钠急性染毒对小鼠免疫细胞损伤影响

中国公共卫生2007年5月第23卷第5期 〔北加JP汕刃址月.lth 为肠，2口习7今乞1.23 从，.5 597 文章编号:10()l一058()I2(X)7，05一0597一03 中图分类号:R139+.3 文献标志码:A 【实验研究] 五氯酚钠急性染毒对小鼠免疫细胞损伤影响 魏雪涛，尚兰琴，蒋建军，杨晓华，张宝旭 摘 要:目的 观察五抓酚钠对小鼠细胞免疫、体液免疫和巨噬细胞功能的毒性作用。方法 将五氯酚钠以25， 50和100m以掩经灌胃方式一次给予小鼠，然后观察给药后3，24和48h小鼠各项免疫功能的变化，采用T淋巴细胞 增殖法测定细胞免疫功能，采用B淋巴细胞增殖法测定体液免疫功能，采用巨噬细胞吞噬能力和分泌NO的能力来测 定巨噬细胞功能。结果 loom以掩五氯酚钠染毒后3h，小鼠的脾脏和胸腺相对重量较对照组降低，脾脏B淋巴细 胞的增殖能力受到抑制，腹腔巨噬细胞的吞噬功能和NO生成能力受到抑制。25和50m以kg五氛酚钠在染毒后24h 依然对脾细胞中B做巴细胞增殖能力产生抑制作用。这种抑制效应到48h时完全消失。结论 五氧酚钠一次染毒 在25一loomg/掩剂量范围内对小鼠体液免疫和细胞免疫功能产生抑制作用，loom以kg对巨噬细胞功能产生抑制 作用，对细胞免疫功能未见影响。 关键词:五抓酚钠;体液免疫;巨噬细胞功能 Effl沈tofPentachloroPhenols回ium onacuted田.鳍eorsplenocyteduringacuteex脚活眼 肠卫了Xu卜tao，SHANG加凡- 乒nJ州小心加”一“n，etal.环和rt二 tof于欢icol哪沙，月触之lth&ienceC价砚ter，矛城ingUni二 ity(及ijing loo083，以ina) A城，d:ObjectiveTo observetheelfectofp吧ntachio功phenol拟liumon cellularimmunity，humo旧 immunityand macrophagefonctionof而ce.Meth记s Pentac喻rophenol 汉沮iumwas gavag己tomiceoncetime andthed哪gesofpen- 切c扮沉叩hend歇刁ium were 25，50and100mg/吨.ThechangesofimmumefonctionwereobseIv 曰at3，24and48hoursaf- terpentachlo娜henol，xlium treatment，及Uularimm unitywasmeaSuredthroughTlymphocytep功liferation;humo月日immu- 垃tywas measuredthroughBI卿phocyteproliferation;Macrophagefunctionwasmeasu redth拍昭hphagocyticfunctlonand Nopr以luction.Results 10m以吨详ntac油rophenol岌泪iumcou1ddecrease theweightandrelativewdghtof印leenand tb帅uswhencom paredwithcontro1miceat3bo帅 aftertreatment.AtthesametimeBI”11phocyteproliferation，phagocytic function andN0p找泪uctionwere alsodecr以曰泪.25and50mg/吨pentachloophenol剐x」iumr曰uc司theBlyrnphocyte pro- liferationnot。司yatthebo帅 aftertreatmentbutalsothe24ho此 aftertreatment.Ai 48 hours aftertreatTnentthere were nodifferenceah川tallre】atedindex比wee np吧ntaclllo拍phenol汉xliumtreatedmiceandcontrDlmice.Conclusion 25tol00 mg/kgpentac拟orophenOI初ium co咖inhibitthehumoralimmu垃tyandioomg/吨匀』dinhibitthemacronha，functinn afteroncetreatment.Whereas thecell山rimmunitywas notinfluenc已bycurren ttreatrnent. Keywords:p吧ntacHorophenol成刁itnn ;humoralimm unlty;Inacrophagefonction 五氯酚钠(又称灭钉螺药，PCP一Na)是在世界范围被广 泛使用的一种农药，由于大面积推广，引起了一定的环境污 染，对人类健康造成影响tl.2〕。肠ng等[s1利用人淋巴细胞在 体外接触五氯酚研究中发现，无论工业品还是分析纯五氯酚 在10一40脚心L浓度下与淋巴细胞共同孵育sd，对于1如 和坛M抗体的产生量均有明显的抑制作用。Da‘日等闭在人 群研究中发现，血液中五氯酚浓度的升高能够导致T细胞功 能障碍。体外研究表明，sm以L以上的五抓酚能够抑制克鲤 鱼和港湾鱼的巨噬细胞和嗜酸性细胞杀菌活性阎。目前的研 究基本上以五氯酚为主，尽管五氛酚钠与五氛酚的代谢途径 类似，但其毒性表现是否一致仍需要进一步探索。本研究采 用五氯酚钠一次性染毒小鼠，观察染毒后不同时间小鼠免疫 功能的变化。 1 材料与方法 1。1 实脸动物 清洁级ICR雌性小鼠巧0只(北京大学医 学部实验运动科学部);体重20一249，雌性，动物合格证号: SCXK(京)2002一0001。动物饲养室温，20一25℃，动物进食 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 基础饲料，自由饮用自来水。 1.2 主妥试荆 五抓酚钠(国产，分析纯，傲刁lum pen- tac日。功phenate);四甲荃偶氮唾哇蓝(MTT)，刀豆蛋白A (C劝nA)，脂多糖(LPS，美国51印rna公司);RPMll640完全培 作者单位:北京大学公共卫生学院毒理学院，北京1以x〕83 作者简介:魏雪涛(1969一)，男.甘肃人，副教授，硕士，主要从事免疫 毒理学研究。 养液，儿nks液等。 1.3 动物染毒和处理 将小鼠随机分为4组，每组5只。分 别为对照组(蒸馏水)，25，50和100mg/kg组。将五氯酚钠 一次性以灌胃方式染毒，分别在小鼠染毒后3，24和48h，处 死小鼠，取出脏器，剔除结缔组织和脂肪，吸净残留血液，称 重，进行各项指标测定。 1.4T淋巴细胞琦殖 处死小鼠，无菌取脾，制备成单个细 胞悬液，然后将细胞数调整至2x10‘个/耐。将每份细胞悬 液分2孔加入24孔板，每孔1司，其中一孔作为对照，另一孔 加入20川C冶nA(400拌以耐)做为刺激孔，将细胞放入5% COZ，37℃培养箱中孵育68h，取出加入MTT(5m以吨)50 四孔，继续培养4h，弃上清，每孔加入1血酸性异丙醇，吹打 均匀，在酶标仪上570nm 波长下比色。 1.5淋巴细胞增殖 方法同T淋巴细胞增值，所用刺激物 为25川LPS(400蒯ml)。 1.6 巨噬细胞吞噬功能 处死小鼠后将RPMll640完全培 养液Zd，注入小鼠腹腔，收集灌洗的液体，调整细胞数至5 xl04个/耐，将细胞悬液加入%孔培养板，每孔100川。将 巨噬细胞置入5%Cq，37℃培养箱中孵育Zh，取出后弃上 清，加入用RPMll640完全培养液稀释的中性红(50拌岁nil) 100川，再置于5%Cq，37℃培养箱中孵育30min，取出%孔 板，弃上清，每孔加入150川冲洗液，冲洗后弃去。再加入 100川溶解液，在721分光光度计上540nln 波长下比色。 1。7 巨噬细胞产生NO浏定 巨细胞收集同巨噬细胞吞噬 598 中国公共卫生2007年5月第23卷第5期 C几inJP.b王ic月比It而入肠夕2007今乞之.刀 入肠J 功能测定，收集细胞后，将细胞调整至lx10‘个/耐，加入24 孔培养板，每孔Inil，放入5%Cq，37℃培养箱中孵育Zh，取 出后弃上清，每孔重新加入1耐RPMll640完全培养液，同 时加入LPs(终浓度5产以而)，继续培养24h，收集培养上清， 用1耐培养上清与1耐GreiSS试剂混匀，于540nm波长下比 色。同时用亚硝酸钠配制标准曲线，计算培养上清中亚硝酸 盐氮含量。 1.8 统计分析 采用SPSS统计软件进行单因素方差分析。 2 结 果 2.1 一般状见 2.1.1不同剂量的五抓酚钠一次染毒3h对小鼠器官变化 的影响(表1) 一次染毒3h后，loomg/kg五氛酚钠剂量组 小鼠的脾脏和胸腺相对重量明显降低.与对照组比较差异有 统计学意义，而肝脏和肾脏相对重量与对照组比较差异无统 计学意义。50和25n官掩五氛酚钠剂量组小鼠脾脏、胸腺、肾 脏和肝脏的相对重量与对照组比较差异无统计学意义。 表 l 不同剂t组染毒3h后小鼠器官重t变化(x士:) 组 别 〔吨/(吨·bw)〕 对照组 五抓酚钠25 动物体重 (9) 22.6土0.9 22.7士1.1 22.7士1.0 22.6上1.1 脾脏相对重 (mg/9) 脚腺相对重 (mg/g) 肾脏相对重 5。77士0.78 4.52士1.21 15.32士1.21 ? ? ?? ? ? ， ? 5.35士0.61 3.74士0. 14.91土5.74 50 1oo 4.92士0.85 3.82士1， 15.73士1.36 4.65士0.66’ 3.02士0，99’ 肝脏相对重 (mg/g) 5644士4.64 54.28士4.59 51.6() 土3.26 57.70 士5.94 15.75士1.05 注:相对重=脏器湿重(mg)/体重(9);与对照组比较，p<0.05;，=5 2.1.2 不同剂量染毒24h后小鼠器官变化25，50和100 m岁kg五氯酚钠一次给予小鼠24h后，小鼠的脾脏、胸腺、肝 脏和肾脏的相对重要与对照组比较，差异无统计学意义。 2.2 五氛酚钠毒对小民免疫功能的影响 2.2.1 五氛酚钠对小鼠T淋巴细胞增殖的影响 25，50和 100mg/吨五抓酚钠染毒小鼠3，24和48h后，小鼠脾脏T淋 巴细胞的增殖能力均未受到影响。 2.2.2 五氯酚钠对小鼠B淋巴细胞增殖的影响(表2) 25 mg/掩剂量组染毒3h后，小鼠B淋巴细胞增殖能力受到抑 制，抑制率为46%，随着时间延长，染毒后24和48h时这种 抑制效应消失。50mg/吨剂量组染毒3h，也可见小鼠B淋 巴细胞增殖能力受到抑制，抑制率为46%，随着时间延长，至 染毒后24h，这种抑制效应依然存在，抑制程度减弱，抑制率 为35%，进一步观察染毒后48h这种抑制效应消失。100 mg/掩剂量组染毒3和24h，小鼠B淋巴细胞的增殖能力均 受到抑制，抑制率分别为38%和40%，随着时间延长到染毒 后48h，抑制效应消失。 表2 不同染毒剂t对小鼠脾脏B淋巴细胞增殖的影响‘士:) 表3 五抓酚钠对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(x土，) 组 别 吸光度增加值(A值) t吨/(kg·bw)] 3h 24h 48h 对照组 0.13士0.03 0.17士0.010.17士0.03 五抓酚钠25 0.12土0.04 0.16士0.04 0.17土0.02 50 1oo 0，10士0.03 0.08土0.03份. 0.18士0.02 0.17士0.02 0.16士0.05 0.16士002 注:与对照组比较.番.P<0.01;n=5 表4 五氯酚钠对小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO的影响(x士，) 组 别 吸光度增加值(A值) 〔叫/(掩·bw)] 3h 24h 48h 对照组 0.272士0.1770.150土0.0180.184土0.047 五氛酚钠25 0.165士0.1300.155士0.1070.179上0.042 50 0，151土0.0450.162土0.0780.191士0.039 I0() 0.092士0.040，0 098士00470.166士0.026 组 别 (mg/(掩·bw)〕 吸光度增加值(A值) 24h 48h 对照组 0，13士0.04 0.20土0.05 0.14士0.04 五氯酚钠25 0.07士002.0.20士0.03 0.17士0.02 50 0.07士0.04’0.13土0.04二 0.14士0.02 10() 0.08士0.03.0.12土0.02’.0.16士0.06 注:与对照组比较。尸<。.05，，.p<0.01;n=5 2.2，3 五氯酚对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(表3) 本 研究发现，不同剂量五氯酚钠染毒组在3，24和48h时间点， 只有loom以掩组染毒3h后，小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能 受到抑制，而其他时间点和剂量均未见小鼠腹腔巨噬细胞吞 功能受到抑制。 2.2.4 巨噬细胞产生NO的影响(表4) 由试验结果可见， 在染毒所用的3个剂量中，只有loom以吨五抓酚钠在给药3 h后抑制了巨噬细胞分泌NO的能力，使得培养液中亚硝酸 盐氮含量减少，其他时间点和剂量均未观察到巨噬细胞生成 NO的能力受损。 注:与对照组比较，‘p<0·05;，=5 3 讨 论 looom以kg五抓酚钠一次给小鼠3h后，脾脏和胸腺重 量明显降低.小鼠的B淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬及巨噬 细胞分泌NO均受到抑制，表明五抓酚钠对免疫系统有抑制 作用。而T淋巴细胞增殖未受影响，提示五氛酚钠对免疫系 统产生有害作用时，有一定的选择性。五氯酚钠给药3h后， 巨噬细胞10Om以kg组出现功能抑制，而脾脏B淋巴细胞增 殖有25和50mg/掩就出现抑制，表明B淋巴细胞对五氯酚 钠毒性敏感。五氯酚在哺乳动物细胞色素P450徽料体混合 功能氧化酶参与代谢，转化形成四抓氢酿(TCHQ)和四氛儿 茶酚(cl4cAT)“一目。四抓氢酿对免疫细胞有损伤作用，但是 五抓酚在体内转化成四抓氢酿需要一定的时间。五抓酚 (Pc)在肝组织中经过代谢，产生的未结合四氛氢酿于摄入 PCp后4h达到高峰，其后下降排出(ll〕，则达到脏器(脾脏， 腹腔)的时间必然还要延迟。给予B6C3F雄性小鼠300m以 (掩·d)的四氯氢酿2周后肝细胞核DNA的8一OH‘dG 比对照 组明显增多，但是一次注射20或者50m以吨的四氛氢在6 中国公共卫生2007年5月第23卷第5期 C侧.JPubl扮月山仙 人白，2即7V汉.23 八七.5 599 和24h均未发现8一OH中dG的含量增加t91，提示四氯氢酿在体 内的作用需较长时间。因此，在本研究中，染毒3h后观察到 的免疫细胞功能的变化，可能是五氯酚钠本身的直接作用。 [6〕 参考文献 〔1〕 5川erJP.Pentac场fo呻hen习[Jl.Mutatk价R， h，1991，257: 27一43. tZ) 王晓红.钱松，杨润，等.人体五抓酚环境接触量的研究【J].环境 与健康杂志，1995，15(1):24一26. 〔3] 1朋gD，Mueller一Ruch抽ltaw.Human l抑p比州ereac ti讨tyaf- ，ter 加 碗m exlx翔叮eto technia公即d舰囚州因 启mdep吧n- 恤抽如拍pheno IJ].T公icoh盯，1991，70:271一282. t4) Dan讨V，Huber W，物uer K，et司.Imp山red认饭t，】帅p卜父yte r臼户用ses inPatientswithelevat记沐ntac址)lomPhenolb】以月】创e卜 [J〕.户此hivesofEnvimnmentalH司th，1995，50(4):287一292. (5) R曲ellLE，月刀der幻nRS.Hydr昭enPeroxidep欢心uct咖 明d肠cte- ricid目.divity运pronep抢叨ph昭ocytesub一卯pulati毗 1~ fun- [91 dd.hete加dit.州面w访gexlx娜Ure协p.，切c卜b卿h~【J]，P日. lution andEn、，n习”.en记 Issues ，1997，44(1):69. B苗nU.从BlancGA.Mob违zat沁nofpontachlorohe.日切 砂u- 切t玩沁nes一transferase ~ celltllartoxidty【J]Pe‘ddeBk卜 chem改寸朋dPhy，沁城盯，1996，54:65一72， LinPH，W越dyanathas，POIJackGM，et日.D叱加etryofc油nnat- edqulr‘们emetah走tesofpen诞hloroPb臼拍linthe石ve份ofra切助d 面Ce肠，月ulx翔m.叫叭甘..entofp拍t山 司ducts【Jl.介石.软叮 即dApp卜edPharmacolq口，1997，145:339一4()8. Me坛的目2，w山~ MP，KenyDE，etal.Meta场地mofor- 9明c刊如均脱p.ticides:the mleofhtnnan 。巾戈肠刀meP450 3A4 [J]，Ch日rr‘店phere，1996，33(4):75，一769.卜 〔怡hlhausM，人知旧切dtE，Ap州 KE.The碑ntach如mPh枷 】 meta场litetetra刊七ra一p一hy山闪uinme induces theforma tionofs 一妙山心蕊y一Zd以习谬日以m臼盆neinliver DNAofm目eB6C3班 而ce [Jl.丁b‘。lq汀Letters，1994，74(3):265一2科. 收稿日期:2006一08一16 (宋艳萍编校) 文章编号:l0()1一0580t20()7l05一0599一2 中图分类号:R155.3十3 文献标志码:A ·【实验研究】 束缚应激对小鼠全血铁锌钙镁含量影响’ 膝文锋，施丽飞，侯殿东，孙卫民，刘辉 摘 要:目的 观察束缚应激后小鼠全血中铁、锌、钙和镁含量的变化，研究束缚应激对全血4种元素的影响和 规律。方法 建立小鼠束缚应激模型，原子吸收分光光度法测定小鼠全血中铁、锌、钙和镁的含量。结果 对照组小 鼠全血铁、锌、钙、镁含量分别为(391，20土16.01)，(5.90土0.56)，(59.44士10.71)，(45.12士3.35)阔司;实验组小鼠 全血铁、锌、钙、镁含量分别为(351.23士35.22)，(5.05士0.70)，(59.65士7.40)，(43.99士4.31)蒯tnl。与对照组比 较，接受应激的小鼠全血中铁、锌含量显著降低(P<0.05)，钙含量略有升高，镁含量降低，但差异均无统计学意义(尸 >0.05)。结论 束缚应激可使小鼠全血铁、锌含量显著降低;微量元素铁、锌与束缚应激反应之间存在一定的联系。 关键词:应激;铁;锌;钙;镁 Effl兄tor到，t花intstr..onwholebll阅d伽 扭ntsorFe、Zn、Ca、andMginra妇 TENG环，e”一不沉9，5爪口L公州，月OU〔万a月- 而ng，etal.乙山知m如勺人公过ical肠11卿，DalianM疏班icalUn￡二 fty(Dal必nll6027，以ina) A城伪d:0讨eCtive T。。bservethe cha呢esofwholebl以泪con tents ofFe、Zn、Ca andMginra切underrestraint stress ，andatudytheef介犯tandr翎川arityofrest扭int:tr已洛on wholebl以月con tentsoffourdetnents.Methods Restraint- ，tr已以记m司elinrats、.a，留tab血hed，and wholeblcx记contentsofFe、Zn、Ca andMginratswere detenninedbyAAS.Re- .川tS Wholebl以泪contentsofFe、zn、Caand碗 inratsofcontrolgro叩wereasfoU0ws伽以而):(391.20土16.01)，(5.90 土0.56)，(59.44士10.71)，(45.12土3，38);ine即erimentalgroupwere asfoUows(拌9/Inl):(351.23士35.22)，(5.05士 0，70)，(59.68士7.40)，(43.99士4.31).Thewha】ebl以月contentsofFe、Zndecr‘曰妇519苗ficantlycomparedwiththecon- t拍lgro叩(P<0.05)，theconten招ofCaincrease dslighilyandthecontentsofMgdeCr砚目刃，buttherewas nosig‘ficantde- viat1On(尸>0.05).CO讹lusi仙 Restraintstress can makewh日ebl仪泪con tentsofFe、zn decr侧赴祀;there issom eassl又iati川 玩tweentraceelern entSFe、zn andrest面nt str已洛. K叮words:str.洛;Pe;Zn;Ca;Mg 应激是机体对各种外界应激原作用的反应，适度的应激 是机体保护机制的一部分，有益于健康。但过度的应激往往 成为疾病的诱因[l]。研究证实，应激能够影响动物和人体的 免疫功能伍习。机体免疫系统功能的紊乱又是感染性疾病、 肿瘤等发生或恶化的直接原因t’.习。实验研究表明，应激可 引起机体细胞因子、蛋白、酶等的变化t6，7〕，而有关应激与元 素之间关系的研究较少。铁、锌、钙和镁是人体中的必需元 素，在人体生理生化过程中起着重要作用。因此，研究应激与 元素之间的关系有重要意义。原子吸收光谱法具有灵敏度 高、选择性好、精密度高、分析速度快等优点。本文采用原子 吸收光谱法测定了束缚应激后小鼠全血中铁、锌、钙和镁4种 元素的含量，旨在探讨束缚应激对全血中元素的影响。 1。1 材料与方法 动物与分组 20一259，雌雄兼用， 选用32只健康c57BL/6纯系小鼠，体重 随机分为对照组和束缚组，每组16只。 .基金项目:国家自然科学基金(30370484) 作者单位:大连医科大学检验医学院，大连n6027 作者简介:膝文锋(1963一)，男，辽宁大连人，副教授，硕士，主要从 事分析化学方面研究。 通讯作者:刘辉 1.2 应漱模型的制备 应激模型的制备按文献【8]进行。将 小鼠装入带有通气孔的可以限制其各个方向的束缚器中，室 温下维持12h。正常对照组小鼠留置原饲养笼中正常饲养。 实验期间2组小鼠均禁食禁水。