下载
加入VIP
  • 专属下载特权
  • 现金文档折扣购买
  • VIP免费专区
  • 千万文档免费下载

上传资料

关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 湿热灭菌工艺的微生物学验证

湿热灭菌工艺的微生物学验证.pdf

湿热灭菌工艺的微生物学验证

tiansheng2888
2011-09-17 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《湿热灭菌工艺的微生物学验证pdf》,可适用于自然科学领域

PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply湿热灭菌工艺的微生物学验证王彦忠PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply内容介绍:法规对无菌制剂湿热灭菌工艺验证的要求微生物灭菌的专业知识湿热灭菌工艺微生物学验证的方法PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply一、法规对无菌制剂湿热灭菌工艺验证的要求PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply版GMP(欧盟GMP):第一条无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药包括无菌制剂及无菌原料药。第二章原则第三条无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求应当最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验(包括无菌检查)。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply版GMP(欧盟GMP):第四条无菌药品按生产工艺可分为两类:采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。第十二章灭菌方法第七十条热力灭菌通常有湿热灭菌和干热灭菌应当符合以下要求:(一)在验证和生产过程中用于监测或记录的温度探头与用于控制的温度探头应当分别设置设置的位置应当通过验证确定。每次灭菌均应记录灭菌过程的时间温度曲线。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply版GMP(欧盟GMP):采用自控和监测系统的应当经过验证保证符合关键工艺的要求。自控和监测系统应当能够记录系统以及工艺运行过程中出现的故障并有操作人员监控。应当定期将独立的温度显示器的读数与灭菌过程中记录获得的图谱进行对照。(二)可使用化学或生物指示剂监控灭菌工艺但不得替代物理测试。(三)应当监测每种装载方式所需升温时间且从所有被灭菌产品或物品达到设定的灭菌温度后开始计算灭菌时间。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply版GMP(欧盟GMP):(四)应当有措施防止已灭菌产品或物品在冷却过程中被污染。除非能证明生产过程中可剔除任何渗漏的产品或物品任何与产品或物品相接触的冷却用介质(液体或气体)应当经过灭菌或除菌处理。第七十一条湿热灭菌应当符合以下要求:(一)湿热灭菌工艺监测的参数应当包括灭菌时间、温度或压力。腔室底部装有排水口的灭菌柜必要时应当测定并记录该点在灭菌全过程中的温度数据。灭菌工艺中包括抽真空操作的应当定期对腔室作检漏测试。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply版GMP(欧盟GMP):(二)除已密封的产品外被灭菌物品应当用合适的材料适当包扎所用材料及包扎方式应当有利于空气排放、蒸汽穿透并在灭菌后能防止污染。在规定的温度和时间内被灭菌物品所有部位均应与灭菌介质充分接触。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply二、微生物灭菌的专业知识PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply“无菌”从定义上来说是一个绝对的概念但遗憾的是在科学和技术高度发展的今天药品的绝对无菌是做不到的也无法加以证实。然而无菌制剂的安全性要求人们设定无菌的相对标准。FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品“无菌”的相对标准它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为(即产品的无菌保证值为)系同一标准的不同表示法。这一标准于起收录于USP中如今已为世界各国普遍接受和采用。Page无菌检查基本定义:检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、以及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。符合无菌检查法的规定仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。无菌检查法是建立在批产品受微生物污染是均匀的假设上。即使该批产品的污染非常均匀检出低污染的概率也是极低的。因此无菌检查存在风险和局限性。应尽量抽取批产品生产开始、结束或生产过程出现异常情况下的产品进行检查。ReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupplyPage药品生产中的污染来源人员在级洁净区或万级背景下的局部级洁净区。人是无菌药品生产中的主要污染源即使在管理比较到位生产设备自动化程度较好操作人员素质较高的企业人员操作所致的污染率也超过。水源性微生物绝大多数为革兰氏阴性菌不会形成芽孢不耐热。其代谢产物及细胞的尸体及碎片均属细胞内毒素的污染源空气中的微生物基本为革兰氏阳性菌有可能会形成芽孢使其耐热性增大。ReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupplyPage无菌检查的局限性无菌的定义理论上:无菌=没有任何活的微生物实际上:我们无法证明产品中没有活微生物存在。无法对整批产品进行检验无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断。无菌检验用培养基有其局限性对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长”培养条件(如温度和时间)是有限的我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态。ReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupplyPageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply无菌保证工艺:无菌保证工艺即:使产品达到规定的无菌保证水平的工艺过程。无菌保证工艺可分为两大类:最终灭菌工艺(terminalsterilizationprocess)和非最终菌生产工艺(asepticprocessing)。最终灭菌工艺系指将完成最终密封的产品进行灭菌以杀灭产品中的微生物的工艺。由此生产的无菌制剂称为最终灭菌无菌药品。我国和国际主要药典规定通过最终灭菌使这类药品中污染的微生物残存概率下降致不高于的水平以SAL≤表示。应通过灭菌工艺验证确认已灭菌产品的无菌保证水平。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply无菌保证工艺(续):非最终灭菌工艺系指在无菌环境条件下通过无菌操作生产无菌产品的方法。具体就是将组成药品的原料和包装材料分别灭菌或经除菌处理在无菌条件下将其组装成成品的工艺。经该工艺生产的无菌制剂称为非最终灭菌的无菌药品。世界卫生组织、欧盟以及美国FDA等对非最终灭菌的无菌药品的无菌保证水平分别作出了规定。目前WHO、欧盟和我国送审稿GMP执行的标准是可信限下微生物残存概率不超过大致相当于瓶产品中不得有瓶染菌的水平。美国FDA的标准要求更为严格通俗的表达为瓶产品中不得有1瓶染菌。必须通过培养基灌装模拟试验来验证生产工艺能达到上述标准。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理:()微生物死亡动力学将微生物杀灭的灭菌法的基本原理都是使细胞内的蛋白质或核酸发生不可逆的凝固或破坏使微生物死亡。因此各种灭菌方法使微生物死亡的速度都符合一级动力学方程。以湿热灭菌为例在特定灭菌温度下某种微生物孢子的死亡速度仅与这个时刻孢子的浓度有关。用数学模型可表示为lgN=lgNktN产品内微生物的残存数N灭菌开始时产品内微生物数t累计灭菌时间k常数与微生物耐热性、灭菌温度相关PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):()微生物的耐热参数微生物的耐热参数简称D值是指在特定灭菌条件下使微生物数量下降一个对数单位或杀灭%所需的时间(分钟)。对湿热灭菌工艺而言特定灭菌条件即指灭菌温度。对于某些孢子如嗜热脂肪芽孢杆菌在生理盐水中℃的湿热灭菌条件下D值超过分钟。微生物孢子的D值与孢子存在的环境密切相关。由于微生物变异的概率较高同一种孢子的不同来源菌株和制备批次其D值有可能不同。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):()灭菌率灭菌率L是表示不同灭菌温度所对应的灭菌效果的重要函数。灭菌温度为T℃时的灭菌效果与℃下同样灭菌时间的灭菌效果可通过以下公式进行换算:灭菌率L=(T)Z下表给出了湿热灭菌中以℃为标准灭菌时间Z=℃时不同温度下的灭菌率。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):如表所示以℃为标准灭菌率定为时℃下的灭菌率为即℃下同样灭菌时间的灭菌效果仅为℃时的。相应的℃灭菌分钟对微生物的杀灭效果相当于在℃下灭菌分钟的杀灭效果当以流通蒸汽(℃)灭菌时若要达到同样杀灭效果则需要灭菌分钟!PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):()标准灭菌时间标准灭菌时间即F值是指在℃下的灭菌时间。它的意义在于将不同灭菌温度下的灭菌工艺按照灭菌效果等效的原则换算为℃下灭菌所需要的时间。F=L×tF标准灭菌时间L特定灭菌温度下的灭菌率t灭菌时间。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):如℃下灭菌分钟的F值计算:℃的灭菌率为F=×=分钟即℃下灭菌分钟相当于℃下灭菌分钟。F值是衡量、区分无菌保证工艺属于最终灭菌工艺还是非最终灭菌工艺的重要指标。美国FDA和欧盟习惯上都将灭菌F0值是否≥分钟视为区别最终灭菌工艺和非最终灭菌生产工艺的标志。更准确地区分最终灭菌无菌药品和非最终灭菌无菌药品的标准是看该产品的无菌保证水平是否达到≤。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):()无菌保证水平了解了微生物死亡动力学和灭菌工艺的基本概念后就可以通过计算得到某批产品的无菌保证水平。lgSAL=lgNFD我国和国际主要药典规定最终灭菌工艺生产的药品的SAL≤。残存微生物的概率越低无菌保证的风险越低。无菌保证水平与标准灭菌时间(F)灭菌开始时产品中的污染微生物总数(N)和污染微生物的耐热参数(D)密切相关。该公式是确定灭菌工艺的最重要的理论基础PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):假定灭菌开始时产品中的污染微生物总数(N)为cfu瓶污染微生物的耐热参数(D)为分钟要达到无菌保证值不小于的标准灭菌F值至少应达到:F=(lgNlgSAL)×D=(lg)×=分钟也说是需在℃下灭菌分钟。同样的产品如果要在℃下灭菌则相应的灭菌时间应为:t=FL==分钟。即需在℃下灭菌分钟才能达到药典规定的SAL≤的标准。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):若某复方氨基酸注射液采用℃分钟的灭菌程序起始污染微生物仍为cfu瓶D值为分钟则lgSAL=lgNFD=lgL×tD=×=SAL==,即残存微生物的概率为。美国药典根据灭菌工艺提供的F值最终灭菌工艺进一步分为残存概率灭菌和过度杀灭灭菌工艺。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):残存概率灭菌工艺美国药典定义的残存概率灭菌工艺指F值≥分钟但﹤分钟的湿热灭菌程序。适用于热稳定性不很好的产品如复方氨基酸注射液、脂肪乳注射液、葡萄糖注射液和含维生素等的小容量注射液。对残存概率灭菌工艺而言产品灭菌前污染微生物量(bioburden)及污染微生物的耐热性是确定灭菌工艺是否提供足够无菌保证水平的关键因素。因此生产工艺过程应当将避免产品被耐热菌污染放在首位而不是仅依赖最终灭菌过程杀死污染微生物。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):同时残存概率灭菌工艺对灭菌设备的热分布均匀性要求较高对灭菌程序工艺参数控制的准确度也要求较高需要对灭菌过程作精确的控制。总之残存概率灭菌工艺应从灭菌前微生物污染控制和灭菌过程控制两方面入手使得在灭菌F值较低的情况下也能确保达到药典规定的无菌保证水平。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌的基本原理(续):过度杀灭灭菌工艺过度杀灭工艺是指F值≥分钟的灭菌工艺。热稳定性很好的产品如生理盐水以及包装材料和生产设备等的灭菌通常采用过度杀灭工艺。采用过度杀灭灭菌工艺时即使不考虑产品灭菌前的污染状况也能保证无菌保证水平≤。而且灭菌程序参数的宽容度相对较大对灭菌设备的热分布及灭菌过程控制精确度相对于残存概率灭菌工艺的要求较低。当然这并不意味着生产过程中对污染可以完全不加控制。从控制细菌内毒素污染的角度也应当遵循工艺卫生规范控制产品的微生物污染。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌方法的选择:无菌保证工艺选择的原则是:应优先选择无菌保证水平高的最终灭菌工艺只有在经充分的工艺研究证明产品无法耐受各种最终灭菌工艺而且临床确实需要该注射剂的前提下才能选择非最终灭菌工艺。欧盟“欧洲药品评价局(EMEA)”在其规范性文件“选择灭菌方法决策树中将水溶性药品无菌保证工艺分为:)灭菌条件为℃分钟的湿热灭菌工艺)灭菌F值≥8分钟SAL≤的湿热灭菌工艺)采用微生物截留过滤器的除菌过滤工艺)需要采用无菌原料和预先灭菌的包装材料进行无菌配制和灌装的工艺。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply灭菌方法的选择:能否采用℃分钟湿热灭菌能否采用F≥的湿热灭菌以达到SAL≤℃分钟湿热灭菌能否对药液除菌过滤否是采用F≥的湿热灭菌以达到SAL≤无菌原料无菌配制无菌灌封否否药液除菌过滤及无菌灌封是是PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply三、湿热灭菌工艺微生物学验证的方法PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply工艺验证的目的:一般理化项目如含量、pH、相对密度等均可以用数值表述其变化通常是连续的过程即可以从少量样品的结果可靠地推测出整体的结果。与理化检验相对应的无菌检查其结果只有阳性或阴性两种状态因此从少量样品的结果推测整体的结果存在很大的限制即基于抽样检验的无菌检查存在明显的局限性。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply湿热灭菌工艺验证的前提:在进行湿热灭菌工艺验证前必须满足下列条件:设备的安装确认、运行确认和性能确认已经完成相关的SOP已经生效关键工艺参数、关键质量属性和关键工艺步骤已经批准相关批记录已经生效设备的空载、满载热分布已经成功完成冷点已经确定。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply湿热灭菌工艺验证的前提(续):真空泄漏和保压测试已经成功完成湿热灭菌程序和参数已经确定相关仪表的校验已经完成。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容:)最大和最小装载条件下的热穿透试验应根据满载热分布试验的结果制定热穿透试验方案。热穿透试验的目的是获取不同位置的产品在灭菌过程中实际达到的温度和F值从而了解不同位置的产品之间以及与日常生产运行时灭菌设备记录的温度和F值之间的差异。应至少进行最大和最小装载条件下的热穿透试验。有多种装量规格的产品时应至少分别进行最小和最大装量规格产品的热穿透试验。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):应科学合理地制定热穿透试验计划以获取足够的数据判断不同位置的产品的热穿透结果是否存在显著性差异。一个灭菌工艺的热穿透试验应至少连续运行三次灭菌程序以证明其重现性。通常若满载热分布试验中发现有冷点或热点应重点采集该位置的热穿透数据。试验方案应详细说明验证使用的温度传感器的数量及其分布方式、装载的形式、试验采用真实产品还是模拟产品各项试验运行灭菌程序的次数。如果使用模拟产品应有数据证明模拟产品和真实产品间没有热穿透差异。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):热穿透试验F值的平均值加减倍F值的标准偏差应在该产品灭菌工艺F值的允许范围内。例如≤F平均STD≤F平均STD≤分钟。使用同型号的多台灭菌设备时如果安装确认、运行确认、空载热分布的试验和满载热分布试验表明多台灭菌设备间没有显著性差异则可以合理减少每台灭菌设备的试验次数。应通过风险分析说明减少试验次数的合理性。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):)微生物挑战试验通过微生物挑战试验应能证明拟定的灭菌工艺参数允许的最差灭菌条件下通过该灭菌工艺能将符合预定的灭菌前污染微生物数量和耐热性限度的产品中的微生物杀灭至存活概率不超过百万分之一。对于最低灭菌F值不小于分钟的灭菌工艺(即过度杀灭灭菌工艺)且已通过热穿透试验证明其最低F值可不进行微生物挑战试验。对于最低灭菌F值小于分钟的灭菌工艺(即残存概率灭菌工艺)应进行微生物挑战试验。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):生物指示剂可通过采购或自行制备适宜的生物指示剂。详见中国药典版二部附录XVII灭菌法的相关章节。通常将生物指示剂定量加入到产品中进行微生物挑战试验。常用微生物:过杀:嗜热脂肪芽孢杆菌生物负载:从环境和工艺分离的指示剂如大肠杆菌。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):生物指示剂类型:孢子条孢子混悬液(混悬介质中的)。生物指示剂的放置位置:含生物指示剂的产品应集中放置在热穿透试验发现的冷点处。若无明显冷点则均匀放置。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):试验方案应根据热穿透试验的结果设计试验方案。若热穿透试验证明不同位置的产品间、不同装载量间、不同装量规格间的热穿透特性有显著差异应至少选择灭菌F值最低的位置、装载量和装量规格(即最差条件)进行微生物挑战试验。微生物挑战试验的形式通常为将生物指示剂定量加入产品中制备成带有确定数量微生物孢子的受试产品将产品安放在灭菌设备内的特定位置以尽可能低的灭菌参数(接近拟定的灭菌参数的低限)运行灭菌程序对受试产品进行无菌检查通过计算确定受一定程度微生物污染的产品经灭菌后微生物的残存概率。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):微生物挑战试验的重要参数有:生物指示剂在受试产品中的D值以Di表示。生物指示剂在每瓶受试产品中的接种数量以Ni表示。正常生产时产品中污染微生物的数量限度以N表示。正常生产时产品中污染微生物的耐热性限度以D表示。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply通常验证方案包括以下内容(续):根据“阴性分数法”的理论每次试验安置瓶接种生物指示剂的受试产品时每瓶产品微生物孢子的接种量为:Ni=Do(lgNo)Di若经过灭菌后所有受试产品无菌检查均为阴性则证明该灭菌工艺能将灭菌前每瓶污染有微生物数N且其耐热性不超过D的微生物杀灭保证产品中微生物存活概率不超过一百万分之一。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply湿热灭菌工艺验证报告:通常包括以下内容:所参考的湿热灭菌工艺验证方案报告的编号运行参数的总结对所测得的试验结果的总结验证过程中的偏差和变更结论。PageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupplyPageReportedbyWangYanzhongGlobalManufacturingandSupply谢谢

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

文档小程序码

使用微信“扫一扫”扫码寻找文档

1

打开微信

2

扫描小程序码

3

发布寻找信息

4

等待寻找结果

我知道了
评分:

/46

湿热灭菌工艺的微生物学验证

VIP

在线
客服

免费
邮箱

爱问共享资料服务号

扫描关注领取更多福利