL在UC的发病中起重要作用并可用于监测疾病活动和治疗效果。IL是一种强有力的中性粒细胞趋化因子和活化因子n引有人发现IL可作为疗效检测的指标之一和UC复发的早期诊断指标晗。目前认为TNFa、IL一、IL诱发的炎症反应在很大程度上是通过诱导产生以IL为代表的趋化因子所介导的。诸多报道均显示TNFa分泌水平及其mRNA表达高于正常组或未受累结肠黏膜。动物实验和临床应用TNFa抗体能消除炎症愈合黏膜溃疡。体内存在一些具有抗炎、维持正常免疫功能的细胞因子即抗炎症细胞因子主要包括IL、IL一等船¨。IL主要由Th细胞产生。体外实验已经证明:IL一能抑制人类单核细胞产牛IL、TNFa以及单核细胞来源的超氧化物阴离子的形成并且IL还可以诱导IL受体拮抗剂(ILlra)的产生增高ILira/IL的比值从而抑制IL的促炎作用心引。抗炎性细胞因子ILiral一舵选择地拮抗IL一的致炎作用敲除小鼠ILlra基因能增加导致实验性结肠炎的敏感性。已经观察到炎症性肠病肠黏ILlra/IL比值明显低于正常对照组或其他炎症组补充lf.肃农业入学届博十学化论文ILlra可能有助于纠正炎症性肠病的免疫失衡。正常十二指肠黏膜的淋巴细胞比外周血淋巴细胞更能自发地分泌较多的IL一表明IL一对维持肠道免疫起重要作用。ILIO主要由单核巨噬细胞产生能抑制NK细胞、Thl细胞反应和巨噬细胞细胞因子的合成是一抗炎细胞因子。Schreiberetal瞳朝的研究显示ILIO可以在mRNA水平抑制UC周围血单核细胞和肠黏膜单核巨噬细胞分泌的ILIB及TNFB同时诱导IL受体的抗体(ILlreceptorantagonistILlrg)分泌提高ILlra/ILB的比值。用ILIO灌肠治疗例对非甾体类抗炎药耐药的炎症性肠病患者可以使其周围血单核细胞和肠黏膜单核巨噬细胞分泌的致炎因子水平明显下调。UC患者体内ILIO合成减少ILIO基因敲除的小鼠可自发结肠炎均显示ILIO在维持正常肠道黏膜免疫调节中发挥重要作用口。抗炎症细胞因子通过平衡促炎症细胞因子的作用而限制炎症在UC患者二者的平衡被打破从而促使炎症的发生。前已述及ILlB是诱导炎症性肠病的肠道炎症的一种非常重要的细胞因子。非常有趣的是单核细胞同时也可以产生一种抑制分子ILlrEILIrE可以有效的阻断ILlf§与其受体结合。早在在上世纪末发现在免疫复合物诱导的家兔肠炎中IL是一种早期调控因子且用ILIrE预处理可以减轻模型炎症的扩大。许多研究资料表明IL的合成与IL受体拮抗剂IL一rB之间的平衡决定IL一对炎症过程的促进作用IL/ILlrg的比值与疾病的临床严重程度密切相关瞳。最有意义的是抗TNF单克隆抗体己用于难治性CD的治疗并取得一定的疗效心。说明某些细胞因子对黏膜炎症起关键性作用调节细胞因子之间的平衡能控制炎症的发展。相关研究表明抗炎症细胞因子还能抑制ILlgILIL等致炎因子的分泌及表达并诱导ILla的生成增高IL一/ILlra的比值。ILIO贝I具有明显的抗炎作用已有研究表明敲除小鼠IL一基因能导致实验型结肠炎而用IL一滋肠治疗UC患者能明显改善肠道黏膜炎症㈨。IL能下调产牛炎症介质如TNFa、IL减轻炎症时的自身损伤并促进修复。丁晓刚等汹采用三硝基苯磺酸法制备大鼠实验性溃疡性结肠炎模型发现IL对维持肠道免疫起重要作用。细胞因子的释放受NFKB的调控已被越来越多的研究所证实。UC患者中IL一mRNA和ILmRNA的表达与NFKB的活化呈显著正相关即为有力的佐证同时”肃农业大学届博十学节论义NFKB表达水平与TNFa和ICAM水平也显著相关瞳’引。国外实验和研究表明NFKB在UC中呈现过度激活状态并导致细胞因子及黏附分子等过度和持续表达放大炎症反应m。NFKB通过与肩动子或增强子部位eB位点发牛特异性结合并促进其相关基因转录参与调节多种炎症和免疫基因的表达促进其细胞因子的释放释放的细胞因子又可反过来进一步活化NFKB由此形成一个正反馈调节使炎症不断扩大。NFKB是肠道黏膜感染的标志它的水平高低可反映疾病严重程度也可作为治疗效果的评估呤卜。许多研究已证实溃疡性结肠炎患者肠黏膜NFKB含有P这一重要的亚单位它在调控靶基因的转录中起着关键性的作用m’。另外最近的研究表明除Thl和Th以外Th和Trl细胞在免疫调节过程中也起十分重要的作用。综上所述在UC患者中促炎因子水平的异常升高抗炎因子水平的异常降低引起体内免疫反应过强持续时间过长是UC发病的一个重要因素。总之UC的促炎症性细胞因子大多增高它们既可使大量的T细胞尤其是CDT细胞迅速分裂增殖形成致敏淋巴细胞又可活化粒细胞增强NK细胞及LAK细胞杀伤力从而增进炎症反应。TH类细胞因子特别是IL能显著抑制促炎症性细胞因子包括ILlb、IL、IL及TNFa抑制淋巴细胞及巨噬细胞的增殖及迁移。.自身免疫功能异常自身免疫异常目前已被普遍认为是UC的病因之一。UC患者常伴发诸如自身免疫性溶血性贫血、结节性红斑、眼色素层炎、虹膜炎、系统性红班狼疮等免疫性疾病。自从年Borbeger和Rerlmarn报告在UC病人血清中发现抗结肠上皮细胞抗体以来阳至今已发现在UC患者血清中存在非特异性的抗结肠粘膜抗体抗大肠埃希菌型的抗体能与结肠上皮抗原发生交叉反应而发生体液免疫紊乱。年Saxon等m发现UC病人血清中存在抗中性粒细胞浆抗体(antineutrophilantibodyANCA)可导致结肠粘膜血管炎症发牛毛细血管壁增厚局灶节段性坏死、增殖、硬化及微血栓形成间质均有炎症性变化。蒋维国∞将UC患者和正常对照外周血T淋巴细胞亚群作对照试验结果表明UC患者外周血T淋巴细胞亚群除CD显著低于正常对照外CD、CD、CD/CD明显高于正常对照一般认为CD的降低及CD、CD/cD的增加可使B淋巴细胞分泌活跃使体液免疫亢进从而导致免疫复合物的形成进而激活补体系统可造成患者肠道粘膜lf肃农业大学届博十’Zf节论文充血、水肿、溃疡。学者认为细胞免疫异常在UC的发病中可能起重要作用。张林等m试验结果显示uc存在着免疫调节失衡可能为Y.T细胞的免疫监视减弱引起机体对外来抗原的免疫反应所致亦或UC的T细胞功能异常所致。.遗传因素流行病学调查结果显示UC病例具有家族聚集性。经研究发现UC病人的一级亲属同患该病的危险性是一般人群的倍提示遗传因素在UC的发病中具有病因学的作用。uc可能存在多基因、多环节的遗传背景它除结肠上皮HLADR在uC中异常表达外细胞因子诸如ILla、ILlf及TNF都可能与遗传有关联旧引这属于遗传多态现象(即存在两种或两种以上的基因型现象)另外近年来国内外有关UC的家族发病报道很多。.感染因素因为uC炎症表现与一些感染性结肠炎例如细菌性痢疾阿米巴痢疾等十分相似认为UC可能也与感染有关。然而至今还没有发现与该病有明确关系的致病微生物。目前认为感染至多为继发性或只是本病的诱发因素。Risberg等H伽认为肠菌的组成或活性改变可能使肠粘膜更容易受到损伤。年黄永年等⋯报道以正常大肠埃希菌为抗原免疫刺激大鼠次可造成UC模型在模型鼠可以看到便潜血阳性循环免疫复合物增高淋巴细胞转化率下降结肠壁上有溃疡形成结果提示肠道菌群紊乱可引起UC。.神经内分泌肽UC也存在着一些神经内分泌肽类物质的紊乱在其发病机制中发挥着作用。Watanabe等在研究炎症性肠病结肠粘膜下含生长抑(somatostatinSS)的内分泌细胞总数时发现:Uc和克隆病病人的结肠粘膜一粘膜下含SS的细胞数与对照组相比明显减少而且在UC病人中其炎症程度越重SS细胞数就越少Kimura等H报道在UC病人的结肠炎症部位血管活性肽(VasoactiveintestinalpeptidVIP)神经元明显减少即使在UC的炎症缓解期VIP神经仍很少。P物质存在于结肠粘膜内可改变肠道免疫、血管及运动功能UC患者粘膜内P物质水平显著增高它的浓度与炎症程度呈正相关H羽。.其他研究证明精神因素为UC的诱发因素。由于大脑皮质机能紊乱皮层下中枢lOlf.肃农业人学届博十学位论文兴奋通过植物神经而产生结肠运动亢进肠血管和平滑肌痉挛组织细胞缺血抵抗力下降毛细血管通透性增加导致肠粘膜炎症、糜烂、溃疡出血。多年研究表明UC的发牛还与胃肠道上皮细胞结构功能异常尤其是粘液糖蛋白的性质发生改变有关这使肠粘膜更易受感染更易受毒素和自身免疫反应的攻击。有学者报道体外血栓和血栓弹力图等检测结果表明UC患者存在血液高凝状态并与结肠炎症损伤程度成正比炎和促血栓作用增强也有报道血小板在UC黏膜损伤中起重要作用血小板活化后释放出多种炎性介质如血小板活化因子、转化生长因子、氧自由基等促使其他炎症细胞聚集、趋化或者通过调节其他炎性细胞活性参与UC肠黏膜的炎症发应n引。相关证据表明细胞粘附分子与溃疡性结肠炎有密切关系。溃疡性结肠炎为肠道炎症性疾病白细胞浸润到肠壁是其明确标志。粘附分子在炎症细胞的浸润、肠组织炎症形成中起着重要作用。其中选择素介导白细胞与血管内皮细胞间的微弱粘附并可诱导内皮细胞上的其它粘附分子女flCD、CD等表达而CD、CD等与白细胞相应受体结合从而使白细胞与内皮细胞互为配体一受体的其它粘附分子相互结合导致白细胞与内皮细胞的稳定粘附而免疫球蛋白超家族成员PECAM则介导白细胞穿过内皮细胞向炎症部位移行从而引起和增强粘膜局部炎症。研究表明H。抗ICAM抗体能有效地抑制白细胞与上皮细胞的粘附从而减轻炎症程度用于治疗炎症性肠病的糖皮质激素和一氨基水杨酸的作用机制即部分与细胞粘附分子的合成与功能有关。UC的西医治疗由于UC发病原因复杂西医尚未有针对性的特殊治疗。UC发病机制的个丰要方面都可作为治疗的着眼点但研究最多的还是免疫反应异常。针对其中一、二个环节如细胞因子网络中的关键或祸首因子、粘膜屏障功能以及腔内抗原成分予以治疗有可能阻止免疫反应性损伤从而控制炎症维持缓解。Watkinson提出本病治疗的原则有三:①确定初发抑或复发以尽早控制发作②维持缓解预防复发③评价内科治疗的效果确定内外科治疗的界限防治并发症。此外应掌握分级、分期、分段治疗的原则即确定疾病严重度按轻、中、重不同程度采用不同的药物及治疗方法。活动期以控制症状为主要目标缓解期则应继续控制发作预防复发。应使用CDAI确定病期和评价疗效根据病变范围选择不同什肃农业人学届博十学化论文药物和治疗方法。多采用抗生素、免疫抑制剂、激素以及手术等多种治疗方法但效果均不满意并且副作用较多。溃疡性结肠炎的药物治疗进展如同其它疾病一样最佳的治疗无疑是针对病因的治疗如其不能根据发病机制的重要环节予以阻断亦属较为理想方法。.主要常用药物抗生素:SASP又名水杨酸偶氮磺胺吡啶作为治疗轻中型溃疡性结肠炎的首选药有效率为左右已经有超过年的临床应用历史但有%的患者对SASP不能耐受或者有过敏反应。研究证实柳氮磺胺吡啶经口服后在结肠内被细菌作用分解成为两个部分一部分是美沙拉嗪(治疗肠道炎症性疾病的有效成分旧称一氨基水杨酸)另一部分是磺胺吡啶(用以起到将美沙拉嗪运载至结肠的作用)。前者是丰要有效成分能抑制黄嘌呤氧化酶或白细胞介导的氧自由基形成能消除炎症。而服用柳氮磺胺吡啶所引起的副作用主要是由磺胺毗啶这部分造成的可引起恶心呕吐、厌食、消化不良、头痛、精子减少等副作用及变态反应(如皮疹、肝毒性、支气管痉挛、粒细胞缺乏、再牛障碍性贫血)。免疫抑SJJ齐U:硫唑嘌呤或一巯基嘌呤治疗溃疡性结肠炎的机理是在体内产生硫嘌呤而发挥免疫抑制作用抑制蛋白质的合成和淋巴细胞的增殖减轻免疫介导的炎性反应。主要应用于溃疡性结肠炎慢性反复发作者其有效率为一%有一定毒性可引起骨髓抑制、白细胞减少、粒细胞减少等副作用有恶心、呕吐、少数有肝脏毒性甚至有致畸危险。皮质类固醇类药:已证实该类药对活动性溃疡性结肠炎有效治疗各种类型的活动期溃疡性结肠炎均可选用皮质激素治疗对重症和暴发型病例应作为首选但往往易引起情绪改变、满月脸、踝部水肿和高血压加重等副作用故而不易作长期维持治疗。.新的治疗方法目前本病尚无根治疗法主要是采用类固醇激素及水杨酸类制剂控制炎症为治疗目标。但是近年来随着免疫学及分子生物学的发展加之对本病的认识不断深化以及对药物作用机制的深入了解相继有新的治疗方法问世。针对上述发病机制中的重要因素及其环节开发出了新的治疗战略和方法。展望lr肃农业人学屑博十学f口论文近年来治疗溃疡性结肠炎的药物发展较快特别是’一氨基水杨酸(美沙拉嗪)的应用基本上将取代偶氮水杨酰磺胺吡啶副作用仁LSASP少但两者之间有交叉变态反应。结肠炎的西医学研究概况是有效发挥抗炎作用的关键因而有多种局部治疗剂、如灌肠剂、泡沫剂、栓剂及凝胶剂的问世可分别用于左半结肠炎、直乙结肠炎及直肠炎。晚近研制的各种分子量大、局部浓度高、吸收后经肝脏首过清除迅速的药物如间苯磺酸泼尼松龙及布地奈德在欧洲早己投放市场。后者与激素受体结合能力较泼尼松龙强倍抗炎作用强、口服后%首经肝脏迅速而完全代谢因此全身性作用极小。结肠给药可直接经门脉至肝脏清除。避免了全身副作用加之局部活性较全身为高特别适用于UC。重症病例在静脉用药过渡至口服口服过渡到氨基水杨酸类药物时均宜有一段重叠时间、以防疾病

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