杜仲叶绿原酸的提取及精制

杜仲叶绿原酸的提取及精制 刘军海　裘爱泳　 (江南大学食品学院　江苏无锡 214036) 　　【摘要】　对杜仲叶绿原酸的提取进行研究。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 　采用乙醇为溶剂, 经正交实验方法对杜仲叶绿原酸的提取 进行研究, 并采用大孔树脂对其精制。结果　乙醇提取杜仲叶绿原酸的最佳工艺条件为: 温度 80℃, 料液比 1∶ 10, 乙醇浓度 60% , 提取时间 2 小时。所筛选的N KA 2Ê 树脂是吸附绿原酸的理想吸附剂。结论　适宜于产业化 生产。 【关键词】　杜仲叶　绿原酸　提取　精制 【Abstract】　Objective 　To observe the ex traction and purificat ion of ch lo rogen ic acid from leaves of Eucomm ia u lmo ides. M ethods　A cco rding to o rthogonal design, to ex tract ch lo rogen ic acid from leaves of Eucomm ia u lmo ides w ith ethano l as so lven t, and to purify it w ith resin. Results　Op tim al condit ions fo r the ex traction of cho lo rogen ic acid w ere ob tained: the leaves ex tracted by 60% ethano l at 80℃ fo r 2h w ith a rat io (m ateria l to so lven t) of 1∶10. T he selected N KA 2Ê resin w as op tim al abso rben t to purify ch lo rogen ic acid. Conclusion　 It w as su itab le to be used in industry. 【Key words】　Eucomm ia u lmo ides leaf　Ch lo rogen ic acid　Extraction　Purificat ion 　　　　中图分类号: R 282. 4　　　文献标识码: A 　　绿原酸是一种重要的生物活性物质和化学试 剂。在我国 170 种有抗菌消炎作用的中成药中均含 有绿原酸的成分。它具有具有利胆、抗菌、抗病毒、降 压、增高白血球及兴奋中枢神经系统等多种药理作 用[1 ] , 是保健品、食品、药品、化妆品等工业的重要原 料。目前我国提取绿原酸多以金银花为原料, 其绿原 酸提取成本高, 导致目前应用的绿原酸多从国外进 口。研究表明, 杜仲叶中含有 1%～ 5. 5% 绿原酸, 且 杜仲叶价格仅占金银花的 1ö20～ 1ö40。近年来, 我国 杜仲叶利用量增长较快, 年采收数量达 400 万吨以 上, 但利用率仅占采收叶的 10%～ 20% [2 ]。鉴于巨大 的杜仲叶资源未充分利用, 从廉价的杜仲叶中提取 分离绿原酸具有巨大的社会效益和经济意义。本文 主要探讨以乙醇为溶剂从杜仲叶中提取分离绿原酸 等生物活性物质的方法, 旨在开发和利用我国丰富 的杜仲叶资源。 1　材料与方法 1. 1　材料与仪器　杜仲叶购于湖南某地区, 为秋后 落叶, 粉碎, 60℃下烘干备用。绿原酸 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品 (购于中 国药品生物制品鉴定所) , 其他试剂皆为 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯。AB 2 8, S28, N KA 29, N KA 2II (南开大学化工厂提供) ; DA 201, H Z816, H Z841, H Z801 (上海华震科技贸易 公司提供) ; U n ic22100 型紫外可见光分光光度计 (尤 尼柯 (上海) 仪器有限公司) ; 365nm 紫外分析仪 (上 海科艺光学仪器厂) ; R E252AA 真空旋转蒸发器 (上 海亚荣生化仪器厂) ; SH Z2III 型循环水真空泵 (上海 亚荣生化仪器厂) ; SC202200 型电热恒温干燥器 (上 海医疗器械五厂) ; 超级恒温水浴锅 (上海医疗器械 五厂)。 1. 2　树脂预处理　树脂分别用去离子水溶胀后浮 选, 然后用 1mo löL 的N aOH 溶液浸泡 4 小时, 用去 离子水洗至中性, 然后用 0. 5mo löL HC l 浸泡 24 小 时, 再用去离子水洗至中性。用 70% 乙醇浸泡 24 小 时, 不断搅拌, 用去离子水洗至无白色浑浊现象, 无 醇味为止。用去离子水浸泡待用。 1. 3　绿原酸含量测定　采用纸层析2紫外分光光度 法[3 ] , 测定波长为 326nm , 标准样品的回归方程为C = 18. 3361A - 0. 7844, r= 0. 9999。精确量取试验液 50Λl, 点于新华 1 号层析纸上, 晾干, 用正丁醇∶乙酸 ∶水= 4∶1∶5 上层清液上行展开至 13cm 处, 取出 晾干, 在紫外光下观察并画出与标准品具有相同R f 和颜色的蓝色荧光带, 剪下, 置于带塞试管中, 精密 加入 50% 甲醇溶液 10m l, 振荡, 静置 24 小时, 同时 做空白, 在 326nm 处测定吸光度, 粗绿原酸溶液的浓 7 2004 年第 44 卷第 32 期山东医药 度由 下 式 计 算: 绿 原 酸 溶 液 浓 度 (m göm l) = (18. 3361A - 0. 7844)×稀释倍数ö1000。 1. 4　大孔树脂对绿原酸的吸附分离特性研究[4 ] 1. 4. 1　吸附率测定　准确称取预处理好的湿树脂 2g, 装入 150m l 的磨口三角瓶中, 精密加入一定量的 吸附原液, 盖紧瓶塞, 在 (25±0. 5)℃的恒温水浴振 荡器上振摇 24 小时。充分吸附后, 过滤, 测定吸附液 中绿原酸的浓度, 按下式计算吸附率: E% = C0- C eö C 0×100% 注: 式中 E% 表示吸附率; C 0 表示原液中 绿原酸浓度 (m göm l) ; C e 表示吸附液中绿原酸浓度 (m göm l)。 1. 4. 2　解吸率测定　取上述吸附饱和的树脂, 精密 加入一定体积 95% 的乙醇溶液, 置恒温水浴振荡器 上振荡 24 小时, 过滤, 按下式计算解吸率: 解吸率 (% ) = C1V 1 (C 0- C e)×V ×100%。注: 式中 C1 表示解吸 液中绿原酸的浓度 (m göm l) ; V 1 表示解吸液的体积 (m l) ; V 表示吸附液体积 (m l) ; C 0、C e 意义同前。 1. 4. 3　树脂的吸附动力学特性测定　根据吸附率 和解吸率的测定结果, 选择较理想的树脂测定吸附 速率。本文选择N KA 2II, H Z816 做吸附动力学特性 研究。 1. 4. 4　树脂吸附供试品溶液的制备　称取粉碎的 杜仲叶, 以 70% 工业乙醇为浸提剂, 采用 1∶12 (1∶ 6, 1∶4, 1∶2) 的料液比, 在 50℃下回流提取 3 次, 每 次 2 小时, 合并浸提液, 抽滤, 真空浓缩后得到杜仲 叶绿原酸粗提液即为吸附原液。 2　结果与讨论 根据单因素试验结果, 选用提取时间 (A )、料液 比 (B )、提取温度 (C)、乙醇浓度 (D ) 作为考察因素, 以杜仲叶绿原酸提取率作为考察目标, 选用L 9 (34) 正交表实验。因素水平见表 1。 依照正交实验序号, 随机取一定数量的去杂、烘 干粉碎的杜仲叶, 用四分法取样, 每份 5g, 置于 250m l 的平底烧瓶中, 用乙醇溶液回流提取, 提取液 过滤, 滤液用去离子水定容至 250m l, 摇匀, 测定绿原 酸浓度, 实验结果见表 2。由表 2 可见按极差的大小 决定因素的主次顺序为B > C > D > A , B 是主要因 素, 取含量最高水平B 2; C 和D 是居中因素, 取含量 最高水平C 3 和D 3, A 是次要因素, 取含量最高水平 A 2, 从而确定最优工艺参数为 A 2B 2C3D 2, 即温度 80℃, 料液比 1∶10, 乙醇浓度 60% , 浸提时间 2 小 时。大孔树脂对杜仲叶绿原酸的吸附分离, 采用 8 种 树脂对杜仲叶绿原酸粗提液进行处理, 在初始浓度 为 3. 11m göm l 的条件下, 测定其吸附后平衡浓度 (即 树脂充分吸附后, 吸附液的剩余浓度) , 得到不同树 脂对绿原酸的吸附率, 结果见表 3。由表 3 可以看出, 仅从吸附率看, AB 28, S28, N KA 2Ê , H Z816 四种树 脂的吸附效果较好。 在 (25±0. 5)℃下, 用 95% 乙醇浸泡 24 小时后, 对这 4 种树脂进行解吸, 4 种树脂的解吸率测定结果 见表 4。由表 4 可以看出, 树脂AB 28 虽然有很高的吸 附率, 但解吸十分困难, 因此不符合筛选要求。S28 树 脂吸附率较高, 但解吸率太低, 也不符合筛选的要 求。在树脂吸附分离过程中既要求树脂有较高的吸 附率, 又要求树脂具有较高的解吸率。综合分析, N KA 2Ê 和H Z816 树脂较理想。因此选择较为理想 的N KA 2Ê 和H Z816 树脂进行静态动力学实验。静 态动力学曲线见图 1, 绿原酸的吸附率和时间的关系 见图 2。从静态吸附动力学曲线 (图 1)可以看出, 两种 树脂对绿原酸的吸附为快速平衡型。在 4 小时内基 本达到平衡, 起始阶段吸附率都较大, 达到平衡的时 间短。N KA 2Ê 的吸附率始终优于H Z816。 综合以上分析可知,N KA 2Ê 树脂对绿原酸具有 良好的静态动力学特性, 较其他树脂更适宜于杜仲 叶绿原酸提取分离的产业化生产。 表 1　各考察因素水平 水平 A (h) B C (℃) D (% ) 1 2 3 1 2 3 1∶6　 1∶10 1∶14 40 60 80 40 60 80 表 2　L 9 (34)正交实验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 和结果 实验序号 A (h) B C (℃) D (% ) 绿原酸提取率 (% ) 1 1 1 1 1 0. 602 2 1 2 2 2 1. 170 3 1 3 3 3 0. 959 4 2 1 2 3 0. 803 5 2 2 3 1 1. 257 6 2 3 1 2 1. 032 7 3 1 3 2 1. 119 8 3 2 1 1 0. 730 9 3 3 2 3 0. 762 K1 2. 731 2. 524 2. 364 2. 621 - K2 3. 092 3. 546 2. 735 3. 321 - K3 2. 611 2. 492 3. 335 2. 472 - k1 0. 910 0. 841 0. 788 0. 874 - k2 1. 031 1. 182 0. 912 1. 107 - k3 0. 870 0. 831 1. 112 0. 831 - R 0. 161 0. 351 0. 324 0. 276 - 8 2004 年第 44 卷第 32 期山东医药 表 3　各种树脂对杜仲叶绿原酸的吸附率 树脂种类 平衡浓度 吸附率 (% ) AB28 0. 00 100. 00 N KA 2Ê 0. 57 81. 67 S28 0. 75 75. 88 H Z816 0. 81 73. 95 H Z841 2. 03 34. 73 H Z801 2. 19 29. 58 N KA 29 2. 65 14. 79 DA 201 2. 36 24. 12 表 4　95% 乙醇对 4 种树脂上绿原酸的解吸率 　种类 解吸前吸附 绿原酸量 (m g) 解吸液浓度 (m göm l) 解吸率(% ) AB28 77. 86 0. 00 0. 00 N KA 2Ê 63. 50 2. 53 79. 69 S28 59. 00 1. 06 35. 93 H Z816 57. 50 1. 75 78. 21 图 1　两种树脂的静态吸附动力学曲线 图 2　两种树脂吸附率和时间的关系 3　结论 由以上分析结果可知, 杜仲叶绿原酸的乙醇提 取工艺最佳工艺条件为温度 80℃, 料液比 1∶10, 乙 醇浓度 60% , 提取时间 2 小时。N KA 2Ê 对绿原酸的 吸附量最大, 且易解吸, 是一种理想的绿原酸的吸附 剂, 适宜于绿原酸产业化生产。 4　参考文献 1. 国家医药管理局中草药情报中心站 1 植物药有效成分手册. 北京: 人民卫生出版社, 1986, 209～ 210. 2. 孙凌峰. 杜仲树叶资源的开发利用. 林产化工通讯, 1998, 32 (4) : 33 ～ 55. 3. 钱骅. 杜仲叶有效成分提取工艺的研究 1 中国野生植物资源, 1999. 18 (1) : 32～ 34. 4. 潘见, 陈强. 大孔树脂对葛根黄酮的吸附分离特性研究 1 农业 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 学报, 1999, 15 (1) : 55～ 58. (2004207219 收稿) ·专科报道· 经阴道无张力尿道悬吊术 5 例手术配合体会 黄敬爱　 (山东大学齐鲁医院　250012) 　　自 2003 年以来, 我院共为 5 例患者施行经阴道无张力尿 道中段悬吊术, 效果满意。现将手术配合体会报告如下。 临床资料: 本组 5 例压力性尿失禁患者, 临床表现为腹压 增加后尿液不自主自尿道流出。确诊后均在硬膜外麻醉下行 经阴道无张力尿道中段悬吊术 (TV T ) 并获成功, 患者术后 3 日出院, 控尿良好。 术前准备: ①做好患者的心理护理, 说明 TV T 是治疗女 性压力性尿失禁的安全、有效、微创的手术方法, 使其消除紧 张情绪, 愉快接受手术。②行会阴备皮及阴道冲冼, 有会阴部 湿疣者用硼酸等药物治疗。③准备小手术器械包 1 个, 阴道单 叶拉钩 2 个, 70°膀胱镜 1 套, 截石位物品 1 套, 痔被单 1 个, TV T 材料 1 套。 手术配合: ①麻醉成功后, 患者取截石位, 常规消毒铺巾。 ②在耻骨联合上方两指离腹中线左右各两指宽处分别作 2 个 1cm 的小切口。③在距尿道外口 1. 5cm 处纵形切开阴道前壁 1cm , 用小蚊氏钳在尿道两侧仔细分离出 0. 6cm 大小的腔隙。 ④将导杆插入膀胱内, 助手用力将膀胱推向左侧。术前右手将 穿刺针经阴道尿道右侧的腔隙切口进入, 越过耻骨, 左手推动 助推器, 将穿刺针由左侧皮肤切口穿出。⑤拔出推注杆及尿 管, 放入 70°膀胱镜, 推注约 250m l 生理盐水, 确认穿刺针在膀 胱外后, 拔出膀胱镜, 术者由皮肤切口拔出穿刺针, 将吊带一 端拉出皮肤外。⑥排空膀胱, 导引杆将膀胱推向右侧, 同样的 方法将穿刺针从腹壁左侧切口穿出。⑦膀胱注液 250m l, 用 70°膀胱镜观察, 如无损伤将穿刺针拔出。⑧调节吊带两端的 松紧度, 用剪刀剪去塑料套及皮肤外多余的吊带。⑨用 4- 0 可吸收线缝合阴道壁切口及皮肤切口, 尿道内置 18 号三腔气 囊尿管, 阴道内放置碘伏阴道纱条。 体会: ①护士应时对患者讲解治疗效果及注意事项, 使其 以最佳心态接受手术。②此方法适合于中老年女性、超重女性 及曾行其他手术治疗的尿失禁患者。③膀胱针应用甲醛薰蒸 和 2% 戊二醛浸泡, 用前应用蒸馏水反复冲洗, 以免药液刺激 组织。④女性压力性尿失禁通常是由于盆底部肌肉肌力减弱 所致, 绝大多数妇女在产后出现, 随年龄增长女性雌激素分泌 降低, 尿道控尿能力减退, 尿失禁的症状逐渐加重。因此生产 后妇女在产后短期内应注意休息, 扎腹带, 防止内脏下垂, 减 少重体力劳动, 同时应长期坚持加强盆底肌功能锻炼。 9 2004 年第 44 卷第 32 期山东医药